宜春市育龄人群中地中海贫血基因诊断结果分析

朱小燕，林萌，刘梦姮

（宜春市妇幼保健院，江西 宜春 336000）

地中海贫血是世界上最常见的血红蛋白病之一，主要是由于遗传性珠蛋白基因缺陷导致血红蛋白中珠蛋白链合成缺失或不足所引起的贫血或病理状态，也称珠蛋白生产障碍性贫血。 按照存在缺陷的珠蛋白基因的种类，地中海贫血一般可以分为α-、β-、δ-和γ-等类型，其中最为常见的是α-和β-地贫[1]。 地贫患者会遗传给下一代，属于常见的出生缺陷之一，给家庭和社会带来沉重的负担[2]。 因此及早对地贫进行筛查和基因型的分析，不仅有利于临床对该病的治疗，还能够及时对患者进行产前诊断，从而避免重型地贫患儿的出生，对减缓家庭和社会压力以及实现优生优育具有重要的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016年2月-2018年12月在我院产科门诊或辅助生殖科门诊进行不孕不育检查、孕前及孕期检查，血液分析初筛阳性4345 例，且地中海贫血筛查阳性的育龄人群651 例为研究对象，其中男性163 例，平均年龄27.75±5.205岁；女性488 例，平均年龄26.51±5.046岁。 均在检测前进行知情告知并签署知情同意书。

1.2 地贫筛查方法

1.2.1 血液分析检查 采用EDTA-K2 真空抗凝管采集2ml 受检者外周静脉血，采用日本Sysmes 公司生产的XT-2000i 型全自动血细胞分析仪及配套试剂，对受检者进行血细胞分析，监测红细胞平均容积（MCV）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）等指标。 当MCV＜80fL 和（或)MCH＜27pg 为地中海贫血初筛阳性。

1.2.2 血红蛋白电泳分析 抽取2mlEDTA-K2 抗凝受检者静脉血，采用Sebia 公司的Capillarys 2全自动毛细管电泳仪进行血红蛋白检测。 HbA2＜2.5% 或者HbA2＞3.5% 提示异常。

1.2.3 地贫基因检测 血红蛋白电泳分析异常者由护士抽2mlEDTA-K2 抗凝静脉血，2～8℃冷链运输到江西迪安华星医学实验室进行检测。

方法 采用聚合酶链反应（PCR）和反向斑点杂交技术进行地贫基因检测（PCR+导流杂交法），检测3 种缺失型α-地贫（--SEA、-α3.7、-α4.2）、3 种突变型α-地贫（CS、QS、WS）及19 种突变型β-地贫。 α/β 地贫基因扩增及检测采用凯普配套DNA提取试剂盒提取DNA 基因组，提取的样本DNA进行PCR 扩增，扩增产物进行导流杂交。 杂交显色后人工肉眼判读，阳性结果为蓝紫色斑点。 操作过程参照凯普地贫基因检测试剂说明书进行。

1.3 统计学方法 经SPSS22.0 统计软件分析数据，利用［构成比（%）］表示全部计数资料，进行卡方χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 地贫基因检出率 4345 例育龄人群中初筛出651 例疑似地贫患者，筛查阳性率14.98%，218 例经地贫基因检测为阳性，检出率为33.5%，总携带率为5.02%。 其中α 地中海贫血检出56 例，占25.69%,α 地贫携带率为1.29%；β 地中海贫血检出160 例，占73.39%，α 复合β 地中海贫血2 例，占0.92%，β 地贫的携带率为3.73%。

2.2 α 地中海贫血基因类型及其分布 56 例α 地中海贫血基因携带者中检出6 种基因型，以--SEA/αα 基因型为主，构成比最大，明显高于其他几种基因型，差异有统计学意义(P＜0.05)，检出1 例HbQS 突变型。 见表1。

