不同产地不同采收期百合药材中薯蓣皂苷含量的动态积累研究

李 君 梁 晓

1.湘潭医卫职业技术学院医学技术学院，湖南 湘潭 411102；2桂林医学院药学院，广西 桂林 541199

百合为百合科植物卷丹(LiliumlancifoliumThunb.)、百合(LiliumbrowniiF.E．Brown var. viridulum Baker)或细叶百合(LiliumpumilumDC.)的干燥肉质鳞叶，是典型的“药食两用”植物。百合主要分布于湖南、湖北、浙江、江苏安、河南等省区。《中国药典》[1]和《中华本草》[2]中均有收录。传统中医认为百合味甘，性寒，归心、肺经；具有养阴润肺，清心安神之功效。临床常用于阴虚燥咳、劳嗽咳血、虚烦惊悸、失眠多梦、精神恍惚。现已从百合药材中分离鉴定多种化学成分，其中薯蓣皂苷为百合药材中有效成分之一。现代药理学实验[3-6]证实，百合药材中的薯蓣皂苷具有抗抑郁、抗疲劳、抗氧化、提高机体免疫力等多种药理活性。药材合理的采收时间对药材本身的质量有直接影响，一般认为百合药材为栽植后第2年8月初采收，但8月初采收是否能保证百合中薯蓣皂苷的含量最高，目前尚未见此方面的研究报道。

随着国家的“振兴乡村”政策，广大村民种植中药材产业业已成为不少农村农民脱贫致富的好途径。百合作为临床常用中药，其合理的采收期对保证药品临床疗效有直接的关系。为了更好地开发利用这一药材资源，笔者对百合药材中薯蓣皂苷的含量动态积累规律进行了研究。

1 仪器和材料

1.1 仪器 Waters 600型高效液相色谱仪(含Waters 468型紫外检测器，Watres PC 800型色谱工作站，美国Waters公司)。HS6150D型超声波清洗器(天津市恒奥科技发展有限公司)，HP-01型无油真空泵(天津市恒奥科技发展有限公司)，BS2242 型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

1.2 药材 研究所用百合药材样品分别在国内4个省区(湖南省邵阳市隆回县，湖南省湘西土家族苗族自治州龙山县，浙江省衢州市常山县，河南省洛阳市栾川县)采集，共32份，经湖南中医药大学刘塔斯教授鉴定，所采集样品均为百合科(Liliaceae)植物百合(LiliumbrowniiF. E. Brown var. viridulum Baker)的肉质鳞叶。2020年7月-2020年9月采收百合的肉质鳞叶，洗净，晒干。

1.3 材料 薯蓣皂苷对照品(批号：111539-200612，中国食品药品检验研究院)，乙腈(批号：20200715，天津市科密欧化学试剂有限公司)、甲醇(批号：20200614，天津市科密欧化学试剂有限公司)、异丙醇(批号：20200712天，津四友精细化学品有限公司)为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及适应性试验 色谱柱：Phenomenex ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(95∶5)；流速1 mL/min；柱温为25 ℃ ；检测波长为204 nm。在此条件下，理论板数按木犀草素峰计算应不低于5000。

2.2 对照品溶液制备 取薯蓣皂苷对照品1.0 mg，精密称量，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 百合药材供试品溶液制备 取百合干燥样品粉末(过三号筛)10.0 g，精密称定，将药材粉末置具塞锥形瓶中，置具塞锥形瓶中，精密加入75%乙醇50 mL，称定重量，超声(功率500 W，频率40 kHz)处理45 min，放冷，再次称定重量，用75%乙醇补足减失的重量，过滤。滤液回收乙醇后，得浸膏，加适量蒸馏水溶解，用饱和正丁醇萃取3次，每次20 mL，回收正丁醇，得浸膏，用甲醇溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定法 分别精密吸取薯蓣皂苷对照品溶液与百合供试品溶液各20 μL，注入高效液相色谱，测定，即得，结果如图1、图2所示。

图1 薯蓣皂苷对照品溶液色谱图

图2 百合供试品溶液色谱图

2.5 线性关系考察 分别精密吸取“2.2”项下的薯蓣皂苷对照品1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得浓度为10、20、30、40、50 μg/mL系列浓度的薯蓣皂苷对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件依次注入高效液相色谱仪，进行HPLC分析，以测得的峰面积(Y)为纵坐标，薯蓣皂苷浓度(X)为横坐标，得回归方程为：Y=164533X+9098.6，r=0.9998。表明薯蓣皂苷溶液在10～50 μg·mL-1的浓度范围内对照品的峰面积和浓度线性关系良好。

2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液20 μL，按“2.1”项色谱条件下，连续进样6次，进行HPLC分析，测得各次峰面积，并计算相对标准偏差(RSD)值，结果RSD为1.08%，表明要求的精密度良好。

2.7 稳定性试验 取百合药材粉末10.0 g，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别于0、4、8、12、16、20、24 h依次进样20 μL，注入高效液相色谱仪，进行HPLC分析，测得每个时间点百合药材供试品溶液的峰面积，并计算得RSD为1.09%，表明样品在24 h内较为稳定。

2.8 重复性试验 取百合药材粉末10.0 g，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，平行制备样品溶液6份，分别进样20 μL，进行HPLC分析，测定样品含量，并其计算RSD得1.84%，表明方法较为稳定。

2.9 加样回收率试验 取已知含量的百合药材样品粉末6份，各约5.0 g，精密称定。分别精密加入浓度为0.106 mg/mL的薯蓣皂苷对照品溶液1.0 mL，按 “2.3”项下方法制备供试品溶液，进样20 μL，按“2.1”项下色谱条件进行测定，计算回收率。结果见表1。

表1 薯蓣皂苷的加样回收率试验

2.10 样品测定 不同采收期、取不同产地百合药材药材适量，精密称定，“2.3”项下方法制备供试品溶液。取薯蓣皂苷对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算百合药材中薯蓣皂苷的含量，结果见表2。

表2 不同采收期、不同产地百合药材中的含量

3 结论

薯蓣皂苷易溶于甲醇，故在实验中选择甲醇作为提取溶剂[7-8]。在实验中对流动相的比例(体积)进行了充分的考察，先后选用甲醇-0.1%甲酸水溶液(95∶5)、甲醇-0.1%甲酸水溶液(90∶10)、乙腈-水(95∶5)等作流动相，薯蓣皂苷的分离度和理论塔板数均达不到要求。经过多次、反复摸索实验条件，发现采用乙腈-0.1%磷酸水溶液(95∶5)为流动相，薯蓣皂苷可以与相邻成分达到基线分离，且峰形较好，符合要求。

分别对不同采收期和不同产地的百合药材中薯蓣皂苷的含量进行了测定。研究结果表明：不同产地的百合药材在同一采收期薯蓣皂苷的含量无明显差异；不同产地百合药材中薯蓣皂苷的含量呈规律性变化，其中7月初到8月初百合药材中薯蓣皂苷的含量呈上升趋势，8月中旬薯蓣皂苷的含量较高，随后百合药材中薯蓣皂苷的含量逐渐下降。故建议每年8月上中旬份作为百合药材的最佳采收期。