饲粮添加茶多酚对长顺绿壳蛋鸡生产性能、蛋品质、血浆抗氧化指标及输卵管形态的影响

2021-12-08张柏林张丽娟郝美林宋培勇许润芳

动物营养学报 2021年11期

刘宁张柏林张丽娟朱敏郝美林宋培勇姚欣许润芳

(遵义师范学院生物与农业科技学院，赤水河流域特色动物资源保护与利用重点实验室，遵义 523006)

我国不但是禽蛋生产大国，也是禽蛋及其制品的消费大国。鸡蛋营养成分丰富，且营养素组成平衡，具有较高的生物学价值，是人们膳食的重要组成部分[1]。蛋品质是影响消费者购买鸡蛋的重要因素。近年来，随着人们消费观念的转变，消费者更倾向于购买蛋白浓厚、蛋黄颜色较深、个体较大、质量好的鸡蛋[2]。研究表明，蛋品质受蛋鸡健康水平、饲粮营养及饲养环境等多种因素的影响[3]。并且，蛋品质与输卵管的形态变化有关[4]。因而生产上通常采用营养调控的措施来改善蛋品质及维护蛋鸡机体健康[5]。

绿茶富含茶多酚(tea polyphenol，TP)，约占茶叶干重的30%。TP是一种天然的活性抗氧化物质，可以清除许多系统产生的活性氧自由基，保护细胞免受损害[6]，维护动物机体健康。研究发现，在蛋鸡饲粮中添加绿茶提取物可提高产蛋后期产蛋量、饲料效率和改善蛋品质[7]。并且，饲粮添加TP有利于改善机体的抗氧化状态[8]。因而，通过饲粮添加TP来维护机体健康和改良蛋品质也受到越来越多研究者的关注。但是，有关TP对蛋品质影响的结果却不尽相同。卢垚[9]选用48周龄罗曼粉蛋鸡作为研究对象，在其饲粮中添加0、150、200、250、300和350 mg/kg的TP，结果显示，饲粮添加TP对蛋鸡生长性能及蛋品质均没有显著影响。Ding等[10]研究表明，饲粮添加400 mg/kg的TP能够显著增加鸡蛋的蛋白高度和哈夫单位。而汪小红[11]研究表明，饲粮添加400 mg/kg的TP对鸡蛋的蛋白高度、哈夫单位没有显著影响。但到目前为止，有关TP对绿壳蛋鸡蛋品质及输卵管健康的影响鲜有报道。因此，本试验选用180日龄长顺绿壳蛋鸡为研究对象，在其饲粮中添加不同水平的TP，探讨其对长顺绿壳蛋鸡生产性能、蛋品质、血浆抗氧化指标及输卵管形态的影响，为TP在蛋鸡实际生产中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计及饲养管理

长顺绿壳蛋鸡由遵义市稼林合作社永杰绿色养殖场提供。选择180日龄健康状况良好的长顺绿壳蛋鸡240只，随机分为3个组，每组10个重复，每个重复8只鸡。对照组饲喂基础饲粮，试验组分别在基础饲粮的基础上额外添加200和400 mg/kg的TP(纯度≥95%)。TP添加量参照何柳青[1]。预试期1周，正试期8周。

所有鸡只进行半开放式立体3层笼养，每天早、中、晚各喂料1次，整个试验期鸡只饲喂粉料，自由采食和饮水。饲粮参照我国《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)配制，基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

续表1项目Items含量Content磷酸氢钙CaHPO41.40石粉Limestone8.60氯化胆碱Cholinechloride0.10植酸酶Phytase0.02食盐NaCl0.30预混料Premix1)1.00合计Total100.00营养水平Nutrientlevels2)代谢能ME/(MJ/kg)11.47粗蛋白质CP16.63赖氨酸Lysine0.78蛋氨酸+半胱氨酸Methionine+cystine0.68钙Ca3.50有效磷AP0.34

