多指标综合评价白芍饮片的干燥工艺

付雪丽 任铭诚 董美琪 刘耀武

(1.亳州市沪谯药业有限公司,安徽 亳州 236800;2. 亳州职业技术学院药学院,安徽 亳州 236800)

中药材的质量与中药材的产地、采收时间、采收季节以及炮制工艺等密切相关。中药材切成饮片后，为了便于贮存和防止药材发生虫蛀、霉变的现象，需要及时干燥，以保障药材的药效和品质。

目前，有文献报道真空冷冻、热风、微波、微波真空、红外等众多干燥方法对白芍质量的影响。为保证白芍饮片干燥后的质量，本实验建立了以没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷四种成分和水溶性浸出物含量为综合评价指标，考察了电热鼓风干燥箱干燥温度、干燥时间及干燥时饮片的平摊厚度对白芍饮片质量的影响，并进行正交试验优化，最终确定白芍最佳干燥工艺，为白芍饮片生产提供科学的实验依据。

1.仪器与试药

1.1 仪器。 HC-200型华晨高速多功能粉碎机（浙江省永康市金穗机械制造厂）；HH-S2型数显恒温水浴锅（常州国宇仪器制造有限公司）；ME403E型电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；200型直线往复式多功能切药机（亳州市金赫达机械制造有限责任公司）；DHG-9101 OA型电热鼓风干燥箱（上海三发科学仪器有限公司）；MB27型水分测定仪（奥豪斯仪器有限公司）；KH-500DE型数控超声波清洗机（昆山禾创超声仪器有限公司）；SHZ-D型循环水式多用真空泵（巩义市美裕高科仪器厂）；ACQUITY UPLC H-Class PLUS型超高液相色谱仪（美国Waters公司）。

1.2 试药。 白芍药材由亳州市沪谯药业有限公司提供，经亳州职业技术学院刘耀武教授鉴定为毛茛科植物白芍Paeonia lactiflora Pall.的干燥根；乙腈为色谱纯（Fisher Chemical公司），超纯水仪（四川优普超纯科技有限公司），其余试剂均为分析纯；对照品芍药苷（批号：110736-202044，含量96.8%）和没食子酸（批号：110831-200803，含量98%）购自中国食品药品鉴定研究院。芍药苷内酯苷（批号：39011-90-0，含量95%）和苯甲酸芍药苷（批号：YJ-100419，含量98%）购自成都普斯生物科技股份有限公司。

2.方法与结果

2.1 药材前处理。取净白芍根，将药材进行大小粗细分档，本实验所用白芍药材直径为1.5cm～2.0 cm。用清水先浸泡白芍到六七成，然后取出，闷润24小时，中途淋少量水2～4次，保持药材的表面湿润，让水分能分缓慢地渗透入药材内部。至白芍药材易弯曲但不易折断，再用直线往复式多功能切药机切药按照《中国药典》规定切成1mm-2 mm的薄片，作为实验材料备用。

2.2 白芍饮片中各指标成分的测定

2.2.1 色谱条件。色谱柱为 ACQUITY UPLC®BEH C18( 2.1 mm×100 mm,1.7 μm)，流动相为乙腈(A)-0.05 %的磷酸溶液(B)，进行梯度洗脱：0～0.5min，7 %～14 %A；0.5～3min，14 %A；3～5.5min，14 %～18 %A；5.5～6min，18 %～20 %A；6～9min，20 %～22 %A；9～9.5min，22 %～40 %A；9.5～11min，40 %～50 %A；11～11.5min，50 %～100 %A；11.5～12min，100 %A；12～12.5min，100 %～7 %A；12.5～14min，7%A。流速为 0.400 mL/min，柱温为 30℃，检测波长为230 nm；采集时间为14 min;进样量为2 μL。混合对照品及供试品的色谱图见图1。

