血站两套全自动酶免分析系统检测HBsAg性能比对分析

赵苏南 许丹丹 曹瑜 连云港市红十字中心血站检验科 （江苏 连云港 222001）

内容提要： 目的：通过HBsAg检测，对本实验室两套全自动酶免分析系统进行仪器设备间的性能和差异比较。方法：固定相同实验人员、试剂、方法、环境，设计4个随机的实验组对常规无偿献血者标本、弱阳性质控血清、国家卫健委临检中心室间质量评价（EQA）标本进行HBsAg检测。对比不同实验组标本检测的特异性和敏感性、检测结果正确率、弱阳性质控品S/CO值批内均值（X）、标准差（S）和变异系数（CV）。采用χ2检验和Kappa检验等评价不同实验组定性检测性能的差异及一致性。结果：4个随机的实验组检测结果特异性（50/50），敏感性均（35/35），结果一致性（85/85），正确率（85/85）均为100%。HBsAg质控检测结果批内CV均＜7%，符合15%以内的可接受标准。经χ2检验4个实验组两套仪器设备间的检测一致性为优，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：两套全自动酶免分析系统检测HBsAg结果具有一致性，血站血液筛查实验室可以通过无偿献血者标本、弱阳性质控品和室间质评样本检测结果相结合对比分析的方式，对设备之间的性能和差异进行比较。

随着实验室生物安全意识的提高及各地采供血机构血液筛查实验室能力的逐步建设，血液检测多采用全自动标准化的仪器设备。由于检测量、检测方法与检测策略的不同，各地采供血机构血液筛查实验室可能存在多台或多套设备检测同一项目的情况，《血站技术操作规程（2019版）》检测设备使用要求4.3.3明确指出：如果使用多台设备检测同一个项目，应定期对设备之间的性能和差异进行比较[1]。因此，本文设计不同的实验组，通过固定相同实验人员、试剂、方法、环境、检测标本，采用适宜的统计学方法，对不同仪器设备之间的性能和差异进行分析比较，现将实践分析报告如下。

1.材料与方法

1.1 试剂与仪器

HBsAg ELISA试剂盒（英科新创，批号2020035107），质控品HBsAg血清（液体）标准物质（0.2IU/mL康彻思坦，批号202003003）。全自动标本处理系统（STAR-8CH）2台，全自动酶免检测系统（FAME24/20）2台（瑞士哈美顿公司）。

1.2 标本来源

（1）常规检测标本：随机抽取本站2020年11月12日～2020年11月14日采集的符合《献血者健康检查要求》（GB18467-2011）且输血相关传染病标志物检测为阴性的无偿献血者血液标本48（人）份（5mL/份，EDTA-K2抗凝，2～8°C保存）。（2）外部商品化弱阳性质控品HBsAg血清（液体）标准物质（0.2IU/mL康彻思坦，批号202003003）32支。（3）5份国家卫生健康委临床检验中心室间质量评价标本（EQASBS2071、EQASBS2072、EQASBS2073、EQASBS2074、EQASBS2075，低于-18°C保存）。

1.3 方法

1.3.1 检测方法。本实验室2台全自动标本处理系统：STAR-8CH（仪器序列号3435，本实验室简称STAR2,以下简称STAR2），STAR-8CH（仪器序列号7323，本实验室简称STAR3,以下简称STAR3）。2台全自动酶免检测系统：FAME24/20（仪器序列号3072，本实验室简称FAME02,以下简称FAME02），FAME24/20（仪器序列号3428，本实验室简称FAME03,以下简称FAME03）。设计实验组：（1）实验组A：STAR2加样，FAME02后处理检测。（2）实验组B：STAR2加样，FAME03后处理检测。（3）实验组C：STAR3加样，FAME02后处理检测。（4）实验组D：STAR3加样，FAME03后处理检测。4个实验组对同一批标本（85例）进行HBsAg检测，参照文献[2,3]方法，对比分析4个实验组检测的特异性和敏感性、检测结果正确率、弱阳性质控品S/CO值批内均值（X）、标准差（S）和变异系数（CV）。采用χ2检验和Kappa检验评价不同实验组定性检测性能的差异及一致性。

1.3.2 质量控制。实验操作人员均经培训考核合格上岗。使用仪器设备均在校验周期内，且使用前无故障无大修使用中运行正常。使用有效期内同一厂家相同批号试剂，严格按照试剂说明书及标准操作规程操作。环境温度20～25°C，环境湿度40%～50%。常规标本EDTA-K2抗凝，2～8°C保存,以3500r/min离心15min，弱阳性质控标本-18°C以下冷冻保存，使用前复融并平衡至室温，采用颠倒30次充分混匀。室间质评标本-18°C以下冷冻保存，检测前室温复融并平衡至室温，颠倒8～10次充分混匀。每个实验组设空白对照2孔，阴性对照3孔，阳性对照2孔，均符合有效性判定规则,外部弱阳性质控1孔，室内质控均在控。

1.4 统计学分析

采用SPSS22.0软件进行χ2检验和单因素方差分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 各实验组用同一种试剂检测结果比较

各实验组检测48（人）份无偿献血者标本、32支弱阳性质控品、5例室间质评标本的HBsAg（其中阳性3例、阴性2例）共85例检测结果，经过χ2检验，各实验组检测结果差异无统计学意义（P＞0.05），正确率均为为100%，室间质评定性结果准确度均为100%，见表1。