1.2 试验仪器

电子天平(FA-1004，上海精密科学仪器有限公司)；紫外可见分光光度计(UV-759，上海精密科学仪器有限公司)；低温高速离心机(2-16KL，美国Sigma公司)；掌式离心机(LX 400，海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；漩涡混匀器(QL-901，海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；游标卡尺(IP54，南京苏测计量仪器有限公司)；罗氏比色扇(EA-01，北京天域飞翔仪器设备有限公司)；蛋白高度测定仪(EA-Q1，北京天祥飞域科技有限公司)；智能型分光测试仪(YS3010，深圳市三恩驰科技有限公司)。

1.3 血液样品采集

试验结束前1天，所有鸡只进行12 h禁饲处理，自由饮水。于试验结束当天08：00每个组选择10只鸡(每个重复1只鸡)进行翅下静脉采血，至盛有肝素钠包被的离心管中，然后在3 000 r/min条件下离心10 min，收集上清并分装，置于-20 ℃保存待测。

1.4 测定指标与方法

1.4.1 生产性能

试验期间每天按重复记录产蛋总数、总蛋重、采食量和饲料消耗量，以重复为单位计算产蛋率、平均蛋重、平均日采食量和料蛋比，计算公式如下：

产蛋率=100×每个重复试验期产蛋总数/(每个重复鸡只数×试验天数)；平均蛋重=每个重复试验期总蛋重/产蛋数；平均日采食量=每个重复试验期采食量/试验天数；料蛋比=每个重复试验期饲料消耗量/总蛋重。

1.4.2 蛋品质

以重复为单位在第4和8周末收集鸡蛋，每个重复收集10枚鸡蛋，于收集后48 h内测定蛋品质，具体测定指标如下。

蛋黄颜色：将蛋黄分离在培养皿中，用罗氏比色扇进行对比评分，每个蛋黄均由3位不同的评分者进行评分，计算平均值作为蛋黄颜色值。

蛋白指数和蛋黄指数：用分析天平分别称量鸡蛋的总重(g)、蛋黄重(g)和蛋白重(g)。按下列公式进行计算。

蛋黄指数(%)=(蛋黄重/蛋总重)×100；蛋白指数(%)=(蛋白重/蛋总重)×100。

蛋壳厚度：将鸡蛋的钝端、中部、锐端的蛋壳剔除内壳膜后，用游标卡尺分别测定3次，取其平均值。

蛋壳颜色：用分光测色仪在鸡蛋的锐端、中间和钝端分别进行测定其亮度(L*)、红度(a*)及黄度(b*)值，然后计算各部位的平均值。

蛋形指数：用游标卡尺分别测量蛋的纵径(mm)和横径(mm)。按下列公式进行计算。

蛋形指数=纵径/横径。

哈夫单位：将鸡蛋打碎后放于蛋白高度测定仪上，避开系带，取蛋黄边缘与浓蛋白边缘的3点，3个点之间形成正三角形，测量其浓蛋白高度，然后取平均值。按下列公式进行计算。

哈夫单位=100×log(H-1.7×W0.37+7.57)。

式中：H代表蛋白高度(mm)；W代表蛋重(g)。

1.4.3 血浆抗氧化指标

采用试剂盒测定血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和葡萄糖(GLU)、丙二醛(MDA)含量以及总抗氧化能力(T-AOC)，操作规程按照试剂盒说明书进行，所用试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

1.4.4 输卵管形态

在试验结束当天，鸡只血液采集后立即宰杀，打开腹腔，采集2 cm左右的输卵管膨大部，置于4%甲醛溶液中进行固定保存。切取1 cm左右固定好的组织放入包埋盒中，流水冲洗24 h。然后依次通过梯度酒精溶液及二甲苯溶液，最后置于60 ℃石蜡中进行包埋。制作石蜡切片，并进行苏木精-伊红溶液染色。采集输卵管膨大部图片，用Image Pro plus 6.0软件测量输卵管膨大部绒毛高度(μm)和绒毛宽度(μm)。

