常染色体STR 和性染色体STR 联合应用判断男性性反转1 例

徐倩南，姜磊，林源，李莉，刘希玲

1.四川大学基础医学与法医学院，四川 成都 610041；2.司法鉴定科学研究院 上海市法医学重点实验室 司法部司法鉴定重点实验室 上海市司法鉴定专业技术服务平台，上海200063

1 案 例

1.1 简要案情

石某（被检母）、陈某（被检父）与孩子（男性，3 周岁）委托本院进行亲子鉴定。

1.2 检验过程

1.2.1 首次检验结果及分析

按照《法庭科学DNA 实验室检验规范》（GA/T 383—2014）抽提DNA，采用SiFaSTRTM23 plex 身份鉴定系统（司法鉴定科学研究院）进行复合PCR 扩增，用3130xl基因分析仪（美国Thermo Fisher Scientific 公司）进行毛细管电泳和基因型分析。结果显示，D3S1358、D5S818、D2S1338等21 个STR 基因座均为人类的遗传学标记，遵循孟德尔遗传定律，联合应用进行亲权鉴定，累积非父（母）排除率大于0.999 9。

分型图谱显示，孩子每个STR 基因座上的等位基因均可由被检母和被检父提供。在Amelogenin基因座（图1），被检母检出X 峰，被检父同时检出X 峰和Y峰，孩子仅检出X 峰，缺乏男性样本应包含的Y 峰，孩子疑似缺失Y 染色体。除STR 基因座外，SiFaSTRTM23 plex 身份鉴定系统还包含一个Y 染色体插入缺失（Y chromosome insertion/deletion，Y-InDel）位点，在此位点被检母和孩子均未出现分型结果（图1），与Amelogenin基因座结果相符。

图1 被检母、孩子和被检父在Amelogenin 基因座和Y-InDel位点的分型结果Fig.1 Genotyping results of Amelogenin and Y-InDel for alleged mother，child and alleged father

1.2.2 Y 染色体STR 基因座检验结果及分析

采用AmpFℓSTRTMYfilerTMPCR 扩增试剂盒（美国Applied Biosystems 公司）进行复合扩增，用3130xl基因分析仪进行毛细管电泳和基因型分析。检验结果显示，被检母和孩子无Y 染色体STR 基因座，被检父则在各个Y 染色体STR 基因座上均有分型结果，支持首次检验中孩子Y 染色体缺失的假设。所得分型结果如表1 所示。

表1 被检母、孩子和被检父血样Y 染色体STR 分型结果（AmpFℓSTRTM YfilerTM PCR 扩增试剂盒）Tab.1 Genotyping results of Y-STR from the blood samples for alleged mother，child and alleged father（AmpFℓSTRTM YfilerTM PCR Amplification Kit）

1.2.3 X 染色体STR 基因座检验结果及分析

进一步采用Goldeneye®DNA 身份鉴定系统17X［基点认知技术（北京）有限公司］进行复合扩增，用3130xl基因分析仪进行毛细管电泳和基因型分析。检验结果显示，被检母和被检父符合女性样本和男性样本X 染色体STR 基因座分型结果的特征，即女性杂合子样本显示2 个等位基因峰，男性样本则只显现为1 个等位基因峰[1]。但孩子作为男性样本却呈现出了女性杂合子样本分型结果的特征，且X 染色体STR 基因座上的等位基因均可由被检母和被检父提供。所得分型结果如表2 所示。

表2 被检母、孩子和被检父血样X 染色体STR 分型结果（Goldeneye® DNA 身份鉴定系统17X）Tab.2 Genotyping results of X-STR from the blood samples for alleged mother，child and alleged father（Goldeneye® DNA ID 17X）

2 讨论

Amelogenin基因座是目前法医学常用的用于性别鉴定的基因座，理论上，正常男性个体在Amelogenin基因座上应同时检出X 峰和Y 峰，本例孩子社会性别为男性，但采用常染色体STR 分型试剂盒SiFaSTRTM23 plex 身份鉴定系统检测后发现Amelogenin基因座Y 峰缺失。遇到此种情况时应从多个方面考虑，如引物结合区突变导致等位基因扩增失败、性反转、染色体缺失等[2]。考虑到Amelogenin基因座区域偶尔会发生基因变异或缺失导致Amelogenin基因座峰图出现异常[1]，故采用AmpFℓSTRTMYfilerTMPCR 扩增试剂盒对各样本的Y 染色体STR 基因座进行检测，以辨别Amelogenin基因座峰图错误，Y 染色体STR 基因座检验结果表明本案孩子Y 染色体缺失。为进一步确认本案例是否为性反转案例，采用Goldeneye®DNA 身份鉴定系统17X 检测各样本的X染色体STR 基因座，结果显示被检母和被检父X 染色体数目正常，社会性别为男性的孩子拥有2 条X 染色体。综上所述，推测孩子的染色体核型为（46，XX），符合男性性反转综合征的遗传学特征。

性反转综合征是一种罕见的性发育障碍。在生殖医学、儿科学等领域多有报道[3-5]。1964 年，DELACHAPELLE 等[3]首次发现男性个体拥有2条X 染色体而缺乏Y染色体的病例。谢家伦等[5]也报道了4例（46，XX）男性性反转综合征的病例，指出（46，XX）男性大多数有正常男性外生殖器，早期诊断需根据具体情况做性染色体检查及性腺探查活检。在法医学亲子鉴定中，性反转案例较少遇到[6-8]。本案例通过联合应用常染色体STR、Y染色体STR和X染色体STR 3种生物学遗传标记确定被检孩子因存在性反转现象，故常染色体试剂盒检测Amelogenin基因座Y峰缺失。

亲子鉴定案件量逐年增加，随之而来的问题也越来越多，如染色体缺失、嵌合体以及肿瘤等各种原因导致的DNA 分型异常会在亲子鉴定过程被更多学者发现，联合应用多种检测手段以及多种生物学遗传标记将有助于更精准地得出鉴定意见，降低鉴定风险。