荔枝核的化学成分及生物活性研究

任嘉佳，杨 兴，吴石丽，张志毕，李宝晶，李艳平，何红平，左爱学*，董发武*

荔枝核的化学成分及生物活性研究

任嘉佳1，杨 兴1，吴石丽1，张志毕2，李宝晶1，李艳平1，何红平1，左爱学1*，董发武1*

1. 云南中医药大学中药学院 云南省南药可持续利用研究重点实验室，云南 昆明 650500 2. 昆明医科大学 云南省干细胞和再生医学重点实验室&生物医学工程研究中心，云南 昆明 650500

研究荔枝核正丁醇部位的化学成分及生物活性。利用硅胶、D101大孔树脂、MCI、ODS、Sephadex LH-20及半制备型高效液相等色谱技术进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构；采用Griess法测定化合物对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮（NO）的抑制活性；采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine，DPPH）方法测定化合物的体外抗氧化活性。从荔枝核正丁醇部位分离得到15个化合物，分别鉴定为柚皮素-7(2,6-二α--鼠李糖基)-β吡喃葡萄糖苷（1）、litchioside D（2）、异鼠李素-3(2,6-二α--鼠李糖基)-β吡喃葡萄糖苷（3）、山柰酚-3(6啡酰基)-β-葡萄糖基-(1→3)-α-鼠李糖-7α-鼠李糖苷（4）、5β葡萄糖苷茉莉酮酸甲酯（5）、5β葡萄糖苷茉莉酮酸丁酯（6）、5β葡萄糖苷茉莉酮酸（7）、松脂素-4β葡萄糖苷（8）、表松脂素-4β葡萄糖苷（9）、pyrafortunoside A（10）、苯乙基芸香苷（11）、苯甲醇β吡喃葡萄糖苷（12）、methyl-1-(βribofuranosyl)-imidazolin-2-one-4-carboxylate（13）、莽草酸甲酯（14）和莽草酸（15）。体外抗炎活性结果表明，化合物13能明显抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞NO释放，其半数抑制浓度（median inhibition concentration，IC50）为（27.9±2.8）μmol/L；化合物15具有一定的抑制活性，其IC50为（62.4±9.7）μmol/L。体外抗氧化活性结果表明，化合物4对DPPH自由基具有一定的清除活性，其IC50为（109.8±1.5）μmol/L。化合物1、3～6、9～15为首次从荔枝核中分离得到。化合物13有较强体外抗炎活性，化合物15有一定的体外抗炎活性。化合物4具有一定的体外抗氧化活性。

荔枝核；苷类；抗炎活性；抗氧化活性；山柰酚-3(6啡酰基)-β-葡萄糖基-(1→3)-α-鼠李糖-7α-鼠李糖苷；表松脂素-4β葡萄糖苷；莽草酸

荔枝核为无患子科（Sapindaceae）荔枝属植物荔枝Soon的干燥成熟种子，又名荔仁、大荔核、荔核、枝核等，其资源丰富，主产于我国华南和西南等地，以广东和福建南部、台湾出产较多[1]。荔枝除了具有较高食用价值和经济价值外，其副产物荔枝核还具有较高的药用价值。荔枝核为传统中药材，历版《中国药典》均有记载，其性温，味甘、微苦，归肝、肾经，有行气散结、祛寒止痛等功效，用于治疗寒疝腹痛、睾丸肿痛等[2]。近年来，国内外学者对其进行了系统的研究，包括化学成分、药理活性、临床应用、保健功效等方面。其中，化学成分研究表明，荔枝核主要含有黄酮类、三萜、木脂素、倍半萜以及碳水化合物等[3-10]。现代药理活性研究表明，荔枝核具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、降血糖、调血脂等多方面活性[11-14]。为更深入研究并揭示荔枝核的活性成分，为临床药用和开发应用提供科学依据。本实验对荔枝核正丁醇进行了化学成分研究，从中分离得到15个化合物，分别鉴定为柚皮素-7(2,6-二α--鼠李糖基)-β吡喃葡萄糖苷[naringenin-7-O-(2′′,6′′-di--α-- rhamnopyranosyl)-β--glucopyranoside，1]、litchioside D（2）、异鼠李素-3(2,6-二α--鼠李糖基)-β吡喃葡萄糖苷[isorhamnetin-3(2,6- diα--rhamnopyranosyl)-βglucopyranoside，3]、山柰酚-3(6啡酰基)-β-葡萄糖基-(1→3)-α-鼠李糖-7α-鼠李糖苷[kaempferol-3[(6-caffeoyl)- β-glucopyranosyl(1→3)-α-rhamnopyranoside]-7α- rhamnopyranoside，4]、5β葡萄糖苷茉莉酮酸甲酯（5βglucopyranosyloxyjasmonic methyl ester，5）、5β葡萄糖苷茉莉酮酸丁酯（5βglucopyranosyloxyjasmonic butyl ester，6）、5β葡萄糖苷茉莉酮酸（5βglucopyra- nosyloxyjasmonic acid，7）、松脂素-4β葡萄糖苷（pinoresinol-4βglucopyranoside，8）、表松脂素-4β葡萄糖苷（epipinoresinol-4βglucopyranoside，9）、pyrafortunoside A（10）、苯乙基芸香苷（phenylethyl-rutinoside，11）、苯甲醇β吡喃葡萄糖苷（benzyl alcoholβglucopyranoside，12）、methyl-1-(βribofuranosyl)- imidazolin-2-one-4-carboxylate（13）、莽草酸甲酯（methyl shikimate，14）、莽草酸（shikimic acid，15）。化合物1、3～6、9～15为首次从荔枝核中分离得到。通过脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7作为抗炎模型，对所得化合物进行体外抗炎活性研究，结果表明，化合物13对NO释放具有较强抑制活性，其半数抑制浓度（median inhibition concentration，IC50）为（27.9±2.8）μmol/L，化合物15也显示出一定的抑制活性，其IC50为（62.4±9.7）μmol/L；抗氧化活性结果表明，化合物4具有一定的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine，DPPH）自由基清除活性，其IC50为（109.8±1.5）μmol/L。