图1 混合对照品（A）与白芍样品（B）的色谱图

2.2.2 溶液的制备

2.2.2.1 供试品溶液的制备。粉碎样品，过4号筛，取白芍粉末，分别精密称取0.1 g，置于5 mL量瓶中。加稀乙醇4 mL，超声处理（240 W，45 kHZ）30分钟，取出放冷至室温，加稀乙醇至刻度，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。每个样品平行制备2份。

2.2.2.2 对照品溶液的制备。精密称取没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷四种待测成分对照品适量于容量瓶中，以适量甲醇溶解并定容，分别得到各成分的单一对照品母液。再分别取各单一对照品母液适量于容量瓶中，以50%甲醇水溶解并稀释到刻度，摇匀，得到混合对照品溶液，以备方法学考察使用。

2.2.3 方法学考察

2.2.3.1 线性关系考察。分别吸取“2.2.2.2”项下混合对照品溶液，用50%甲醇水采用倍数稀释法， 分别稀释0、1.25、1.67、2.5、5、10、20、32和40倍，制得9个不同浓度梯度的系列标准溶液，按“2.2.1”项色谱条件进样测定，得各成分的峰面积。以质量浓度（X）为横坐标，各成分峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线。其中没食子酸(Y=97714X+369.33，线性范围0.25～10.03 μg/mL，相关系数0.9999)，芍药内酯苷(Y=6525.8X-5882.6，线性 范 围7.71～308.4 μg/mL，相关 系 数0.9999)，芍 药苷(Y=6516.8X-10011，线性 范 围26.58～1063.3 μg/mL，相关系数1)，苯甲酰芍药苷(Y=48312X+2689，线性范围0.36～14.32 μg/mL，相关系数0.9999)。

2.2.3.2 精密度试验。取一个线性浓度点的四种成分混合对照品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件，连续进样测定6次，对待测成分的峰面积计算相对标准偏差，得出没食子酸RSD为0.11 %；芍药内酯苷 RSD为0.12 %；芍药苷 RSD为0.08 %；苯甲酰芍药苷 RSD为0.84 %，结果表明，该仪器精密度良好。

2.2.3.3 重复性试验。精密称取同一白芍粉末，按照“2.2.2.1”项下方法重复制备供试品溶液6次，并按照“2.2.1”项下色谱条件测定，根据各成分的峰面积及标准曲线计算各成分的平均含量，并计算含量的相对标准偏差，得出没食子酸RSD为0.66 %；芍药内酯苷RSD为0.93 %；芍药苷RSD为0.65 %；苯甲酰芍药苷RSD为1.59 %，表明所建立方法测定白芍供试品溶液重现性良好。

2.2.3.4 稳定性试验。取同一供试品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件，分别在 0、2、4、6、8、10、12、24 h 进行 UPLC 色谱分析，记录各时间点待测成分的峰面积，并计算相对标准偏差。得出没食子酸峰面积的RSD为3.60 %；芍药内酯苷峰面积的RSD为0.67 %；芍药苷峰面积的RSD为0.52 %；苯甲酰芍药苷峰面积的 RSD为5.15 %，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.3.5 加样回收率试验。按照供试品制备一半的量制备供试品6份，并按照重复性中各成分的平均含量，加入相同量的各成分对照品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件进行测定。计算，得出没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷的平均回收率分别为104.12 %、98.99 %、99.97 %和99.94 %，RSD分别为2.20 %、1.05 %、0.35 %和1.12 %，表明所建立液相方法加样回收率良好。

2.3 水分测定。取粉碎后的白芍样品，采用基于烘干法的水分测定仪测定水分，结果水分含量在2.62～6.47%之间，均符合2020年版《中国药典》要求。

2.4 水溶性浸出物的测定。将白芍样品粉碎，过2号筛，精密称取白芍细粉 2.0 g，参照2020年版《中国药典》热浸法测量其水溶性浸出物含量。

浸出物（%）计算公式如下：

注：X为浸出物的含量（%）；W皿+残为干燥后装有容器的重量（g）； W皿为容器恒重（g）；V为提取溶剂的体积（mL）；W样为样品称样量（g）；V样为量取续滤液的体积（mL）；Q为水分（%）。

