原癌基因蛋白质c-Myc及骨膜蛋白在脑胶质瘤中的表达及与肿瘤侵袭转移的相关性

陈 璐，乔建新，王鹏飞

脑胶质瘤是大脑或脊髓胶质细胞癌变产生的常见颅脑原发肿瘤，起源于神经上皮，且大多数为恶性肿瘤，发病率占颅脑肿瘤的36%～63%[1-2]。脑胶质瘤的恶性程度高，侵袭力强，目前对脑胶质瘤的治疗主张术后同步放疗或者化疗，但是手术治疗风险高，难以完全清除，容易复发。随着分子生物学技术的不断发展，原癌基因蛋白质c-Myc及骨膜蛋白在脑胶质瘤中的表达引起了诸多学者的注意，有研究发现在高级别胶质瘤样本中，骨膜蛋白呈高表达，c-Myc也发生表达异常，认为二者的表达变化与胶质瘤恶性程度的关系密切[3-4]。因此，本研究观察c-Myc及骨膜蛋白在脑胶质瘤中的表达及与肿瘤侵袭转移的相关性，旨在为脑胶质瘤的临床诊断及预后评估提供参考。现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2017年2月—2018年10月我院行肿瘤切除术的脑胶质瘤82例作为研究组，其中男49例，女33例；年龄39～74(47.35±6.23)岁；病程1～24(12.16±5.84)个月。根据WHO胶质瘤分级[5]分为：低级别组(Ⅰ～Ⅱ级，恶性程度低)32例、高级别组(Ⅲ～Ⅳ级，恶性程度高)50例。①纳入标准：均为原发脑胶质瘤，符合脑胶质瘤的临床诊断标准[6]，且经CT、MRI及术后病理检查确诊；术前未行放化疗；均无远处转移。②排除标准：有血液系统疾病者；有其他恶性肿瘤者；有脏器功能异常者；有免疫系统疾病或结缔组织病变者。另选取同期于我院行颅内减压手术的脑外伤60例作为对照组，均经CT和MRI等影像学检查证实无任何肿瘤性疾病，其中男37例，女23例；年龄38～73(48.01±5.97)岁。研究组与对照组的基本资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准执行。

1.2方法 c-Myc及骨膜蛋白均采用免疫组织化学染色法检测[7]。将研究组脑胶质瘤组织及对照组正常脑组织均使用4%甲醛固定24 h，石蜡包埋后保存至4 ℃冰箱中，制备厚度为3～4 μm的连续切片，严格按照说明书予以二甲苯脱蜡，然后置于蒸馏水中，抗原修复液进行抗原修复，室温孵育30 min，滴加一抗稀释液，4 ℃过夜，甩除一抗，加入二抗，常温孵育30～40 min后甩除二抗，在显微镜动态观察下DAB显色，注意保证每个切片显色时间一致。DAB显色剂与SP试剂盒均购自上海研生实业有限公司。免疫组织化学检测结果判定均由专业病理科医务人员进行，c-Myc及骨膜蛋白免疫染色后主要定位于细胞核，出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性，反之则为阴性。随机选取5个视野，记录视野中阳性肿瘤细胞数，计算在1000个肿瘤细胞中染色阳性所占比例，根据其百分比判断着色程度分级，共分为4个等级[8]：①阳性细胞率<10%为阴性；②阳性细胞率≥10%，且≤40%为弱阳性；③阳性细胞率>40%，且≤70%为中度阳性；④阳性细胞率>70%为强阳性。阳性率=(弱阳性+中度阳性+强阳性)/总例数×100%。

1.3观察指标 比较c-Myc及骨膜蛋白在两组及不同级别脑胶质瘤中表达的差异，分析c-Myc及骨膜蛋白与肿瘤侵袭转移的相关性。

2 结果

2.1研究组和对照组c-Myc表达比较 研究组c-Myc表达阳性率高于对照组(P<0.01)。见表1。

表1 脑胶质瘤组织和脑外伤正常脑组织两组c-Myc表达比较[例(%)]