表1 α- 地贫基因型及构成比

2.3 β 地中海贫血基因类型及其分布 160 例β 地中海贫血基因携带者中检出9 种基因型，以IVS-2-654 基因型构成比最大，明显高于其他几种基因型，差异有统计学意义P＜0.05，见表2。

表2 β- 地贫基因型及构成比

3 讨论

地中海贫血是一种常染色体隐性遗传病，根据遗传组合和临床症状的不同，可把地中海贫血分为静止型、轻型、中间型和重型。 静止型或轻型地贫无明显症状或仅有轻度贫血，不影响日常生活与工作，无需特殊治疗；中间型地贫临床表现个体差异较大，贫血程度不一，严重者需要长期靠输血维持生命； 重型地贫包括重型α 地贫和重型β地贫，重型α 地贫又称巴氏水肿胎，胎儿重度贫血、全身水肿、肝脾肿大，常见于孕晚期胎死宫内或出生后数小时内死亡； 重型β 地贫通常表现为重度贫血，黄疸，发育不良，如不进行规范性治疗，多在5岁左右死亡。

地中海贫血广泛分布在全世界的沿海地区，在我国广东、广西、海南、四川等地区有较高的发病率，是我国南方地区重点防治的遗传性贫血。 江西省宜春市虽不是地中海贫血的高发地区，但由于现在交通便利，人口流动日益频繁，地贫筛查阳性也较高，在我国南方各地报道的地贫携带率高低不等，范围在2.5%～20.00%[3]之间，由于地贫基因携带率存在明显的地域差异，在不同种族、不同地域具有不同的分布特点，宜春市4345 例疑似患者检出地贫基因携带者218 例，总携带率为5.02%，α 地贫携带率为1.29%，略低于游雪云等[4]对江西省地区孕妇α 地贫发生率为1.59%的报道，β 地贫的携带率为3.73%，高于刘萍等[5]报道的江西省赣南地区2.46%。

研究发现中国地区常见的3 种α-地贫主要由-- SEA(东南亚缺失)、-α3.7 缺失(右缺失)、-α4.2缺失(左缺失)和αCS、αQS、αWS 三种突变引起，本研究α 地贫56 例，检出6 种α 地贫基因类型，主要以东南亚型--SEA ／αα 缺失型为主 （69.64%），其次为-α3,7/αα 缺失型占17.86%，与钟田雨[6]、贺钰磊等[7]报道相似。-α4,2/αα 缺失型，--SEA ／ α3.7缺失型，-α4.2 ／ αα缺失型各检出2 例，分别占3.57%，检出1 例HbQS 突变型。

本研究β 地贫160 例，检出9 种基因型，前四位依次为IVS-2-654、CD41-42、CD17、-28。 这4类基因型总例数为148 例，占92.50%。宜春市β 地贫主要基因型为IVS-2-654，与聂益军等[8]研究结果相似，与唐敏[9]报道的四川川南地区以CD17 突变型为主和周冰燚[10]报道的广东地区以CD41-42突变型为主有差异。

为了推进预防出生缺陷工作，降低全市重型地中海贫血发生率，宜春市政府在江西省率先推出了政府买单，免费防控地中海贫血，从2018年4月开始，在对宜春市免费婚前检 查对象中，血常规（MCV 和MCH）两项指标异常者，免费进行血红蛋白电泳检查，2019年起地中海贫血基因检测经费也纳入了财政预算，对于夫妇双方基因诊断确诊为都携带有α 地贫或都携带有β 地贫的育龄人群进行产前咨询和诊断[11,12]。 我院作为宜春市地中海贫血筛查中心，承担了大部分的地贫筛查、诊断和干预等工作，大大降低了中间型或重型地贫患儿的出生率，提高了出生人口素质。 本研究对宜春市的地贫基因类型进行了分析，结合本地区基因型分布特点，有效进行遗传咨询及产前诊断，对于本地区地中海贫血的预防、治疗均具有重要的意义。