MSI、HGF与胃癌临床病理学特征及预后关系研究

孟宁 刘晟楠 周谦

作者单位：1.石家庄市人民医院普外科一病区，河北，石家庄050000

2.石家庄市人民医院核医学科，河北，石家庄050000

胃癌是我国常见消化道恶性肿瘤，研究表明：在我国，胃癌每年新增病例数和死亡人口均超过了全球的40%［1］。胃癌的早期诊断困难，尽管采取多种治疗手段，但晚期胃癌患者的预后较差［2］。目前，临床尚无特异性指标来预测胃癌患者远期预后，因此，寻找有效指标评估胃癌患者预后是临床治疗重点。微卫星不稳定性（microsatellite instability，MSI）是由于错配修复基因机制导致重复序列的紊乱，既往研究显示其与结直肠癌发生发展相关密切；肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）是重要抗纤维化因子，临床已证实，其与肝细胞生长因子受体（cMET）结合通路广泛参与肿瘤发展及转移［3-4］。基于此，本研究旨在探究胃癌患者中MSI 和HGF 的表达情况，分析二者与肿瘤临床病理学参数的关系以及对预后的影响。现将研究成果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取石家庄市人民医院普通外科2013年12月至2018年12月收治的100 例胃癌患者作为研究对象。纳入标准：①诊断符合《胃癌治疗指南》［5］的诊断标准；②均于本院行手术治疗；③术后经临床病理证实；未接受放化疗治疗；④患者及家属均知情同意。排除标准：①合并其它恶性肿瘤；②临床资料或随访资料不完整；③生存期＜6 个月；④胃癌家族史患者。本研究符合《赫尔辛基宣言》中的伦理审查标准。

1.2 方法

使用免疫组化法检测：组织标本均经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，4 nm 厚连续切片5 张行免疫组化法检测，操作均遵循试剂说明严格进行，每个病理切片均经2 位病理医师复诊。

1.3 观察指标

MSI 结果判读［6］：肿瘤细胞核中产生棕黄色颗粒为阳性，MLH1、MSH2、MSH6、PMS2 染色均为阳性则视为微卫星稳定（microsatellite stability，MSS），任一项中染色为阴性则视为MSI。每例患者出现≥2 个MSI 则为高度微卫星不稳定（microsatellite instability-high，MSI-H），出现1 个位点不稳定性则为低度微卫星不稳定（microsatellite instability-low，MSI-L）。

HGF 结果判读［7］：肿瘤细胞膜或细胞质中产生棕黄色颗粒为阳性，根据细胞染色强度与阳性细胞数百分比计分进行判定，无着色（0 分）、淡黄色（1 分）、棕黄色（2 分）、棕褐色（3 分）；阳性细胞数百分比0%（0 分），1%～5%（1 分），6%～20%（2 分），21%～80%（3 分），＞80%（4 分），两项得分结果相加。最终得分0 分为（-），2～3 分为（+），4～5 分为（++），6～7 分为（+++），以“-”为阴性，“+、++、+++”分别为弱阳性、中度阳性与强阳性。通过门诊和电话相结合的方式进行随访，末次随访时间为2019年5月。

1.4 统计学处理

采用SPSS 20.0 进行统计分析。计量资料采用（）表示，行t检验；计数资料n（%）表示，行χ2检验。采用Kaplan-Meier 检验进行生存分析，MSI 与HGF 表达的关系采用spearman 相关性分析，多因素分析采用Cox 比例风险模型。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 100 例胃癌患者MSI、HGF 检测结果

100 例胃癌患者中，检测出MSI 有38 例，占比38.00%，其中MSI-H 有20 例，占20.00%，MSI-L 有18 例，占18.00%，检测出HGF 阳性72 例，占比72.00%。见图1。

图1 典型患者MSI、HGF 检测病理图（SP，×100）Figure 1 Pathological diagram of MSI、HGF detection of a typical patient（SP，×100）

2.2 MSI、HGF 表达与胃癌临床病理学特征

在MSI-H 组患者中发生于胃窦、肠型、TNM分期早期、淋巴转移阴性及低分化高于MSS 组与MSI-L 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；HGF表达情况与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置、肿瘤Lauren 分型、TNM 分期、淋巴结转移、分化程度均无相关（P＞0.05）。见表1。

表1 MSI、HGF与胃癌临床病理学特征的关系［n（%）］Table 1 Relationship between MSI、HGF and clinicopathological characteristics of gastric cancer［n（%）］

2.3 胃癌患者MSI 与HGF 表达的关系

在38 例MSI 胃癌患者中，HGF 表达阳性患者为33 例（86.84%），62 例MSS 胃癌患者中，HGF 表达阳性患者为39 例（62.90%），MSI 与MSS 胃癌患者中HGF 表达阳性比较，差异有统计学意义（χ2=6.697，P＜0.05）。spearman 相关性分析显示：MSI 与HGF 表达呈负相关（r=-0.259，P＜0.05）。