2.2研究组和对照组骨膜蛋白表达比较 研究组骨膜蛋白表达阳性率高于对照组(P<0.01)。见表2。

表2 脑胶质瘤组织和脑外伤正常脑组织两组骨膜蛋白表达比较[例(%)]

2.3不同级别脑胶质瘤组织c-Myc表达比较 高级别组c-Myc表达阳性率高于低级别组(P<0.05)。见表3。

表3 不同级别脑胶质瘤组织c-Myc表达比较[例(%)]

2.4不同级别脑胶质瘤组织骨膜蛋白表达比较 高级别组骨膜蛋白表达阳性率高于低级别组(P<0.01)。见表4。

表4 不同级别脑胶质瘤组织骨膜蛋白表达比较[例(%)]

2.5c-Myc、骨膜蛋白与肿瘤侵袭转移的关系 Pearson直线相关分析发现，c-Myc和骨膜蛋白与肿瘤的侵袭转移均呈显著正相关(r=0.561和0.615，P=0.002和0.001)。见图1。

3 讨论

脑胶质瘤属于常见的脑部恶性肿瘤，其发生、发展与基因及细胞因子共同作用有关，故通过基因及细胞因子检测，发现脑胶质瘤早期诊断标志物是目前的主要研究方向[9]。

c-Myc是体内重要的原癌基因蛋白质，其表达产物功能多样，参与了细胞的调控、增殖、分化及代谢活动，c-Myc在组织内呈现不表达和低表达属于正常范围，但在过度表达时会诱导正常细胞恶性转化甚至凋亡[10-11]。研究证实，c-Myc和骨膜蛋白具有促进细胞凋亡的作用，在胃癌、宫颈癌等肿瘤组织中呈现高表达，对肿瘤的发生和发展具有重大影响[12]。据相关研究报道，c-Myc表达异常会破坏细胞内的控制系统，导致细胞增殖失去控制，促进细胞的转化和肿瘤的进展[13]。故控制c-Myc基因编码蛋白含量对维持细胞正常功能具有重要作用[14]。

骨膜蛋白是一种细胞外基质蛋白，最早在小鼠成骨细胞系中发现，又称为成骨细胞特异性因子-2[15-16]。据文献报道，骨膜蛋白通过与肿瘤细胞受体相结合进而调控肿瘤的发生和发展，其高表达与胰腺癌、胃癌等肿瘤的侵袭性相关[17]。有学者认为，骨膜蛋白对细胞的黏附和迁移至关重要，很可能促进肿瘤细胞的侵袭转移，是一个能够预测肿瘤侵袭转移和患者预后的重要蛋白[18-19]。基于此，本文比较脑胶质瘤组织及脑外伤正常脑组织中c-Myc和骨膜蛋白的表达水平，结果显示研究组c-Myc和骨膜蛋白表达阳性率均高于对照组，说明c-Myc和骨膜蛋白在正常脑组织中不表达或低表达，而在脑胶质瘤组织中高表达。本研究还发现，在不同级别脑胶质瘤组织中，高级别组c-Myc和骨膜蛋白表达阳性率均高于低级别组，说明c-Myc和骨膜蛋白表达水平越高，脑胶质瘤患者的病情越严重。另外，在相关性研究中发现，c-Myc和骨膜蛋白与肿瘤侵袭转移均呈正相关，说明c-Myc和骨膜蛋白表达水平越高，肿瘤发生侵袭转移的可能性越大，这与既往报道结果相符合[20]。分析其中原因，可能是c-Myc的高表达导致细胞增殖失去控制，激活了与细胞增殖分化有关的基因，加速胶质瘤细胞增殖；同时骨膜蛋白在脑胶质瘤发生和发展过程中能够调控胶质瘤的发展状态，参与胶质瘤的间质转化过程，二者对脑胶质瘤患者的早期诊断及预后评估具有重要意义。

综上所述，c-Myc及骨膜蛋白在脑胶质瘤中呈现高表达，并且与肿瘤侵袭转移呈正相关，通过检测c-Myc及骨膜蛋白表达水平，可为患者病情、预后评估提供参考。