1 材料与仪器

Bruker Avance III 400 MHz、Bruker DRX 500 MHz、Bruker Avance III 600 MHz超导核磁共振仪（德国Bruker公司）；Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；C18半制备色谱柱（250 mm×10 mm，5 μm，美国Agilent公司）；色谱硅胶（200～300目，青岛海洋化工厂）；GF254薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂）；LH-20羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20，美国Pharmacia公司）；MCI树脂（日本三菱化学公司）；反相C18柱色谱材料（ODS，德国Merck公司）；D101大孔吸附树脂（天津市大钧科技有限公司）；薄层色谱显色剂（10%硫酸乙醇溶液）；甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、石油醚等试剂为重蒸的工业或化学纯溶剂；色谱甲醇（上海星可高纯溶剂有限公司）；Synergy2多功能酶标仪（美国BIOTEK）；HP80型细胞培养箱（德国Eppendorf公司）；LPS、NO检测试剂盒、-单甲基精氨酸（-NMMA，碧云天生物科技有限公司）；DMEM培养基（美国Hyclone公司）；胎牛血清（美国Gibco公司）；青霉素/链霉素双抗、胰酶（北京全式金生物技术有限公司）；二甲基亚砜（DMSO，美国Sigma公司）；维生素C片（广东恒健制药有限公司，国药准字H44021171，批号201001）。

荔枝核药材于2017年9月购自新螺蛳湾药材市场，产自广西，由云南中医药大学李宏哲副教授鉴定为无患子科植物荔枝Sonn的干燥成熟种子，标本保存于云南省高校民族药质量标准研究重点实验室（D2017-001）。

