CyclinD1 在乳腺癌中的表达及其与雌激素受体的关系

左志博 邬万新 李鑫 张琳 杨宏杰 汪静宇 胡少青

乳腺癌是世界上第二常见的癌症类型，在女性中发病率最高。乳腺癌尽管在分子基础方面已经取得了很大的进展，治疗方式也有了很大的改进，但仍有相当数量的肿瘤会复发和转移。在过去的几年中，关于乳腺癌细胞生物学行为的研究都集中在针对治疗药物敏感性的基因调控上[1]。在许多肿瘤中发现了细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的扩增，影响了细胞周期调控、扰乱细胞周期、促进生长和癌变。CyclinD1 是恶性肿瘤生物学行为的关键因素，促进肿瘤的侵袭性和高增殖活性[2]。本次研究旨在分析在CyclinD1 在乳腺癌中的表达水平以及与雌激素受体（estrogen receptor，ER）的关系。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019 年9 月至2020 年9 月嘉兴市第一医院手术切除的乳腺癌组织标本61 份，患者年龄30～88 岁，平均年龄（55.38±10.62）岁；术前未接受过放化疗等新辅助治疗；经病理确诊为乳腺浸润性癌；有完整的临床病理资料。

1.2 方法 采用免疫组织化学染色法检测乳腺癌中CyclinD1 的表达，选用Roche Benchmark XT全自动免疫组织化学仪。CyclinD1 抗体（SA38-08，1∶100）购自北京中杉金桥公司。本次研究用扁桃体组织作为阳性对照，以磷酸盐缓冲溶液代替一抗作为阴性对照。

1.3 判定标准 对于CyclinD1 的免疫组化结果判读采用标准化免疫反应评分（immunoreactive score，IRS）[3]。染色强度和染色肿瘤细胞百分比乘积即为IRS。染色肿瘤百分比分为5 个等级：0%为0 分；1%～10%阳性为1 分；11%～50%阳性为2 分；51%～80%阳性为3 分；＞80%阳性为4 分。染色强度分为4 个等级：阴性为0 分；弱染色为1 分；中等染色为2 分；强染色为3 分。将两个值相乘，所得IRS 得分在0 和12 之间，将IRS≥6 分设定为高表达，IRS＜6 分设为低表达。

1.4 统计学方法 采用SPSS 19.0 统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差（）表示。计量资料比较采用t检验；计数资料比较采用χ2检验。设P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CyclinD1在乳腺癌组织中的表达情况 61份乳腺癌组织中，根据IRS 评分结果，呈CyclinD1 低表达33 份，低表达率为54.10%，呈CyclinD1 高表达28 份，高表达率为45.90%。CyclinD1 在乳腺癌组织中的表达见封三图3。

图3 CyclinD1在乳腺癌组织中的表达（免疫组织化学染色，×400倍）

2.2 CyclinD1 在乳腺癌组织中的表达与ER 及临床病理特征的关系见表1

由表1 可见，不同年龄、肿块大小、组织学分级、淋巴结转移、TNM 分期、孕激素受体（progesterone receptor，PR）表达水平、人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）表达水平及Ki67 表达水平的乳腺癌组织中的CyclinD1 表达无明显差异（χ2分别=0.02、1.04、0.12、1.04、2.49、3.87、0.00、1.07，P均＞0.05）。但在ER 阳性乳腺癌组织中的CyclinD1 高表达率明显高于ER 阴性乳腺癌组织，差异有统计学意义（χ2=8.04，P＜0.05）。

表1 乳腺癌组织中CyclinD1表达情况与ER及临床病理特征的关系/例（%）

2.3 ER 阳性乳腺癌组织中的CyclinD1 表达情况与临床病理特征的关系见表2

由表2 可见，不同肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、PR 表达水平、Ki67 表达水平的乳腺癌组织中CyclinD1 表达存在显著性差异（χ2分别=5.33、5.33、7.99、6.08、6.46，P均＜0.05）；但不同年龄、组织学分级、HER2 表达水平乳腺癌组织中CyclinD1 表达无明显差异性（χ2分别=3.35、4.36、0.09，P均＞0.05）。

3 讨论

乳腺癌是全世界女性死亡的主要原因之一，许多研究工作集中在更好地了解其致癌途径和寻找新的乳腺癌生物标志物，探索其预后预测和治疗预测价值。目前，有许多生物标志物与乳腺癌的进展和治疗反应有关，但不同的研究之间缺乏一致的结果，限制了它们在临床上的应用[4]。