2.5 正交试验优选白芍干燥工艺

2.5.1 干燥方法。将“2.1”项下前处理后的白芍薄片置于电热鼓风干燥箱中，设定加热温度分别为60 、70 、80 ℃，干燥时间分别为5 、7 、9 h，干燥时摊厚度为1 、2、3 cm进行干燥，待干燥结束取出，放冷待用。

2.5.2 正交试验设计。以预实验中单因素考察的结果为依据和在吴皓的文献基础上，选用干燥时间、干燥温度、摊厚度为考察因素，每个因素设置3个水平，以没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷四种成分的含有量和水溶性浸出物含量为综合评价指标，安排实验。

2.5.3 各指标综合评分。采用多指标评分法，对正交试验结果进行分析。首先，对各个指标进行标准化处理，并设定芍药苷的权重系数为30%，没食子酸、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷含量的权重系数分别拟定为10%，水溶性浸出物含量的拟定权重系数为40%。即综合指标Y(Comprehensive index Y)=芍药苷含有量×30%+没食子酸含有量×10%+芍药内酯苷×10 %+苯甲酰芍药苷含有量×10%+水溶性浸出物含有量×40 %。结果如表1所示，方差分析如表2所示。

表1 正交试验设计及结果

表2 正交试验方差分析

2.5.4 正交试验结果。采用上述方法，分别测定各条件下样品中没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷四种成分和水溶性浸出物的含量，并进行各指标综合评分，然后对正交试验结果进行方差分析。各因素对白芍干燥工艺的影响顺序为干燥时间＞摊厚度＞干燥温度。干燥时间对白芍饮片质量的影响较大，在摊厚度3cm，以70℃下干燥7h的条件下，各指标所得的综合指标最高。由方差分析结果可知，干燥时间、温度及摊厚度对综合指标均没有显著性影响，但干燥时间对白芍饮片干燥工艺的影响要大些。

2.6 验证试验

取净白芍三批各1 kg，按照“2.1”项下前处理方法制成白芍薄片，并以优选的干燥工艺制备样品3份。结果没食子酸的含量分别为0.1372、0.1409、0.1413 mg/g;芍药内酯苷的含量分别为4.735、4.503、4.780 mg/g; 芍药苷的含量分别为32.57、33.09、33.83 mg/g; 苯甲酰芍药苷的含量分别为0.2032、0.2333、0.2130 mg/g; 水溶性浸出物质量分数分别为30.06% ，31.11% ，31.83% 。结果显示以最佳干燥工艺进行干燥的白芍片，各指标成分含量较高，试验所得干燥工艺稳定、重复性好，可靠性强。

3.讨论

3.1 指标成分的选择

没食子酸具有收敛的作用，其次在抗癌和抗炎等方面也发挥了疗效；芍药内酯苷有镇痛、镇静的作用；芍药苷有扩张血管降压、镇痛、镇静等多方面的作用；苯甲酰芍药苷主要有抗炎和镇痛的作用。本实验选用了水溶性浸出物、没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷含量作为主要指标，可以全面地反映白芍的内在质量。

3.2 试验因素的确定

在前期的预实验中当温度设为60 ℃，摊厚度为1cm～3 cm时，白芍饮片在小于5 h内很难干透，确定干燥时间因素为5、7和9小时；干燥温度小于80℃，可防止有效成分的破坏与流失；摊厚度依据饮片生产企业网带式烘干机的摊厚度进行设定。

综上所述，在70 ℃下干燥7 h，摊厚度为3 cm的干燥条件下，白芍的各指标综合评分较高，可作为干燥白芍的最佳干燥工艺，为白芍饮片实际生产提供科学的实验依据。