1.5 数据处理

数据采用SPSS 25.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，若差异显著则采用Duncan氏法进行多重比较。试验数据以“平均值±标准差”表示。P<0.05为差异显著，0.05

2 结果

2.1 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡生产性能的影响

如表2所示，与对照组相比，饲粮添加200和400 mg/kg的TP均显著降低了1～4周蛋鸡的平均蛋重和平均日采食量(P<0.05)，但对料蛋比没有显著影响(P>0.05)。并且，与对照组相比，饲粮添加400 mg/kg的TP显著降低了5～8周蛋鸡的平均日采食量(P<0.05)，有降低料蛋比的趋势(P=0.057)，但对平均蛋重没有显著影响(P>0.05)。然而，与对照组相比，饲粮添加200 mg/kg的TP对5～8周蛋鸡的平均蛋重、平均日采食量和料蛋比均没有显著影响(P>0.05)。与对照组相比，饲粮添加200和400 mg/kg的TP对1～8周蛋鸡的平均蛋重、平均日采食量及料蛋比均没有显著影响(P>0.05)。饲粮添加200和400 mg/kg的TP对1～4周、5～8周和1～8周蛋鸡的产蛋率均没有显著影响(P>0.05)。

表2 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡生产性能的影响Table 2 Effects of dietary TP on performance of Changshun green-shell laying hens

2.2 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡蛋品质的影响

如表3所示，与对照组相比，饲粮添加400 mg/kg的TP显著提高了第4和8周鸡蛋的哈夫单位和蛋黄颜色(P<0.05)，但对蛋黄指数、蛋壳颜色(a*、b*和L*值)、蛋白指数和蛋形指数没有显著影响(P>0.05)。此外，饲粮添加400 mg/kg的TP显著增加了第8周鸡蛋的蛋壳厚度(P<0.05)。然而，与对照组相比，饲粮添加200 mg/kg的TP显著提高了第4和8周鸡蛋的哈夫单位(P<0.05)，但对第4和8周鸡蛋的其他蛋品质指标没有显著影响(P>0.05)。

表3 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡蛋品质的影响Table 3 Effects of dietary TP on egg quality of Changshun green-shell laying hens

2.3 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡血浆抗氧化指标的影响

如表4所示，与对照组相比，饲粮添加200 mg/kg的TP对蛋鸡血浆MDA和GLU含量均没有显著影响(P>0.05)。然而，饲粮添加400 mg/kg的TP显著降低了蛋鸡血浆MDA含量(P<0.05)，但对血浆GLU含量没有显著影响(P>0.05)。与对照组相比，饲粮添加200和400 mg/kg的TP均显著提高了血浆GSH-Px和SOD活性(P<0.05)，显著增加了血浆T-AOC(P<0.05)。并且，与饲粮添加200 mg/kg的TP相比，饲粮添加400 mg/kg的TP显著增加了血浆GSH-Px活性(P<0.05)。

表4 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡血浆抗氧化指标的影响Table 4 Effects of dietary TP on plasma antioxidant parameters of Changshun green-shell laying hens

2.4 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡输卵管形态的影响

如图1所示，对照组输卵管膨大部皱襞出现了大量的管状腺体萎缩，腺体内可见较多的散在空泡，表面纤毛较稀疏，仅见少量的分泌颗粒。200 mg/kg TP组输卵管膨大部皱襞较对照组稍有改善，有部分的管状腺体萎缩，腺体内有少量的散在空泡，仅见少量的分泌颗粒。400 mg/kg TP组未见腺体萎缩，可见大量的分泌颗粒。