2 提取与分离

荔枝核干燥样品30 kg，粉碎后用85%的乙醇回流提取3次，合并得5.2 L提取液，减压浓缩得浸膏3.4 kg。浸膏加水混悬用石油醚萃取3次，然后依次用醋酸乙酯和正丁醇萃取6次，减压浓缩得到石油醚部位（729.7 g）、醋酸乙酯部位（522.9 g）、正丁醇部位（558.6 g）和水部位（1 665.4 g）。将正丁醇部位（558.6 g）过D101大孔树脂以（30%、50%、70%和90%）乙醇-水梯度洗脱，得6个粗分段（Fr. 1～6）。Fr. 1（120.8 g）经硅胶柱色谱，以三氯甲烷-甲醇（40∶1～1∶1）梯度洗脱，得到6个流分（Fr. 1.1～1.6）。Fr. 1.2（10.2 g）经硅胶柱色谱，以三氯甲烷-甲醇（30∶1～0∶1）梯度洗脱，得到5个流分（Fr. 1.2.1～1.2.5）。Fr. 1.2.2（4.8 g）经MCI柱色谱以甲醇-水（10∶90～100∶0）梯度洗脱，到6个流分（Fr. 1.2.2.1～1.2.2.6）。Fr. 1.2.2.5（130.8 mg）经半制备液相［乙腈-水（8∶92）］分离纯化，得化合物14（20.8 mg，R＝8 min）。Fr. 1.2.2.6（903.6 mg）经硅胶柱色谱以三氯甲烷-甲醇（20∶1～0∶1）梯度洗脱得化合物15（228 mg）。Fr. 1.5（17.3 g）经硅胶柱色谱以三氯甲烷-甲醇（20∶1～0∶1），重结晶得到化合物13（120 mg）。Fr.2（47.0 g）过D101大孔树脂以（30%、50%、70%和90%乙醇）洗脱，得7个流分（Fr. 2.1～2.7），Fr. 2.3（27.5 g）经硅胶柱色谱，以三氯甲烷-甲醇（20∶1～0∶1）洗脱，得5个流分（Fr. 2.3.1～2.3.5），Fr. 2.3.2（757.3 mg）经反相ODS柱色谱，以甲醇-水（10∶90～100∶0）梯度洗脱，经Sephadex LH-20色谱（甲醇）进行纯化，得到化合物5（32.4 mg），Fr. 2.3.4（2.8 g）经反相ODS柱色谱，以甲醇-水（10∶90～100∶0）洗脱，经Sephadex LH-20色谱，以三氯甲烷-甲醇（1∶1）纯化，得到化合物10（9 mg）。Fr. 4（135.8 g）经硅胶柱色谱以三氯甲烷-甲醇（20∶1～0∶1）洗脱，得到9个流分（Fr. 4.1～4.9），Fr. 4.5（1.2 g）经反相ODS柱色谱以甲醇-水（10∶90～100∶0）分离，经Sephadex LH-20色谱（甲醇）后，得到化合物7（60.8 mg），经半制备液相［乙腈-水（12∶88）］分离纯化得到化合物11（38.2 mg，R＝27 min），经半制备液相［乙腈-水（17∶83）］分离纯化得到化合物8（10.6 mg，R＝2 min）和9（1.8 mg，R＝8 min）。Fr. 4.8经半制备液相［乙腈-水（21∶79）］分离纯化得到化合物1（70.8 mg，R＝21 min）、3（3.7 mg，R＝10 min），经半制备液相［乙腈-水（17∶83）］分离纯化得到化合物4（10.8 mg，R＝26 min）。Fr. 5（52.1 g）经硅胶柱色谱以三氯甲烷-甲醇（20∶1～0∶1）洗脱，得到5个流分（Fr. 5.1～5.5），Fr. 5.2经反相ODS柱色谱以甲醇-水（10∶90～100∶0），Sephadex LH-20色谱（甲醇）纯化后，得到化合物6（6 mg）和12（2.7 mg）。Fr. 5.4经反相ODS柱色谱以甲醇-水（10∶90～100∶0），Sephadex LH-20色谱（甲醇）纯化后，得到化合物2（42.9 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色无定形粉末，分子式为C33H42O18，/: 725 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.25 (2H, dd,= 8.6, 1.5 Hz, H-2, 6), 6.78 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3, 5), 6.13 (1H, d,= 1.7 Hz, H-8), 6.07 (1H, d,= 1.8 Hz, H-6), 5.29 (1H, ddd,= 12.8, 7.2, 3.0 Hz, H-2), 5.22 (1H, t,= 3.5 Hz, H-1), 5.05 (1H, dd,= 7.7, 5.1 Hz, H-1), 4.67 (1H, brs, H-1), 1.16 (3H, d,= 6.7 Hz, H-6), 1.13 (3H, d,= 6.7 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 198.4 (C-4), 166.4 (C-7), 164.9 (C-9), 164.3 (C-5), 158.9 (C-4), 130.7 (C-1), 129.1 (C-2, 6), 116.4 (C-3, 5), 105.0 (C-10), 102.1 (C-1), 102.0 (C-1), 99.6 (C-1), 97.8 (C-6), 96.9 (C-8), 80.5 (C-2), 80.4 (C-2), 78.3 (C-5), 76.9 (C-3), 74.0 (C-4), 73.5 (C-4), 72.3 (C-2), 71.9 (C-2), 71.6 (C-4), 71.0 (C- 3), 70.4 (C- 3), 69.7 (C-5), 68.0 (C-5), 67.3 (C-6), 43.8 (C-3), 17.9 (C-6), 16.8 (C-6)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物1为柚皮素- 7(2,6-二α--鼠李糖基)-β吡喃葡萄糖苷。

化合物2：黄色无定形粉末，分子式为C33H42O17，/709 [M－H]−。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 12.0 (1H, brs, OH-5), 7.47 (2H, d,= 7.3 Hz, H-2, 6), 7.38 (2H, t,= 7.3 Hz, H-3, 5), 7.33 (1H, m, H-4), 6.08 (1H, d,= 2.4 Hz, H-8), 6.06 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.60 (1H, dd,= 12.6, 3.2 Hz, H-2), 5.10 (1H, d,= 7.6 Hz, H-1), 5.02 (1H, d,= 3.5 Hz, H-1), 4.57 (1H, brs, H-1), 3.84 (1H, d,= 6.9 Hz, H-5), 3.73 (1H, d,= 11.1 Hz, H-6), 3.13 (1H, d,= 15.1 Hz, H-3a), 3.15 (1H, m, H-4), 2.79 (1H, dd,= 17.2, 3.3 Hz, H-3b), 1.02 (3H, d,= 6.5 Hz, H-6), 0.97 (3H, d,= 6.4 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 196.8 (C-4), 164.9 (C-7), 163.0 (C-9), 162.5 (C-5), 138.4 (C-1), 128.7 (C-4), 128.6 (C-3, 5), 126.8 (C-2, 6), 103.5 (C-10), 100.7 (C-1), 100.6 (C-1), 97.6 (C-1), 96.5 (C-6), 95.3 (C-8), 79.8 (C-2), 78.5 (C-2), 76.5 (C-3), 75.5 (C-5), 72.1 (C-4), 71.7 (C-4), 70.7 (C- 3), 70.3 (C-2), 69.7 (C- 3), 69.3 (C-4), 68.6 (C-2), 68.4 (C-5), 66.4 (C-5), 65.9 (C-6), 42.1 (C-3), 17.9 (C-6), 16.5 (C-6)。以上数据与文献报道一致[16]，故鉴定化合物2为litchioside D。