2.4 MSI及HGF 表达与胃癌预后关系

末次随访显示，100 例胃癌患者中死亡39 例（39.00%），生存61 例（61.00%），Kaplan-Meier 生存分析显示，MSI 与MSS、HGF 表达阴性与HGF 表达阳性胃癌患者的生存时间比较差异有统计学意义（P＜0.05），MSI 组胃癌患者生存率显著高于MSS组，HGF 表达阴性胃癌患者生存率显著高于HGF表达阳性（P＜0.05）。见表2、图2。

图2 MSI 与MSS、HGF 表达阳性与HGF 表达阴性胃癌患者预后的生存曲线Figure 2 Survival curve of prognosis of gastric cancer patients with MSI and MSS，HGF expression positive and HGF expression negative

表2 MSI 与HGF 表达与胃癌预后关系Table 2 The relationship between the expression of MSI and HGF and the prognosis of gastric cancer

2.5 胃癌患者预后生存影响因素分析

结果显示：两组在性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置、肿瘤Lauren 分型、分化程度上比较差异无统计学意义（P＞0.05），但在TNM 分期、淋巴结转移、MSI、HGF 表达上比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 胃癌患者预后生存影响因素分析［n（%）］Table 3 Analysis of factors affecting the prognosis and survival of patients with gastric cancer［n（%）］

2.6 影响胃癌患者生存状况的多因素COX 回归分析

以“死亡组”为因变量（赋值：0=是，1=否），以“TNM 分期、淋巴结转移、MSI、HGF 表达”为自变量，纳入COX 回归分析。多因素COX 回归分析显示，TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移阳性、HGF 表达阳性均为胃癌患者预后的危险因素，MSI 为其保护因素（P＜0.05），见表4。

表4 胃癌患者预后影响因素的COX 回归分析Table 4 COX regression analysis of factors affecting the prognosis of patients with gastric cancer

3 讨论

微卫星不稳定（MSI）是由于DNA 错配修复机制发生异常而导致基因重复序列发生错乱，在肿瘤的发生和发展中发挥了重要作用［8］。MSI 最早发现于结直肠癌中，被认为是遗传性非息肉病性结直肠癌的特征，后又于多种散发性肿瘤（胃癌、肺癌等）中发现。但研究表明，胃癌与结直肠癌中MSI产生机制不同，在结肠癌中，多由MMR 中h-MLH1和h - MSH 2 的突变产生，而MSI- H 胃癌多因h -MLH1 启动子甲基化所致［9］。胃癌是复杂生物过程中多种调控基因功能紊乱导致，外基因改变与基因不稳定性是导致调控基因紊乱主要原因。且既往研究表明：MSI-H 与MSI-L、MSS 相比，具有独特的临床病理特征且根治术后多化疗胃癌患者能否最终获益同MSI 状态密切相关［10］。在本研究中MSI-H 组患者中发生于胃窦、肠型、TNM 分期早期、淋巴转移阴性及低分化高于MSS 组与MSI-L 组。既往诸多研究一致结论显示，MSI 多点位阳性胃癌多发生于胃窦部，肠型，淋巴结转移较少，与本研究结果一致［11-12］。

肝细胞生长因子（HGF）是多功能细胞因子，也称为离散因子，具有刺激肝细胞增殖，促进上皮细胞的分裂作用，于血液及组织中广泛分布［13］。目前发现唯一HGF 高亲和力受体为cMET，正常生理情况下，HGF与cMET 受体结合可参与胚胎发育、组织再生等过程；但在肿瘤组织中，HGF与cMET 受体呈过表达，其通路可使肿瘤细胞间黏附作用减弱，细胞外基质降解，促进肿瘤血管刺激形成发生肿瘤细胞转移［14］。近年来有研究表明：HGF与cMET 受体结合通路与胃癌发生关系密切［15］。同时本研究spearman 相关性分析显示：MSI 与HGF 表达呈负相关。分析为：MSI 与HGF-cMET 通路存在交叉，二者共同参与胃癌发生发展。

MSI 与胃癌患者预后之间的关系仍然是一个非常有争议的问题，多数研究显示胃癌MSI患者对比MSS 患者的预后更良好，分析与MSI 肿瘤细胞攻击性较小，可激发免疫反应有关［10，16］。在本研究中，Kaplan-Meier 生存分析显示，MSI 与MSS、HGF 表达阴性与HGF 表达阳性胃癌患者的生存时间比较差异有统计学意义。MSI 组胃癌患者生存率显著高于MSS 组，HGF 表达阴性胃癌患者生存率显著高于HGF 表达阳性。在正常人体细胞中，HGF 受体可在短时间增加后恢复正常，但在肿瘤细胞中其持续过表达，使癌细胞能动性增强，加速肿瘤扩散，生存不佳。多因素COX 回归分析显示，TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移阳性、HGF 表达阳性均为胃癌患者预后的危险因素，MSI 为其保护因素。分析为：TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移阳性、HGF 表达阳性患者病情严重程度更高，预后风险越大，MSI 胃癌患者预后良好为其保护因素。

综上所述，MSI 组胃癌患者随访生存率显著高于MSS 组，HGF 表达阴性胃癌患者随访生存率显著高于HGF 表达阳性；TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移阳性、HGF 表达阳性均为胃癌患者预后的危险因素，MSI 为其保护因素。