超高效液相色谱-质谱联用测定蜂蜜中10 种农药残留

2022-01-05王仁德吴升德谷群远

食品安全导刊 2021年32期

王仁德，吴升德，谷群远，汤勇，刘锋

（盐城市产品质量监督检验所，江苏盐城 224056）

蜂蜜是我国传统的保健食品，也是我国重要的出口创汇农产品。蜜蜂在传播花粉、采集花蜜和花粉的过程中，不可避免的会接触到空气、水、农作物上残存的农药，而且蜂农为了防治蜜蜂的病虫害，生产中经常使用杀螨剂，造成农药在蜂产品中的残留。人们长期食用含有农药残留的蜂蜜，不利于身体健康。目前，我国现有国家标准和行业标准涉及蜂蜜中农药残留限量指标的仅有10 项，已不符合市场需求，且不利于蜂蜜产品的质量控制[1]。蜂蜜基质复杂，主要成分是葡萄糖、果糖、蔗糖和水分，除此之外，还含有蛋白质、矿物质、维生素和多酚类物质等，这使得蜂蜜中农药残留提取净化的前处理方法，以及检测分析方法的选择尤为重要。近年来蜂蜜中农药残留检测的前处理方法中，应用比较多的主要有液液萃取法、固相萃取法和QuEChERS 法等。常用的检测方法主要有气相色谱-质谱法和高效液相色谱-质谱法等[2-5]。本文研究采用QuEChERS 法进行蜂蜜样品的前处理，采用超高效液相色谱-质谱建立快速测定蜂蜜中10 种农药残留的方法，为我国蜂蜜产品中农药残留的常规监管和风险评估提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器和试剂

SCIEX Triple Quad 5 500+LC-MS/MS-QTRAP Ready 三重四极杆质谱/线性离子阱质谱，配有增强子离子扫描（EPI）模式，（SCIEX 公司，美国）；HMG-WY 型多管涡旋振荡仪（山东美正生物科技有限公司）；Thermo Scientific Heraeus Biofuge Stratos高速冷冻离心机（美国热电公司）。

乙腈和甲醇为色谱纯（Fisher Scientific），甲酸和甲酸铵为HPLC 级（Tedia）；QuEChERS 提取盐包（4 g硫酸镁、1 g乙酸钠）、净化剂（400 mg/mL硫酸镁、100 mg/mL PSA、100 mg/mL C18）（美国安捷伦公司）；10 种农药标准品（多菌灵、啶虫脒、氯虫苯甲酰胺、杀扑磷、倍硫磷、乙螨唑、溴氰菊酯、哒螨灵、氯菊酯、联苯菊酯）（纯度均大于98%，北京坛墨质检科技有限公司，中国）；实验用水为超纯水，由美国Millipore 公司纯水仪制备。

蜂蜜购于盐城市各大超市，20 ℃保存。

1.2 农药标准溶液的配制

准确称取各农药标准品10 mg（精确至0.1 mg）于10 mL 容量瓶中，以甲醇定容，配制成1 000 mg/L的标准储备溶液，标准储备溶液用甲醇稀释定容，制成10 mg/L 的标准中间液，-18 ℃储存。用50%甲醇将标准中间液配制成各浓度的混合标准工作液，于4 ℃储存。

1.3 样品处理

精确称取5 g 样品于50 mL 离心管中，加入5 mL 的纯水摇匀，涡旋振荡3 min 后，静置5 min，加入10 mL 乙腈，涡旋振荡提取2 min，加入盐包，立即涡旋振荡2 min 后，5 000 r/min 离心5 min，移取2 mL上清液至装有0.5 g净化剂的10 mL离心管中，立即涡旋振荡2 min 后，5 000 r/min 离心5 min，取上清液过0.22 µm 滤膜，待上机测定。

1.4 仪器分析条件

1.4.1 色谱条件

采用Accucore aQ C18色谱柱（2.6 µm，2.1 mm×150 mm）；柱温40 ℃；进样量1 µL；流动相A 为含0.1%甲酸的水溶液，流动相B 为甲醇，梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度淋洗条件

1.4.2 质谱条件

质谱设置加热电喷雾离子源温度为550 ℃；毛细管电压为5.5 kV；MRM 扫描模式，正离子采集，其他质谱参数如表2 所示。

表2 检测10 种农药的质谱参数

2 结果与讨论

2.1 样品前处理方法的选择

QuEChERS 法简便快捷，价格低廉，适用面广，其采用的净化剂主要是PSA 粉末、C18粉末和石墨化碳黑粉末3 种，可有效降低蜂蜜中各种复杂基质的干扰。本试验比较了3 种提取盐包和2 种净化剂包对蜂蜜样品的影响。当采用盐包（4 g 硫酸镁、1 g乙酸钠）、净化剂（400 mg/mL 硫酸镁、100 mg/mL PSA、100 mg/mL C18）处理蜂蜜样品时，10 种农药都能达到相对较好的回收率。

2.2 色谱质谱条件的选择与优化

本试验采用C18色谱柱进行分析，比较了常用的乙腈-水和甲醇-水体系，结果发现拟除虫菊酯类农药在甲醇-水体系中具有更好的响应，因此选用甲醇-水体系作为流动相。在流动相中加入0.1%甲酸溶液，有利于化合物的离子化，可以提高待测农药的响应值。在优化条件下测定的10 种农药的标准溶液的色谱图如图1 所示。

图1 10 种农药（10 μg/L）标准溶液的色谱图

2.3 线性范围和定量限

配制10 种农药的系列混合标准溶液，以外标法进行定量分析。结果表明，10 种农药在一定的浓度范围内均呈良好的线性关系，相关系数r＞0.99。在空白样品中添加低浓度的10 种农药混合标准溶液，按已建立的方法测定，以最接近3 倍信噪比的加标水平进行计算，3 倍信噪比对应的加标水平为检出限，10 倍信噪比对应的加标水平为定量限，具体结果见表3。

表3 10 种农药的线性范围及定量限

2.4 准确度和精密度

向空白蜂蜜样品中添加农药混合标准溶液，使加标水平分别为2.5 µg/kg、5.0 µg/kg 和10.0 µg/kg，每个浓度水平6 份平行样品，其回收率和相对标准偏差结果见表4。10 种农药的平均加标回收率在73.6%～110.8%，相对标准偏差在0.1%～7.5%。结果表明本方法的精密度和准确度良好。