化合物3：黄色无定形粉末，分子式为C34H42O20，ESI-MS/769 [M－H]−，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.71 (1H, dd,= 8.6, 2.2 Hz, H-6), 7.59 (1H, d,= 2.2 Hz, H-2), 7.04 (1H, d,= 8.6 Hz, H-5), 6.37 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 6.18 (1H, d,= 2.1Hz, H-6), 5.62 (1H, d,= 7.7 Hz, H-1), 5.21 (1H, d,= 1.7 Hz, H-1), 4.50 (1H, d,= 1.7 Hz, H-1), 3.93 (3H, s, 4-OCH3), 1.05 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6), 0.95 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 179.3 (C-4), 165.7 (C-7), 163.2 (C-5), 158.6 (C-9), 158.4 (C-2), 151.4 (C-3), 147.1 (C-4), 134.7 (C-3), 124.6 (C-6), 123.2 (C-1), 117.0 (C-5), 111.9 (C-2), 105.9 (C-10), 102.6 (C-1), 102.2 (C-1), 100.5 (C-1), 99.8 (C-6), 94.7 (C-8), 79.8 (C-2), 78.9 (C-5), 77.1 (C-3), 74.0 (C-4), 73.8 (C-4), 72.4 (C- 3), 72.3 (C- 3), 72.2 (C-2), 72.1 (C-2), 71.8 (C-4), 69.9 (C-5), 69.7 (C-5), 68.2 (C-6), 56.4 (4-OCH3), 17.8 (C-6), 17.5 (C-6)。以上数据与文献报道一致[16]，故鉴定化合物3为异鼠李素-3(2,6-二α--鼠李糖基)-β吡喃葡萄糖苷。

化合物4：黄色无定形粉末，分子式为C42H46O22，ESI-MS/: 901 [M－H]−，1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.50 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7), 7.37 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2), 7.32 (1H, dd,= 8.3, 2.1 Hz, H-6), 7.06 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5), 7.06 (1H, d,= 8.3 Hz, H-3), 6.92 (1H, d,= 8.3 Hz, H-6), 6.56 (1H, d,= 2.3 Hz, H-2), 6.39 (1H, s, H-8), 6.37 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 6.20 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8), 5.56 (1H, brs, H-1), 5.54 (1H, d,= 1.7 Hz, H-1), 4.51 (1H, d,= 7.7 Hz, H-1), 4.34 (1H, d,= 2.4 Hz, H-2), 4.05 (1H, s, H-2), 1.29 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6), 0.98 (3H, d,= 6.1 Hz, H-6)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 179.9 (C-4), 169.1 (C-9), 163.4 (C-7), 160.9 (C-4), 162.7 (C-5), 158.6 (C-2), 157.7 (C-9), 150.3 (C-4), 146.7 (C-7), 146.6 (C-3), 135.6 (C-3), 130.5 (C-2, 6), 126.6 (C-1), 122.9 (C-6), 122.5 (C-1), 117.1 (C-5), 116.4 (C-3, 5), 116.3 (C-8), 114.8 (C-2), 107.5 (C-10), 105.9 (C-1), 102.2 (C-1), 100.5 (C-6), 99.9 (C-1), 95.3 (C-8), 82.3 (C-3), 77.9 (C-3), 75.6 (C-5), 75.2 (C-2), 73.6 (C-4), 72.5 (C-3), 72.1 (C-2), 72.0 (C-4), 71.8 (C-2), 71.7 (C-5), 71.6 (C-4), 71.2 (C-5), 65.1 (C-6), 18.1 (C-6), 17.8 (C-6)。以上数据与文献报道一致[17]，故鉴定化合物4为山柰酚-3(6啡酰基)-β-葡萄糖基-(1→3)-α-鼠李糖-7α-鼠李糖苷。

化合物5：无色油状物，分子式为C19H30O9，ESI-MS/: 425 [M＋Na]+，1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.60 (1H, dt,= 10.9, 7.2 Hz, H-3), 5.48 (1H, dt,= 10.9, 7.4 Hz, H-2), 4.36 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1), 3.77 (3H, s, H-1), 3.65 (1H, dt,= 9.5, 7.1 Hz, H-5), 3.25 (1H, dd,= 9.0, 7.8 Hz, H-2), 2.80 (1H, ddd,= 14.9, 4.1, 1.7 Hz, H-2)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 222.0 (C-3), 174.6 (C-1), 129.1 (C-2, 3), 104.5 (C-1), 78.2 (C-3), 78.0 (C-5), 75.2 (C-2), 71.8 (C-4), 70.4 (C-5), 62.9 (C-6), 55.2 (C-2), 52.3 (C-1), 39.4 (C-2), 39.3 (C-1), 38.7 (C-4), 29.2 (C-4), 28.2 (C-5), 26.6 (C-1)。以上数据与文献报道一致[18]，故鉴定化合物5为5β葡萄糖苷茉莉酮酸甲酯。