如图2所示，与对照组相比，饲粮添加200 mg/kg的TP对蛋鸡输卵管膨大部绒毛高度和绒毛宽度均没有显著影响(P>0.05)。然而，与对照组相比，饲粮添加400 mg/kg的TP显著增加了蛋鸡输卵管膨大部绒毛高度和绒毛宽度(P<0.05)。200 mg/kg TP组与400 mg/kg TP组蛋鸡输卵管膨大部绒毛高度和绒毛宽度均没有显著差异(P>0.05)。

3 讨论

3.1 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡生产性能的影响

本研究发现，与对照组相比，饲粮添加400 mg/kg的TP显著降低了1～4周长顺绿壳蛋鸡的平均日采食量和平均蛋重，显著降低了5～8周长顺绿壳蛋鸡的平均日采食量，有降低料蛋比的趋势。与此相似，汪小红[11]以海兰灰蛋鸡进行研究发现，饲粮添加400 mg/kg的TP降低了1～4周蛋鸡的平均蛋重和4～8周蛋鸡的料蛋比。何俊金等[12]选用480羽65周龄罗曼粉壳蛋鸡作为试验对象，在饲粮中分别添加666、1 333和2 666 mg/kg的TP(含量为63.58%)，结果表明，饲粮添加高水平TP(1 333和2 666 mg/kg)均可降低蛋鸡的生产性能，主要表现为平均蛋重的下降和料蛋比的增加。此外，研究表明，饲粮添加5%和10%绿茶粉则会显著降低蛋鸡的平均蛋重[13]。Xia等[14]选用20周龄仙居鸡为研究对象，在饲粮中分别添加1%、2%和3%的绿茶粉(绿茶粉中TP含量为16.52%)，结果表明，饲粮添加2%绿茶粉对蛋鸡平均蛋重和平均日采食没有显著影响，而饲粮添加3%绿茶粉显著降低了蛋鸡平均蛋重和平均日采食量。以上结果提示，饲粮添加高水平的TP对蛋鸡生产性能产生了不利影响。这可能是由于添加高水平的TP降低了饲粮的适口性(TP具有苦涩味)，进而影响了采食量。并且生产性能与营养及能量水平具有显著的相关性[15]，而采食量的降低可能造成了养分及能量摄入的不足，最终引起生产性能的下降。另外，TP中儿茶素抑制了肠道对脂肪的吸收和脂肪合酶活性，蛋黄脂质形成受阻[13,16]，进而影响蛋重。此外，绿茶提取物也可能通过降低血浆脂蛋白含量，增加肝脏脂蛋白酯酶活性而降低蛋重[17]。

数据柱标相同小写字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。Value columns with the same small letter mean no significant difference (P>0.05),while with different small letters mean significant difference (P<0.05).图2 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡输卵管膨大部绒毛高度和绒毛宽度的影响Fig.2 Effects of dietary TP on villus height and villus width in oviduct magnum of Changshun green-shell laying hens

E：单层柱状上皮细胞 simple columnar epithelium；G：管状腺细胞 tubular gland cell。图1 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡输卵管膨大部皱襞形态的影响Fig.1 Effects of dietary TP on magnum morphology of oviduct folds of Changshun green-shell laying hens

3.2 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡蛋品质的影响

哈夫单位是衡量鸡蛋内在品质的重要指标。本试验结果显示，饲粮添加200和400 mg/kg的TP显著提高了第4和8周鸡蛋的哈夫单位和蛋黄颜色，但对蛋品质的其他指标没有显著影响。有研究报道，饲粮添加3%绿茶粉显著增加了鸡蛋的蛋黄颜色[14]。王人悦[18]研究表明，饲粮添加400 mg/kg的TP显著增加了鸡蛋的蛋黄颜色，这可能是由于TP促进了机体对色素类物质的吸收。Ding等[10]研究表明，饲粮添加400 mg/kg的TP显著增加了鸡蛋的哈夫单位和蛋白高度。Biswas等[19]研究同样表明，饲粮添加0.3%绿茶粉能够提高鸡蛋的哈夫单位。以上结果提示，饲粮添加绿茶粉或TP有助于改善鸡蛋的蛋白品质，这可能是由于饲粮添加绿茶粉或TP有助于蛋清中β-卵黏蛋白的形成[20]，而β-卵黏蛋白通过参与蛋白质和多糖复合物的形成而改善蛋白品质[21]。但何柳青[1]选用810只44周龄健康的绿壳蛋鸡为试验对象，结果发现，饲粮添加200和400 mg/kg的TP对鸡蛋的哈夫单位和蛋黄颜色没有影响，这可能是由于鸡只日龄不同引起。

