MAGE-C1、MAGE-C2 在乳腺癌组织中表达水平及意义

陈慰慰，袁小兵，许 伟

（南通大学附属如皋医院，江苏省如皋市人民医院普外科，如皋 226500）

流行病学研究证实，2010～2017 年我国乳腺癌的发病率高达283～482/10 万人［1，3］。临床乳腺癌的发病率可以显著降低乳腺癌患者的生活质量，提高乳腺癌患者的疾病发展率［3，4］。在研究乳腺癌发病机制的过程中，发现各种细胞因子的表达可能影响乳腺癌的恶性程度，进而促进乳腺癌的发生发展。黑色素瘤抗原基因（MAGE）是睾丸相关因子家族成员，其能够通过激活癌细胞内的肿瘤信号通路，提高乳腺导管上皮细胞核DNA 的转录激活速度，进而促进乳腺癌的临床病理特征的进展［4］。部分研究人员认为，MAGE 在乳腺癌和肝细胞癌中的表达增加与乳腺癌、肝癌患者的生存密切相关［6］，但对于MAGE 的表达与乳腺癌病情发生发展的关系研究不足。为了揭示MAGE 的表达与乳腺癌病情发生发展的关系，为临床上乳腺癌患者的诊疗提供理论方面的参考，本次研究选取2017 年1 月至2018 年4 月在我院治疗的乳腺癌患者78 例，探讨了MAGE 不同亚型在乳腺癌中的表达情况，并分析了MAGE 与乳腺癌患者临床病理特征的关系，相关报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017 年1 月～2018 年4 月在我院治疗的乳腺癌患者78 例（乳腺癌组），年龄30～70 岁，平均年龄46.20 岁，纳入标准：（1）均经病理组织学确诊；（2）女性患者；（3）术前未行放化疗等治疗；（4）临床病理资料完整；（4）患者及家属知情同意。排除标准：（1）合并有其他系统恶性肿瘤；（2）临床病理资料欠缺。同时选取乳腺良性病变患者70 例作为对照组，年龄31～69 岁，平均年龄45.50 岁。

1.2 免疫组化染色 室温下采用石蜡进行连续切片，脱蜡至水后采用H2O2孵育10min，再用磷酸盐缓冲液冲洗3 次，每次3～5min，利用8%的蛋白粉封闭液（商品名：BSA 购自南京博奥生物科技公司）封闭2h，倒去封闭液后加入一抗（兔来源 浓度1：1000-1500），4℃冰箱过夜，再用磷酸盐缓冲液冲洗3 次，每次3～5min，加入二抗（鼠来源 1：400-500），室温孵育20～30min，磷酸盐缓冲液冲洗3 次，每次3～5min，加入辣根酶或碱性磷酸酶的标记物，室温孵育10min，磷酸盐缓冲液冲洗3 次，每次3～5min，滴加显色剂（DAB 购自南京博奥生物科技公司），复染，脱水，封片。

1.3 结果判断 MAGE-C1、MAGE-C2 主要表达于胞质，部分可表达于胞核；采用半定量积分方法，染色强度：无着色：0 分、淡黄色：1 分、棕黄色：2 分、棕褐色：3 分；阳性细胞比例：＜5%为0 分、6%～10%为1 分、11%～20%为2 分、21%～50%为3 分、＞50%为4 分。染色强度和阳性比较比例得分之和，≥3 分为阳性表达。1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0 进行统计分析，MAGE-C1、MAGE-C2 蛋白阳性表达率等比较使用χ2检验，MAGE-C1 和MAGE-C2 相关性采用Spearman 秩相关分析。检验水准α为0.05。

2 结果

2.1 乳腺癌组和对照组MAGE-C1 和MAGE-C2 蛋白表达 乳腺癌组MAGE-C1 和MAGE-C2 蛋白阳性表达率分别为62.82%和44.87%，明显高于对照组（P<0.05），见表1 和图1。

表1 乳腺癌组和对照组MAGE-C1和MAGE-C2蛋白表达

图1 免疫组化染色图（×200；A：对照组MAGE-C1阴性表达；B：对照组MAGE-C2阴性表达；C：乳腺癌组MAGE-C1阳性表达；D：乳腺癌组MAGE-C2阳性表达）

2.2 MAGE-C1 和MAGE-C2 蛋白表达与乳腺癌临床病理特征关系 组织学分级Ⅲ级MAGE-C1 蛋白阳性表达率明显高于Ⅰ级和Ⅱ级（P<0.05）；组织学分级Ⅲ级、浸润性导管癌MAGE-C2 蛋白阳性表达率明显高于Ⅰ～Ⅱ级、浸润性小叶癌和乳腺髓样癌（P<0.05）。见表2。