化合物6：无色油状物，分子式为C22H36O9，ESI-MS/: 467 [M＋Na]+，1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.57 (1H, dt,= 12.1, 7.2 Hz, H-3), 5.45 (1H, dt,= 12.1, 7.2 Hz, H-2), 4.32 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1), 4.15 (2H, t,= 6.6 Hz, H-1), 3.93 (1H, m, H-5a), 3.89 (1H, d,= 1.9 Hz, H-6a), 3.71 (1H, dd,= 11.9, 5.0 Hz, H-6b), 3.61 (1H, dt,= 9.2, 7.0 Hz, H-5b), 3.22 (1H, dd,= 9.0, 7.7 Hz, H-2), 2.76 (1H, dd,= 14.6, 3.8 Hz, H-2a), 2.41 (1H, m, H-2b), 2.04 (1H, dt,= 10.7, 5.4 Hz, H-2), 1.68 (2H, m, H-2), 1.45 (2H, dt,= 14.5, 7.5 Hz, H-3), 1.00 (3H, t,= 7.4 Hz, H-4)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 221.9 (C-3), 174.2 (C-1), 129.0 (C-2), 128.9 (C-3), 104.4 (C-1), 78.1 (C-3), 77.9 (C-5), 75.1 (C-2), 71.7 (C-4), 70.2 (C-5), 65.5 (C-1), 62.8 (C-6), 55.1 (C-2), 39.9 (C-2), 39.3 (C-1), 38.6 (C-4), 31.8 (C-2), 29.1 (C-4), 28.1 (C-5), 26.5 (C-1), 20.2 (C-3), 14.0 (C-4)。以上数据与文献报道一致[19]，故鉴定化合物6为5β葡萄糖苷茉莉酮酸丁酯。

化合物7：无色油状物，分子式为C18H28O9，ESI-MS/387 [M－H]−，1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.44 (1H, dt,= 10.9, 6.9 Hz, H-3), 5.33 (1H, dt,= 10.9, 7.4 Hz, H-2), 4.20 (1H, d,= 7.9 Hz, H-1), 3.59 (1H, dd,= 11.8, 4.9 Hz, H-6a), 3.48 (1H, dt,= 9.8, 7.1 Hz, H-5b), 3.10 (1H, dd,= 9.0, 7.8 Hz, H-2), 2.03 (1H, dd,= 19.1, 10.7 Hz, H-4a), 1.92 (1H, dt,= 10.9, 5.7 Hz, H-2)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 222.0 (C-3), 176.1 (C-1), 128.9 (C-2, 3), 104.2 (C-1), 78.0 (C-3), 77.8 (C-5), 75.0 (C-2), 71.5 (C-4), 70.2 (C-5), 62.7 (C-6), 55.0 (C-2), 39.8 (C-2), 39.1 (C-1), 38.6 (C-4), 29.0 (C-4), 28.1 (C-5), 26.4 (C-1)。以上数据与文献报道一致[20]，故鉴定化合物7为5β葡萄糖苷茉莉酮酸。

化合物8：黄色无定形粉末，分子式为C26H32O11，ESI-MS/: 520 [M＋H]+，1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.14 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5), 7.02 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2), 6.94 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2), 6.90 (1H, dd,= 8.4, 2.1 Hz, H-6), 6.80 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6), 6.76 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 4.74 (1H, d,= 4.0 Hz, H-7), 4.69 (1H, d,= 4.3 Hz, H-7), 3.86 (3H, s, OCH3), 3.84 (3H, s, OCH3)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 151.0 (C-4), 149.1 (C-4), 147.5 (C-3), 147.3 (C-3), 137.5 (C-1), 133.7 (C-1), 120.0 (C-6), 119.8 (C-6), 118.0 (C-5), 116.1 (C-5), 111.6 (C-2), 111.0 (C-2), 102.8 (C-1), 87.5 (C-7), 87.1 (C-7), 78.2 (C-5), 77.8 (C-3), 74.9 (C-2), 72.7 (C- 9, 9), 71.3 (C-4), 62.5 (C-6), 56.7 (3-OCH3), 56.4 (3-OCH3), 55.5 (C-8), 55.3 (C-8)。以上数据与文献报道一致[21]，故鉴定化合物8为松脂素-4β葡萄糖苷。

化合物9：黄色无定形粉末，分子式为C26H32O11，ESI-MS/: 520 [M＋H]+，1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.15 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5), 7.03 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.97 (1H, s, H-2), 6.93 (1H, dd,= 8.3, 1.2 Hz, H-6), 6.81 (1H, dd,= 8.1, 1.0 Hz, H-6), 6.78 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 4.48 (1H, d,= 6.9 Hz, H-7), 4.14 (1H, d,= 9.4 Hz, H-7), 3.40 (1H, m, H-8), 3.87 (3H, s, OCH3), 3.86 (3H, s, OCH3), 2.93 (1H, m, H-8)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 151.0 (C-4), 148.8 (C-3), 147.6 (C-3), 146.6 (C-4), 137.5 (C-1), 131.3 (C-1), 119.9 (C-6), 119.4 (C-6), 118.0 (C-5), 116.0 (C-5), 111.5 (C-2), 110.5 (C-2), 102.8 (C-1), 89.0 (C-7), 83.5 (C-7), 78.2 (C-5), 77.8 (C-3), 74.9 (C-2), 72.0(C-9), 71.3 (C-4), 70.7 (C- 9), 62.5 (C-6), 56.7 (3-OCH3), 56.4 (3-OCH3), 55.8 (C-8), 51.3 (C-8)。以上数据与文献报道一致[22]，故鉴定化合物9为表松脂素-4β葡萄糖苷。

