浅析莱克多巴胺的危害及检测方法

2021-12-25朱慧敏孟美辰张雪涛

南方农业 2021年30期

董科，刘超，朱慧敏，李慧，孟美辰，张雪涛，何琪

（1.句容市农产品质量安全监测中心，江苏句容 212400；2.句容市农业农村局，江苏句容 212400）

莱克多巴胺为医药名词，主要用于治疗人体肌肉萎缩和心力衰竭症，也是治疗支气管扩张的有效试剂。作为一种人体兴奋类型的药剂，其可以减少人体脂肪的合成，增加肌肉的生成。正是由于这一特性，使其被一些生猪养殖企业所利用，在其他诸如肉鸡、火鸡等养殖业中也不同程度地存在这一情况［1］。

1 危害

人食用莱克多巴胺残留的肉类后，会出现不同程度的肌肉颤动、心率过快等问题，严重的甚至出现轻微中毒反应，其症状类型与动物中毒症状基本相同。如果食用人本身就患有高血压及心脏病等病症，更易引发此类问题，甚至会造成死亡。莱克多巴胺作为一种医药材料，世界各国对其使用量均有规定，中国台湾地区一律禁止使用莱克多巴胺，我国一些地区没有完全禁止莱克多巴胺的使用，但要求养殖业的用量必须控制在规定值以内，一旦使用过量，在动物的体内就会有莱克多巴胺残留，进入人体后会发生一系列症状反应。有学者以成年大鼠为例，研究莱克多巴胺对其的影响，得出的结论是使用该药剂后，大鼠的睾丸和体重与对照组相比明显增加，此试验再次证明莱克多巴胺可以促进人体激素的分泌和生成，造成人体激素分泌紊乱，正常的新陈代谢被打乱［2］。有学者采用试验的方法对莱克多巴胺在动物体内的残留进行试验，结果表明莱克多巴胺属于肾上腺素受体激动剂类型，其作为添加剂对动物进行喂食后，动物生长速度明显加快，同时饲料的转化率大大提升，瘦肉率也大大提升。

2 检测方法

2.1 酶联免疫法（ELISA）

ELISA 是目前市场中比较主流的检测方法之一，单克隆抗体技术研发取得的进展，使莱克多巴胺的检测也逐渐从传统的多抗体检测试剂盒中转变过来。采用单克隆抗体技术具有如下优势：工业化生产方式较为简单；选择性较强；灵敏度较强，可达0.5 ng·mL-1；可测的范围较广，不仅仅是动物的内脏、肉，包括饲料中、尿液中的莱克多巴胺残留均可测出。随着研发技术的提升，单克隆抗体技术又可以区分为直接竞争和间接竞争2类，一般来说，国内生产的大多数为间接竞争ELISA，而国外生产的大多数均为直接竞争ELISA。目前，酶联免疫法主要采取生物素链霉亲和素放大酶联免疫方法，同时结合了生物素—链霉亲和素系统的放大作用，灵敏度进一步提升，达到（0.30±0.05）ng·mL-1。在目前主流的检测方法中，酶联免疫法具有较为明显的优势，由于其操作便捷，结果的一致性较高，十分适合对大批量样品的检测。

2.2 高效液相色谱法（HPLC）

HPLC 测定法主要采用C 18 分析柱实施分析，测定的步骤如下：利用乙腈和缓冲溶液配置流动相等溶剂洗脱来进行样品预处理；采取电化学和HPLC 相结合的方法实施检测，检测主要针对猪血清血浆。利用库仑检测器也可以实施对饲料及猪组织器官的检测，该方法也能进一步提升检测的灵敏度［3］。

