卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表达及与预后的关系

张欣萍，李恩萍，史天云

（南阳市第一人民医院妇科，河南 南阳 473000）

卵巢癌是发病率仅低于宫颈癌、 子宫内膜癌的妇科生殖系统恶性肿瘤，具有较高病死率[1]。 卵巢癌早期临床症状不典型，患者确诊时多为中晚期，肿瘤已扩散至盆腔器官，加之术后肿瘤易复发和转移，患者预后极差[2,3]。 因此，寻找敏感、高效的肿瘤标记物对改善卵巢癌患者预后具有重要的临床价值。 近年来，国内外研究均发现，基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3，MMP3）能够降解、 重塑细胞外基质，促进了癌细胞的侵袭及转移，在结肠癌、卵巢癌等恶性肿瘤中均呈高表达[4,5]。基质金属蛋白酶组织抑制物-3（tissue inhibitors of metalloproteinase-3，TIMP3）能抑制MMP3 活性，影响肿瘤的浸润及转移，在胆囊癌、卵巢癌等组织中表达异常[6,7]。 为了揭示血清MMP3、TIMP3 表达与卵巢癌预后的关系，从而为临床卵巢癌患者的预后评估提供参考，本研究选取我院2015年10月-2017年10月收治的74 例卵巢癌患者，探讨了血清MMP3、TIMP3 表达及其与预后的关系，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2015年10月-2017年10月收治的74 例卵巢癌患者作为卵巢癌组。 纳入标准：⑴符合《妇产科学》[8]中卵巢癌诊断标准；⑵经病理学证实为卵巢癌；⑶无其他恶性肿瘤；⑷患者签署知情同意书。 排除标准：⑴合并认知、血液系统疾病者；⑵肾、肝、肺等多器官功能严重损伤者；⑶接受内分泌治疗、放疗、化疗者；⑷临床资料不全者。 另取同期于我院接受治疗的60 例卵巢囊肿患者作为对照组。 卵巢癌组：年龄37～69岁，平均52.18±7.14岁； 体质量指数19.50～27.85kg/m2，平均23.25±1.56kg/m2。 对照组：年龄36～71岁，平均51.65±6.57岁； 体质量指数19.50～27.85kg/m2，平均23.25±1.56kg/m2。 两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 样本收集与保存 卵巢癌组、 对照组均在住院第2d 清晨采集空腹静脉血约4ml，室温下静置2h，经离心机离心后取上清液，存于-80℃环境待测。

1.2.2 血清MMP3、TIMP3 表达水平检测 采用酶联免疫吸附试验检测两组血清MMP3、TIMP3 表达水平，操作过程严格遵循试剂盒说明书进行。 试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司，KHBST-360酶标仪购自科华生物有限公司。 血清MMP3、TIMP3 表达水平＞均值，为高表达； 血清MMP3、TIMP3 表达水平≤均值，为低表达。

1.3 随访 对所有患者术后进行3年随访，随访期间患者死亡即终止，随访方式为电话或门诊复诊，记录患者生存期。 术后1年内，1 次/月； 术后第2年，1 次/季；术后第3年，1 次/半年。

1.4 观察指标 ⑴比较卵巢癌组、 对照组血清MMP3、TIMP3 表达水平。 ⑵分析卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表达水平与不同病理学特征的关系。 根据术后病理判断淋巴结是否转移。 ⑶分析影响卵巢癌患者预后的危险因素。 ⑷根据Kaplan-Merier 生存曲线分析血清MMP3、TIMP3 表达水平与卵巢癌预后的关系。

1.5 统计学方法 采用SPSS20.0 软件进行数据分析。 计数资料以例数或率表示，采用χ2检验；符合正态分布的计量数据以（±s）表示，组间比较采用t检验； 采用Cox 比例风险回归模型分析影响卵巢癌患者预后的危险因素；采用Kaplan-Merier 生存曲线分析分析生存率。 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 卵巢癌组、 对照组血清MMP3、TIMP3 表达水平比较 卵巢癌组血清MMP3、TIMP3 表达水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表1。

表1 卵巢癌组、对照组血清MMP3、TIMP3 表达水平比较（±s）

表1 卵巢癌组、对照组血清MMP3、TIMP3 表达水平比较（±s）

组别 n卵巢癌组对照组t 值P 值74 60 MMP3（ng/ml）256.79±47.12 121.86±24.38 20.097 0.000 TIMP3（pg/ml）340.64±64.13 214.97±40.25 13.210 0.000

2.2 卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表达水平与不同病理学特征的关系 血清MMP3、TIMP3 表达水平与卵巢癌患者国际妇产联盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期、分化程度、淋巴结转移、腹腔积液量有关（P＜0.05）。 见表2。

表2 卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表达水平与不同病理学特征的关系[n（%）]

2.3 影响卵巢癌患者预后的危险因素分析 74 例卵巢癌患者，随访3年，失访5 例，存活26 例，死亡43 例，3年存活率为37.68%。Cox 比例风险回归模型分析结果显示，FIGO 分期增高、高分化、淋巴结转移、腹腔积液量＞200ml、血清MMP3 及TIMP3表达水平过高是影响卵巢癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。 见表3。