化合物10：淡黄色胶状固体，分子式为C20H28O13，ESI-MS/: 499 [M＋Na]+，1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 6.16 (1H, d,= 2.1 Hz, H-3), 5.96 (1H, d,= 2.3 Hz, H-5), 5.01 (1H, d,= 7.6 Hz, H-1), 4.71 (1H, d,= 1.5 Hz, H-1), 4.01 (1H, dd,= 11.2, 1.7 Hz, H-6a), 3.87 (1H, dd,= 3.4, 1.6 Hz, H-6b), 2.69 (3H, s, H-8), 1.16 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 205.0 (C-7), 167.8 (C-2), 166.3 (C-4), 162.5 (C-6), 107.1 (C-1), 102.4 (C-1), 102.1 (C-1), 98.4 (C-3), 95.7 (C-5), 78.6 (C-3), 77.3 (C-5), 74.9 (C-2), 74.2 (C-4), 72.5 (C-2), 72.2 (C-3), 71.3 (C-4), 70.0 (C-5), 67.7 (C-6), 33.6 (C-8), 18.0 (C-6)。以上数据与文献报道一致[23-24]，故鉴定化合物10为pyrafortunoside A。

化合物11：白色粉末，分子式为C20H30O10，ESI-MS/: 453 [M＋Na]+，1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.27 (2H, m, H-2, 6), 7.26 (2H, m, H-3, 5), 7.18 (1H, m, H-4), 4.77 (1H, brs, H-1), 4.31 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1), 4.08 (1H, m, H-8a), 3.78 (1H, m, H-8b), 2.94 (2H, d,= 7.1 Hz, H-7), 1.25 (3H, d,= 6.1 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 139.9 (C-1), 129.9 (C-3, 5), 129.3 (C-2, 6), 127.2 (C-4), 104.4 (C-1), 102.2 (C-1), 78.0 (C-3), 76.8 (C-5), 75.0 (C-2), 73.9 (C-4), 72.1 (C-2), 72.3 (C-3), 71.8 (C-8), 71.6 (C-4), 69.7 (C-5), 68.1 (C-6), 37.2 (C-7), 18.0 (C-6)。以上数据与文献报道一致[25]，故鉴定化合物11为苯乙基芸香苷。

化合物12：无色针晶（甲醇），mp 123～124 ℃，分子式为C13H18O6，ESI-MS/: 293 [M＋Na]+，1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.46 (2H, d,= 7.2 Hz, H-2, 6), 7.37 (2H, d,= 7.3 Hz, H-3, 5), 7.31 (1H, d,= 7.2 Hz, H-4), 4.97 (1H, d,= 11.8 Hz, H-7a), 4.71 (1H, d,= 11.8 Hz, H-7b), 4.40 (1H, d,= 7.7 Hz, H-1), 3.94 (1H, dd,= 11.9, 2.1 Hz, H-6a), 3.73 (1H, dd,= 11.9, 5.4 Hz, H-6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD):139.1 (C-1), 129.3 (C-3, 5), 129.2 (C-2, 6), 128.7 (C-4), 103.3 (C-1), 78.1 (C-3), 78.0 (C-5), 75.2 (C-2), 71.8 (C-7), 71.8 (C-4), 62.8 (C-6)。以上数据与文献报道一致[26]，故鉴定化合物12为苯甲醇β吡喃葡萄糖苷。

化合物13：白色结晶（甲醇），mp 183～186 ℃，分子式为C10H14N2O7，ESI−MS/: 273 [M－H]−，1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 10.89 (1H, d,= 2.0 Hz, H-3), 7.55 (1H, s, H-5), 5.36 (1H, d,= 6.1 Hz, H-1), 5.24 (1H, d,= 6.3 Hz, H-OH), 5.00 (1H, d,= 4.9 Hz, H-OH), 4.93 (1H, d,= 5.3 Hz, 5-OH), 4.11 (1H, dd,= 11.3, 6.1 Hz, H-4), 3.92 (1H, m, H-2), 3.75 (1H, dd,= 7.1, 3.6 Hz, H-3), 3.69 (3H, s, H-OCH3), 3.51 (1H, m, H-5a), 3.41 (1H, m, H-5b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD):159.4 (C-6), 152.6 (C-2), 118.0 (C-5), 113.3 (C-4), 85.8 (C-1), 84.9 (C-4), 73.4 (C-3), 70.4 (C-2), 61.4 (C-5), 51.5 (6-OCH3)。以上数据与文献报道一致[27]，故鉴定化合物13为methyl-1-(βribofuranosyl)-imidazolin- 2-one-4-carboxylate。

化合物14：白色针状结晶（甲醇），mp 114～115 ℃，分子式为C8H12O5，ESI-MS/: 189 [M＋H]+，1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 6.82 (1H, dt,= 3.6, 1.8 Hz, H-2), 4.40 (1H, m, H-3), 4.02 (1H, dt,= 7.3, 5.2 Hz, H-4), 3.77 (3H, s, H-8), 3.72 (1H, dd,= 7.3, 4.1Hz, H-5), 2.72 (1H, m, H-6a), 2.23 (1H, m, H-6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 168.7 (C-7), 139.0 (C-2), 130.2 (C-1), 72.8 (C-3), 68.4 (C-4), 67.2 (C-5), 52.3 (C-8), 31.5 (C-6)。以上数据与文献报道一致[28]，故鉴定化合物14为莽草酸甲酯。