2.3 胶体金免疫层析法（GICA）

GICA 代表了目前莱克多巴胺检测方法的研发方向，其具有的优势有：操作较为简单；不需要专业的检测人员和仪器；基本不受环境的限制；得出结果的时间短，一般15 min 就可以知道结果。但该检测方法的缺陷也是显而易见的，就是不能实现定量分析。随着科学研发能力的提升，在胶体金免疫层析法的基础上，目前又发展了胶乳免疫层析法，胶乳免疫层析法的原理是利用胶乳与标记物发生反应，在氨基和羧基之间形成较为稳定的化学结构，相比胶体金免疫层析法，胶乳免疫层析法结构体的稳定性更好，表面结合力更强。此外胶乳免疫层析法还具备较好的灵敏度，且灵敏度可控性好，比胶体金高出10～1 000 倍。胶乳的分类主要区分为3类：荧光胶乳、彩色胶乳及磁胶乳。由于作用原理不同，实现的功能也各不相同，其中磁胶乳和荧光胶乳在实施检测时，需要专门的仪器（荧光检测仪和磁胶乳检测仪），从而实现定性和定量检测，这2 种仪器体积较小，搬移也较为便捷，所以可以满足即时检测的需要。彩色胶乳主要通过调节pH，产出颜色各异的微球胶乳，从而实现联检产品中不同指标的同步呈色，这是目前试验室实施检测检验的趋势之一。

2.4 气相色谱-质谱联用法（GC-MS）

GC-MS 主要采用专门的仪器对生猪尿样及组织器官中的莱克多巴胺残留进行测定，由于其灵敏度较高，被广泛使用。在此基础上发展而来的液质联用法（LC-MS），优点更为显著：样品无需进行衍生，本身的离子碎片就具有较强的特征性；可以提供较为丰富的信息。GC-MS和LC-MS 的检测，均需要较为昂贵的仪器，样品也需进行复杂的预处理环节，其检测缺陷也十分明显：前期耗费的时间较长，检测效率不高；不适合进行大规模的检测。但和酶联免疫法（ELISA）相比，也有自身具有的特有优势：准确性、有效性及敏感性均优于ELISA；检测时，ELISA 需要先行使用试剂盒进行测定，而气相色谱-质谱联用法则不需要该步骤［4-5］。

2.5 毛细管电泳法（CE）

毛细管电泳法所采用的原理是采用加有S-α-CD 缓冲液的毛细管电泳法可以较好地实现相关物质的分离。这一方法对生猪预混料中的莱克多巴胺进行测定，具有显著的优势：具有较好的精确度；具有较好的回收率，一般能达到（92.6±4.6）%。与前文所阐述的方法相比，优势更为明显：对生猪尿样的处理简单；分析过程较短，检测所需的成本大大降低；检测过程比较稳定，干扰因素少，所以检测的结果也较为可靠。毛细管电泳法（CE）的缺陷也较为明显：使用样品的量较少，因此对低浓度样品的检测具有较大难度；方法不具备可复制性。这类型缺陷可以采取等速电泳、电堆积技术加以改善。

2.6 化学发光免疫分析法（CLIA）

该方法主要利用的原理是在抗体上以酶或化学发光物质实施标记，在免疫反应结束后，加入发光的底物，从而测定发光信号的光强，再根据一定的计算公式计算出物质中莱克多巴胺的含量。该方法主要利用一定的化学原理实施分析，具备的优势十分显著：灵敏度较高；见效较快；成本较低；样品的预处理较为便捷；有着较强的选择性。由于该技术具有的比较优势十分显著，也是未来重点发展的主要趋势之一。

2.7 免疫传感器法

该方法的主要原理是利用免疫测定法和传感技术结合使用。作为一种新型的生物传感器技术，其主要利用抗体特异性、抗原原理实施。免疫传感器法主要将抗原或抗体固定在传感器基体上，致其发生化学、物理反应，同时通过传感技术将化学反应转变为可检测的信号，以测定分子的浓度。实践中，传感器可以区分为2 类，标记型免疫传感器和非标记型免疫传感器。使用该技术的优势有：稳定性较好，具有一定的可重复性；灵敏度较高。其使用劣势主要是抗原抗体反应具有良好的可逆性。