CyclinD1 是位于染色体11 q13 上的CCND1 基因的产物。CyclinD1是细胞周期的一个重要调节因子，在乳腺癌细胞系中诱导CyclinD1可使通过G1期的细胞数量增加，并加速从G1 期向S 期的转变，这表明CyclinD1对通过G1期的进展具有速率限制性。细胞周期进程中的这一限速过程受到包括CyclinD1在内的多种机制的调控，因此，CyclinD1基因的调控解除可能是导致癌变过程中细胞周期失去正常控制的原因之一[5]。小鼠模型中已经证实CyclinD1 可以促进正常乳腺和乳腺肿瘤的发展。CyclinD1 在20%的人类乳腺癌病例中出现基因扩增，在50%以上的乳腺肿瘤中蛋白质过度表达[6]。本次研究分析了CyclinD1 在乳腺癌组织中的表达，结果显示，在61 份乳腺癌组织中，CyclinD1 呈高表达28 份，高表达率为45.90%，表明CyclinD1在乳腺癌组织中有较高的过表达率。

雌激素在正常乳腺上皮细胞的增殖分化以及乳腺癌的发生发展中起着核心作用，同时ER 参与了一些靶基因转录的调节，进而指导细胞增殖。在这些基因中，CyclinD1 起着关键性作用[7]。孔令慧等[8]对78 例乳腺癌患者进行了CyclinD1 检测，结果提示ER 阳性组的CyclinD1 表达明显高于ER 阴性组，并且与程序性细胞死亡蛋白-1 配体水平呈负相关。Huang 等[9]对101 例女性浸润性乳腺癌患者进行回顾性研究，用免疫组化检测CyclinD1 和ER 水平，结果显示CyclinD1 的表达与ER 水平呈正相关。Ortiz 等[4]使用组织芯片技术，对179 例乳腺癌进行了免疫组化检测，CyclinD1 的过度表达与ER 表达及管腔型密切相关。还有研究表明乳腺癌中CyclinD1 与ER 的mRNA 水平呈正相关，在ER 阳性乳腺癌细胞中，CyclinD1 转录活性影响着雌激素对细胞周期的作用[10]。本次研究分析了ER 阳性乳腺癌组织和ER 阴性乳腺癌组织中的CyclinD1 表达差异，结果显示ER 阳性乳腺癌组织的CyclinD1 高表达率明显高于ER 阴性乳腺癌组织（P均＜0.05），表明CyclinD1 在ER 阳性乳腺癌组织中有着更高的表达水平。

CyclinD1 在乳腺癌中是否是危险因素是一个有争议的课题[3]。Ahlin 等[11]认为当ER 阳性和ER 阴性病例一起分析时，CyclinD1 信号异常对总体预后没有影响。然而，在ER 阳性患者中，CyclinD1 的高表达与乳腺癌的死亡风险增加相关，并且与肿瘤大小和分级相关，这提示CyclinD1 表达的预后影响取决于ER 受体状态。Ahlin 等[11]在研究表明CyclinD1 的过度表达增加了ER 阳性乳腺癌细胞系的干细胞样行为和迁移，而ER 阴性细胞则相反，这表明CyclinD1 在ER 阳性和ER 阴性乳腺癌中的表达效果可能有着根本的不同。本次研究结果分析了ER阳性乳腺癌组织中的CyclinD1 表达水平与临床病理特征的关系，结果显示CyclinD1 高表达率与肿瘤大小、淋巴结转移及高TNM 分期密切相关，提示CyclinD1 在ER 阳性乳腺癌组织中可能具有着不利因素，ER阳性乳腺癌组织中的CyclinD1高表达可能会导致恶性程度增高。

Lundberg 等[12]在管腔A 型乳腺癌中发现，CyclinD1 扩增组出现了PR 表达减少以及Ki67 表达增加，这可能可以解释为什么在管腔A 型乳腺癌中CyclinD1扩增肿瘤相对于非扩增肿瘤表现出较差的生存率。Ortiz 等[4]研究显示CyclinD1 基因扩增与Ki67 蛋白高表达密切相关，提示了CyclinD1 与高增殖活性的相关性。Mohammedi 等[5]在乳腺癌中发现CyclinD1 和Ki67 之间存在明显的相关性，这与更具侵袭性的肿瘤表型有关，他们认为CyclinD1 过表达的肿瘤具有更强的生长潜力，并且更容易促进细胞周期的进展，从而导致Ki67 的过表达。同时，本次研究分析了在ER 阳性乳腺癌中CyclinD1 表达状况与PR 水平及Ki67 指数的关系，结果显示CyclinD1高表达组的PR 水平明显降低，并且其Ki67 指数明显增高，表明CyclinD1 可能通过降低孕激素水平及增强细胞增殖活性来促进肿瘤的恶性程度。

综上所述，CyclinD1在ER阳性乳腺癌组织中表达更高，并且CyclinD1 高表达在ER 阳性乳腺癌组织中可能是不利因素。本次研究的不足之处是纳入研究的样本量有限，并且缺少随访资料，今后会扩大样本量并加入随访资料来进一步验证乳腺癌中CyclinD1 与激素受体的关系，为乳腺癌患者提供预后信息及治疗指导方针。