化合物15：无色针状结晶（甲醇），mp 185～187 ℃，分子式为C7H10O5，ESI-MS/: 175 [M＋H]+，1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 6.71 (1H, m, H-2), 4.28 (1H, m, H-3), 3.89 (1H, m, H-4), 3.59 (1H, dd,= 7.4, 4.2 Hz, H-5), 2.63 (1H, m, H-6a), 2.59 (1H, m, H-6b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 170.1 (C-7), 138.8 (C-2), 130.8 (C-1), 72.8 (C-3), 68.4 (C-4), 67.3 (C-5), 31.7 (C-6)。以上数据与文献报道一致[29]，故鉴定化合物15为莽草酸。

4 生物活性评价

4.1 细胞活力及抗炎活性实验

化合物用DMSO溶液配制成100 mg/mL的存储液，使用时用细胞培养基稀释为所需要浓度，并保证DMSO的终浓度不超过0.1%。

4.1.1 对细胞活力的影响 本研究首先检测化合物对小鼠RAW264.7细胞的毒性。对数生长期的RAW264.7细胞接种到96孔板，每孔接种2×104个细胞，培养24 h后去除旧培养基，加入含2、10、20、50、100 μg/mL化合物的新培养基，继续培养24 h，同时设置调零组（不含细胞）和对照组（添加等浓度的DMSO），每个组设3个重复孔。细胞处理24 h后，每孔加入10 μL的MTS溶液，混匀后继续培养4 h，用酶标仪检测490 nm处吸光度（），根据公式计算细胞存活率。

细胞存活率＝(化合物－调零)/(对照－调零)

检测发现化合物1～15对RAW264.7细胞活力没有明显的抑制作用，表明化合物在质量浓度100 μg/L以下无明显的细胞毒性。

4.1.2 对细胞NO生成的影响 取对数期的RAW264.7细胞接种到96板，培养24 h后进行给药处理，细胞分为对照组、模型组、阳性药组、化合物组。24 h后细胞去除旧培养基，各组加入不同的新培养基，其中对照组加入正常培养基，模型组加入含1μg/mL LPS的培养基，阳性药组加入含1 μg/mL LPS＋-NMMA（浓度为10、20、50、100、200 μmol/L）培养基，化合物组加入含1 μg/mL LPS＋化合物（质量浓度为2、10、20、50、100 μg/mL）培养基处理24 h后，取细胞培养液50 μL到新的96孔板中，每孔加入100 μL Griess混合试剂，充分混匀后用酶标仪在540 nm处检测值，检测NO浓度，并根据以下公式计算化合物NO生成抑制率，半数抑制浓度IC50根据Reed&Muench法计算，化合物物质的量浓度根据质量浓度和化合物相对分子质量进行换算。

NO生成抑制率＝(模型－化合物)/(模型－对照)

结果显示，化合物13对NO生成量具有较强抑制活性，其IC50值为（27.9±2.8）μmol/L，与阳性对照药-NMMA的IC50值（23.0±0.6）μmol/L抑制活性接近；化合物15对NO生成量也具有一定的抑制活性，其IC50为（62.4±9.7）μmol/L。其他化合物对NO生成量无明显的抑制活性。

4.2 DPPH自由基的清除活性

采用DPPH法[9,30]评价化合物1～15的体外抗氧化作用。将待测化合物和阳性对照品（维生素C）用甲醇溶解，配制成质量浓度为1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1 mg/mL的待测样品溶液。精密量取50 μL不同浓度待测样品溶液，甲醇溶液和维生素C溶液，分别加入150 μL的DPPH溶液，作为实验组（）、阴性对照组（B）和阳性对照组，50μL待测样品溶液加入150μL甲醇为空白对照组（0），25 ℃下避光保温显色30 min，于517 nm波长下测定值并计算化合物对DPPH自由基清除率。

自由基清除率＝1－(－0)/B

测定结果表明，化合物4具有一定的DPPH自由基清除活性，其IC50为（109.8±1.5）μmol/L，阳性对照组维生素C的IC50为（17.0±0.4）μmol/L。

5 讨论

本研究综合运用硅胶柱色谱、反相ODS柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备HPLC以及重结晶等多种分离纯化技术，结合核磁共振、质谱等波谱鉴定技术对荔枝核的化学成分进行研究，从中分离鉴定了15个化合物，化合物1、3～6、9～15为首次从荔枝核中分离得到。其中，化合物1～4为黄酮苷类，是荔枝核中的主要成分类型；化合物5～7为茉莉酮酸酯类，近年从荔枝核中报道了系列该类型新化合物[3]；化合物5和6为首次从荔枝核中报道；化合物8和9为双四氢呋喃型木脂素苷类成分，为一对同分异构体，其质谱相同，核磁共振氢谱及碳谱数据近似，主要差别在于C-7、H-7的化学位移值及H-7的偶合常数值，与化合物8相比，化合物9的C-7及H-7核磁共振信号向高场位移，H-7的偶合常数值增大；化合物10～12为小分子芳香族的氧苷类（其中化合物10为酚苷、11和12为醇苷），化合物13为核苷类，化合物14和15为多元醇酸类，该研究结果进一步揭示荔枝核的化学成分，为活性研究提供物质基础。