表1. 各实验组用同一种试剂检测结果比较

2.2 各实验组用同一种试剂检测结果敏感性与特异性比较

比较4个实验组检测结果的敏感性与特异性，经过Kappa检验，K=1，一致性为优。敏感性及特异性均为100%，见表2。

表2. 各实验组用同一种试剂检测结果敏感性与特异性比较

2.3 各实验组用同一种试剂弱阳性定值质控品检测结果（S/CO值）比较

比较4个实验组弱阳性定值质控品检测结果（S/CO值），并计算批内均值（X）、标准差（S）和变异系数（CV），经过单因素方差分析，F=2.637，P=0.053，检测结果差异无统计学意义P＞0.05，检测结果差异无统计学意义，不同仪器设备使用同一种试剂检测性能具有较好的一致性。各组S/CO值均在2～3范围内（实验组A其中一孔1.99属于随机误差除外），批内CV均＜7%，符合15%以内的可接受标准，见表3。

表3. 各实验组用同一种试剂弱阳性定值质控品检测结果(S/CO值)比较(±s)

表3. 各实验组用同一种试剂弱阳性定值质控品检测结果(S/CO值)比较(±s)

组别 S/CO值 变异系数(CV)%实验组A 2.28±0.13 5.65实验组B 2.23±0.14 6.39实验组C 2.32±0.15 6.51实验组D 2.32±0.16 6.78

3.讨论

WHO血液安全的四大战略措施之一：对所有捐献的血液经过输血传播疾病筛查，并开展血型及相容性检测。血站血液筛查实验室的检验程序标准化，检测结果准确性，决定血液的安全性。病原微生物实验室生物安全管理又对血液筛查实验室提出了保护实验人员安全及周边环境的要求。随着实验室规范化管理和实验室检测能力建设的不断加强，自动化设备的投入，血液检测程序进一步标准规范，兼顾了保证血液质量及维护实验室生物安全的双重保障。

本站年采血量12吨以上，年标本量超过4万人份，按照《血站技术操作规程》中检测项目及检测方法具体要求，进行ALT检测、血型检测、输血相关传染病标志物（HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋体）血清学和核酸检测以及国家和省级卫生健康行政部门规定的地方性、时限性输血相关传染病标志物检测，全自动仪器设备的投入大大降低人员劳动强度、感染风险，降低人为操作失误，提高工作效率，提高检测的精密度。有关文献提出，全自动酶联免疫分析仪在测定结果的精密度要优于手工方法[4]。

我国是HBV的高流行地区，人群HBsAg阳性携带率7.18%[5]，江苏省乙肝的报告发病人群的年龄集中在15～54岁的中青年，男性发病率远高于女性，且高于全国平均水平[6]。在输血相关传染病标志物检测中，本站HBsAg不合格率最高。本站使用厦门新创HBsAg检测试剂在2020年度室间质评反馈定性结果100%正确，但分析0.2IU/mL弱阳性样本结果具体S/CO值有低于2的情况。综合考虑上述原因及经济成本，使用厦门新创HBsAg检测试剂盒进行仪器间的性能及差异比对实验。

献血者血液筛查要求检测方法具有较高的敏感性，降低假阴性，保证输血安全，同时要求较高的特异性，降低假阳性，减少献血者的心理负担及血液浪费。从以上实验结果分析，我站不同实验组用同一种试剂检测结果敏感性与特异性均为100%，差异无统计学意义。

分析0.2IU/mL弱阳性质控品S/CO值批内均值（X）、标准差（S）和变异系数（CV），我站不同实验组用同一种试剂检测精密度均高。为了避免检测结果精而不准的情况，加入室间质评样本同时检测，本站不同实验组用同一种试剂检测准确度100%，检测结果一致。使用S/CO值在2～5范围内的弱阳性质控品及全国室间质评样本进行仪器间的性能和差异比较可行。

本站有两套全自动酶免系统，仪器间的差异主要在以下几个方面：第一，使用年限不同，STAR2+FAME02于2009年8月投入使用，使用时间超过10年，STAR3+FAME03于2014年8月使用，至今使用6年。从上述实验结果分析，超过10年的全自动酶免分析系统与使用时间10年内的仪器设备相比检测性能并无降低。第二，STAR2使用1000μL的一次性加样枪尖，STAR3使用300μL的一次性加样枪尖。从上述精密度实验结果分析，对于厦门新创HBsAg检测试剂盒100μL的较大加样量来说，300μL的一次性加样枪尖加样精密度优势并不明显。第三，STAR2为中文操作界面，编程对用户开放。STAR3程序编辑为后台英文代码，并不对用户开放，降低人为操作失误修改实验参数风险的同时，也降低了不同组合及检测模式探索的便捷性。

综上所述，本站两套全自动酶免分析系统运行性能稳定，可以在应急情况下为备份。稳定的运行性能离不开科学的仪器设备管理：仪器设备使用前安装、运行、性能确认，使用期间有效监控及性能定期比对、使用后有效的维护保养等。综合经济成本及实际操作，我站并没有对比对周期做出分析，如每年定期一次、仪器大修或更换主要部件后、改变仪器设备放置位置后等，可在今后的工作中不断探索。