表3 影响卵巢癌患者预后的危险因素分析

2.4 血清MMP3、TIMP3 表达水平与卵巢癌预后的关系 Kaplan-Merier 生存曲线分析显示，血清MMP3、TIMP3 高表达患者的3年生存率分别为20.41%、18.61% 均低于低表达患者的80.00%、69.23%（P＜0.05）。 见图1、图2。

图1 血清MMP3 表达生存曲线

图2 血清TIMP3 表达生存曲线

3 讨论

卵巢癌的发生机制及影响因素较为复杂，卵巢癌带瘤患者的生存时间较短，易出现肿瘤向远处脏器转移，增加病死风险[8,9]。 目前临床以综合性措施治疗卵巢癌，包括手术治疗、放化疗等，患者的病情得到了缓解，但治疗后无瘤生存期仍然较短[10]。 虽然人附睾蛋白、糖链蛋白125（CA125）可以作为临床诊断卵巢癌及评估预后的参考指标，但其诊断不同类型卵巢癌的特异性存在局限性，整体诊断灵敏度较低[11]。 而本研究对卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表达的探讨，具有以下两个方面的价值： ⑴揭示了MMP3、TIMP3 与卵巢癌发生及发展的关系； ⑵为临床卵巢癌患者预后评估提供理论依据。

MMP3 是锌离子依赖的内分泌蛋白酶，属于亚类金属蛋白超家族，可以降解细胞外基质中的蛋白成分，维持机体正常代谢及重组[12]。 Bufu 等[13]研究发现，MMP3 高表达表明了对细胞外基质屏障的破坏增强，促进了癌细胞的侵袭及转移。 TIMP3 是MMP3 的抑制剂，不仅可以抑制MMP3 对细胞外基质中蛋白成分的讲解，还可以促进癌细胞的生长及转移[14]。 部分研究者探讨了MMP 及TIMP3 在恶性肿瘤患者中的表达情况，但缺乏MMP3、TIMP3表达与卵巢癌患者临床病例特征及预后关系的研究。

本次研究对于卵巢癌患者和卵巢囊肿患者血清MMP3、TIMP3 表达水平的分析研究可见，卵巢癌组血清MMP3、TIMP3 表达水平明显升高，远高于卵巢囊肿患者，提示MMP3、TIMP3 均参与了卵巢癌的发生及发展。 通过汇总分析不同相关文献，笔者认为这主要由于MMP3、TIMP3 的下面几个方面的作用相关[15-17]：(1)卵巢癌细胞出现浸润及转移的关键是能降低细胞外基质，MMP3 能降解几乎所有的细胞外基质，降低细胞之间的黏附状态，增强卵巢癌细胞在侵袭过程中突破各种屏障的能力；(2)MMP3 过量表达后还可以降低卵巢癌细胞脉管基膜,使肿瘤可以更加容易的转移至脉管系统及周围组织,进而形成连锁反应,有利于肿瘤的生长及侵袭;(3)具有转移倾向的卵巢癌细胞还能自身分泌或诱导其他细胞分泌MMP3，破坏基底膜完整性，向卵巢外器官转移；(4)TIMP3 能与活化的间质胶质酶、 溶解素及MMP3 形成1:1 共价化合物，当MMP3 表达水平升高时，机体反应性地调节升高TIMP3。 国内外研究发现[18]，MMP3、TIMP3 在卵巢癌患者血清中存在过高表达，患者更容易出现肿瘤转移，佐证了本研究结果。 在探讨卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表达水平与不同病理学特征的关系过程中，本研究发现，FIGO 分期较晚、分化程度较高、存在淋巴结转移、腹腔积液量＞200ml 的卵巢癌患者，血清MMP3、TIMP3 高表达的占比越高，提示血清MMP3、TIMP3 表达与卵巢癌患者的临床病理特征有关，这主要由于血清MMP3、TIMP3 表达过高会增强卵巢癌细胞对盆腔内脏器组织的浸润能力及向卵巢外器官转移的能力。 对影响卵巢癌患者预后的危险因素分析可见，FIGO 分期增高、高分化、淋巴结转移、腹腔积液量＞200ml、血清MMP3及TIMP3 表达水平过高是影响卵巢癌患者预后的独立危险因素，提示血清MMP3、TIMP3 表达与卵巢癌患者临床预后的关系密切，临床可以通过随访血清MMP3、TIMP3 表达情况，进而评估卵巢癌患者的预后情况。 进一步分析血清MMP3、TIMP3表达水平与卵巢癌预后的关系发现，血清MMP3、TIMP3 高表达患者的3年生存率均低于低表达患者，表明血清MMP3、TIMP3 高表达的卵巢癌患者生存时间更短，预后较差。 分析原因可能为：血清MMP3、TIMP3 高表达预示着卵巢肿瘤细胞的增殖活性较高，患者的FIGO 分期、分化程度及远处转移风险相对较高，治疗难度大，更可能导致不良预后，降低生存率。

卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 呈高水平表达，不同临床病理特征患者血清MMP3、TIMP3 表达存在差异，两者有望成为卵巢癌预后的评估指标。