表2 MAGE-C1和MAGE-C2蛋白表达与乳腺癌临床病理特征关系

2.3 乳腺癌MAGE-C1 蛋白与MAGE-C2 蛋白表达相关性分析 乳腺癌MAGE-C1 蛋白与MAGE-C2 蛋白表达呈正相关（rs=0.427，P<0.05），见表3。

表3 乳腺癌MAGE-C1蛋白与MAGE-C2蛋白表达相关性分析

3 讨论

环境因素和遗传因素影响乳腺癌的发生，促进乳腺癌临床病理特征的进展展［7，8］。乳腺癌作为生殖系统常见的恶性肿瘤，其生存期不到46 个月，包括综合治疗后3 年内病死率仍可超过25%［9，10］。另一方面，临床研究缺乏有效的生物活性血清分子对乳腺癌进行早期诊断，本次研究揭示了肿瘤相关蛋白的表达阳性率问题，可以为揭示乳腺癌的发病机制，为乳腺癌的靶向免疫治疗提供依据，同时也可以为乳腺癌的早期高危人群的血清学筛查提供依据。

生物制剂浓度的变化对促进癌细胞早期、中期和晚期核异质性的发展起着重要作用，它能影响患者的生存和预后，调节肿瘤细胞的生物学特性。MAGE-C1 主要存在于睾丸组织、胚胎组织及部分神经组织中，其对于HIPPO 信号通路的激活增加乳腺癌上皮细胞DNA 转录的风险，增强了启动子并激活了增强子，提高乳腺导管上皮细胞的浸润粘附能力［11］。MAGE-C2 主要存在于部分神经组织及间质组织中，其能够与乳腺癌细胞膜内的转录基因的结合，促进其甲基化的修饰，致使乳腺癌上皮细胞错配修复能力下降，癌基因突变风险增加［12-13］。

本研究通过探讨乳腺癌病灶组织中MAGE-C1、M A G E-C 2 的表达分析可见，在病例组患者中，MAGE-C1、MAGE-C2 的表达阳性率明显升高，高于乳腺良性病变组织，差异明显，提示了MAGE-C1、MAGE-C2 的高表达均能够参与到乳腺癌的病情进展过程。通过收集各种相关文献，笔者认为这主要是由于MAGE-C1 和MAGE-C2 的几方面作用［14］：（1）MAGE-C1 的上升能够导致乳腺癌细胞内肿瘤相关因子表达浓度的上升，增加了癌细胞的转录激活程度；（2）MAGE-C2 的表达上升能够导致癌细胞内AKT 或者NF-KB 信号通路的激活，增加了乳腺癌细胞启动子或者增强子的上调程度。 易彤波等［15］研究者也认为，MAGE-C 在乳腺癌患者中的阳性表达率高于平均水平，尤其是肿瘤负荷明显或转移率高的患者。通过免疫组化染色分析研究可见，在乳腺癌细胞异型性较为明显的区域，MAGE-C1、MAGE-C2 的染色程度可进一步的加深，提示MAGE-C1、MAGE-C2 的表达可能影响到了乳腺癌细胞的形态。乳腺癌相关指标与临床病理特征的相关性研究在探讨乳腺癌相关指标与临床病理特征相关性的过程中，发现在组织学分级较晚的患者中，MAGE-C1 的表达明显上升，而在组织学分级较晚或浸润性导管癌的患者中，MAGE-C2 的表达阳性率可进一步的上升，提示MAGE-C1、MAGE-C2 的表达与乳腺癌患者的临床病理特征的病情进展紧密相关，这主要由于二者的表达阳性率的上升，能够导致乳腺癌细胞排列极性的改变，提高了癌细胞的组织学分级。但部分研究者还认为MAGE-C1、MAGE-C2 的表达与乳腺癌患者的临床分期或者淋巴结转移有关［16］，本次研究并未相关结论，考虑可能与相关细胞因子的检测灵敏度的差别有关。最后本研究发现，乳腺癌MAGE-C1 蛋白与MAGE-C2 蛋白表达呈正相关，提示了二者在促进乳腺癌的病情进展过程中可能发挥了一定的协同作用。

综上所述，在乳腺癌患者中，MAGE-C1、MAGE-C2的表达阳性率可明显的上升，同时M A G E-C 1、MAGE-C2 的表达与乳腺癌患者的临床病理特征密切相关。在后续的研究中我们将继续探讨MAGE-C1 和MAGE-C2 在乳腺癌中的表达及其与临床预后的关系。