抗炎活性测定结果表明，化合物13显示出较强的NO抑制活性，其IC50与阳性对照药-NMMA的抑制活性接近，化合物15具有一定的抑制活性。抗氧化活性结果表明，化合物4显示出一定的DPPH自由基清除活性，化合物1～3显示较弱活性。据文献报道，黄酮类（C6-C3-C6）化合物的抗氧化活性与羟基数目、位置及C环C-2和C-3位是否为不饱和双键有关，当B环C-3和C-4位为邻二酚羟基时，抗氧化活性最强；当C环C-3位为羟基、C-2和C-3位为不饱和双键时，抗氧化活性较强；当A环的C-5和C-7位为酚羟基时，对抗氧化活性有一定增强作用[31-32]。与化合物4相比较，化合物1和2的活性较弱，可能是因为化合物1和2中C-2和C-3位为饱和单键，A、B和C环的交叉共轭体系被破坏。化合物3和4均为黄酮醇苷类，化合物3的A环虽有C-5和C-7位酚羟基，但对抗氧化活性影响较小，而化合物4中有邻二酚羟基的咖啡酰基取代，可能是其使化合物4的抗氧化活性增强。以上结果丰富了荔枝核的抗炎和抗氧化活性，为进一步开发利用荔枝核药用价值，开展后续研究提供参考。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Studies on chemical constituents and biological activities from seeds of

REN Jia-jia1, YANG Xing1, WU Shi-li1, ZHANG Zhi-bi2, LI Bao-jing1, LI Yan-ping1, HE Hong-ping1, ZUO Ai-xue1, DONG Fa-wu1

1. Yunnan Key Laboratory of Sustainable Utilization of Southern Medicine, College of Chinese Materia Medica, Yunnan University of Chinese Medicine, Kunming 650500, China 2. Yunnan Key Laboratory of Stem Cell and Regenerative Medicine & Biomedical Engineering Research Center, Kunming Medical University, Kunming 650500, China

To study the chemical constituents and biological activities from the-butanol extract of Lizhihe ().The compounds were systematically isolated and purified by using various chromatographic separation and analysis techniques, including silica gel, D101 macroporous resins, MCI, ODS, Sephadex LH-20 chromatographies and semi-prepative HPLC. The structures were identified on the basis of physicochemical properties and spectral data. The inhibitory effect of the compound on nitirc oxide production in LPS-induced mouse macrophage RAW264.7 cells was evaluated by Griss assay. Moreover, the antioxidant activitieswere tested by DPPH assay.A total of 15 compounds were isolated and identified as naringenin-7(2,6-diα--rhamnopyranosyl)-βglucopyranoside (1), litchioside D (2), isorhamnetin- 3(2,6-diα--rhamnopyranosyl)-βglucopyranoside (3), kaempferol-3[(6-caffeoyl)-β-glucopyranosyl(1→3)-α- rhamnopyranoside]-7α-rhamnopyranoside (4), 5βglucopyranosyloxyjasmo-nic methyl ester (5), 5βglucopyranosyloxyjasmonic butyl ester (6), 5βglucopyranosyloxyjasmonic acid (7), pinoresinol-4βglucopyranoside (8), epipinoresinol-4βglucopyranoside (9), pyrafortunoside A (10), phenylethyl-rutinoside (11), benzyl alcoholβglucopyranoside (12), methyl-1-(βribofuranosyl)-imidazolin-2-one-4-carboxylate (13), methyl shikimate (14), and shikimic acid (15). Amoung them, compound 13 showed strong inhibitory activities against LPS-induced NO production in RAW264.7 macrophages, with IC50value of (27.9±2.8) μmol/L, 15 exhibted obvious activities with IC50value of (62.4±9.7) μmol/L. Additionally, compound 4 displayed a degree of DPPH radical scavenging activities with IC50value of (109.8±1.5) μmol/L.Compounds 1, 3—6, 9—15 are isolated formfor the first time. Compound 13 had stronganti-inflammatory activityand 15 possessed moderate anti-inflammatory activity. Moreover, Compound 4 was found to have moderate anti-oxidant activity.

; glycoside; anti-inflammatory activity; anti-oxidant activity; kaempferol-3[(6-caffeoyl)-β-glucopyranosyl(1→3)-α-rhamnopyranoside]-7α-rhamnopyranoside; shikimic acid

R284.1

A

0253 - 2670(2022)24 - 7664 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.24.003

2022-04-09

国家自然科学基金资助项目（82260758）；国家自然科学基金资助项目（31860092）；云南省高层次人才培养支持计划“青年拔尖人才”专项（YNWR-QNBJ-2020-255）；云南省基础研究计划面上项目（202101AT070254）；云南省南药可持续利用研究重点实验室开放课题重点项目（202105AG070012ZD2201）

任嘉佳（1996—），硕士研究生，从事中药民族药药效物质基础研究。E-mail: 2936954422@qq.com

董发武，副教授，从事中药民族药改善男性不育相关疾病药效物质基础研究。Tel: 15087182863 E-mail: 593742545@qq.com

左爱学，副教授，从事中药民族药药效物质基础研究。Tel: 13987125772 E-mail: 1002042656@qq.com

[责任编辑 王文倩]