3.3 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡血浆抗氧化指标的影响

GSH-Px和SOD是动物体内清除体内自由基的主要酶系统[18]，其活性增高可以有效抑制动物机体氧自由基的生成和脂质过氧化。MDA作为脂质过氧化的终产物之一，其含量可以作为脂质过氧化程度的检测指标[22]。T-AOC是衡量机体抗氧化系统功能状况的综合性指标，可反映机体抗氧化酶系统和非酶系统对外来刺激的代偿能力以及机体自由基代谢状态的强弱[23]。研究证实，TP具有良好的抗氧化特性，能够清除体内的游离自由基，阻止脂质抗氧化，改善体内抗氧化酶活性[24]。本研究发现，饲粮添加TP增加了血浆T-AOC，降低了血浆MDA含量，提高了血浆GSH-Px和SOD活性。有研究报道，TP可以诱导GSH-Px、SOD等抗氧化物酶的生成，并激活体内抗氧化物酶系统，从而提高机体的抗氧化能力[25]，这与本研究的结果一致。胡经纬等[26]研究证实，饲粮添加TP显著增加了蛋鸡血浆GSH-Px和SOD活性。李忠浩等[27]研究同样发现，饲粮添加TP增加了蛋鸡血浆GSH-Px和SOD活性，降低了血浆MDA含量。以上结果提示，饲粮添加TP可提高蛋鸡抗氧化性能，主要原因如下：1)TP能够清除体内超氧阴离子自由基及羟基自由基，减少脂质过氧化物含量，从而减轻体内脂质受活性氧自由基攻击的损害[1]；2)TP能激活体内抗氧化酶及其转录系统，从而提高机体抗氧化能力；3)TP可再生和保护体内非特异性抗氧化物质维生素C和维生素E，能够与金属离子络合，抑制以金属离子介导或催化的相关脂蛋白氧化和氧化酶的表达，降低机体的氧化损伤[28-29]。

3.4 饲粮添加TP对长顺绿壳蛋鸡输卵管形态的影响

输卵管膨大部是蛋白合成和分泌的重要场所。因此，输卵管膨大部的健康情况影响着鸡蛋的蛋白品质。各种应激源、营养失衡和持续高产等因素都会对蛋鸡输卵管造成氧化损伤[30]。TP通常包含2个以上的羟基，可以提供活性氢并有效清除体内多余的活性氧自由基[31]，从而维护输卵管健康。研究证实，TP具有抗氧化性及抗炎症反应的特性，有利于蛋鸡的健康[32-33]。并且，饲粮添加TP增加了输卵管膨大部褶皱高度，有利于改善输卵管膨大部形态[20]。本研究结果显示，饲粮添加400 mg/kg的TP改善了蛋鸡输卵管膨大部黏膜形态，显著增加了输卵管膨大部绒毛高度和绒毛宽度，但饲粮添加200 mg/kg的TP对输卵管膨大部黏膜形态无显著影响。这提示TP对输卵管膨大部形态的改善作用具有一定的剂量依赖性。本研究也发现，饲粮添加400 mg/kg的TP显著改善了鸡蛋的哈夫单位，说明输卵管膨大部褶皱高度可能是影响蛋白形成的重要因素[4]。这也与TP对输卵管膨大部形态的改善相一致，这可能与TP的抗氧化性有关。