MicroRNA-146a在脓毒症并发心肌功能损伤中的表达和意义

金少峰，周奋，毛海燕

（宁波市医疗中心李惠利医院，浙江 宁波 315041）

脓毒症患者细胞因子、免疫和内皮细胞相互作用，出现微循环紊乱导致器官功能障碍甚至衰竭[1]。MicroRNAs是一种非编码的12-23个核苷酸RNA分子，通过与靶信使RNA结合调控转录后基因表达。MicroRNA-146a是MicroRNAs家族中的一员，MicroRNA-146a的表达影响许多生物系统，包括哺乳动物的免疫系统和心血管系统[2]。有研究报道[3]，MicroRNA-146a表达的增加可以保护心肌免受菌血症导致的心功能障碍，减少心肌巨噬细胞和中性粒细胞的浸润。本研究探讨MicroRNA-146a与脓毒症患者心肌功能损伤的相关性，为治疗提供思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年3月-2020年12月本院脓毒症心肌功能损伤患者50例为心肌功能损伤组，选取同期50例脓毒症但无心肌功能损伤的患者作为脓毒症组。纳入标准：（1）年龄18-65岁；（2）心功能损伤组心脏左室射血分数≤50%。排除标准：（1）肝肾功能不全；（2）有原发或继发的心、脑、肺功能不全；（3）临床资料不全；（4）既往心肌功能有损伤如存在BNP增高等。两组性别、年龄等一般资料差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。本研究通过本院伦理委员会批准且患者知情同意。

表1 两组一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 样本采集 采集患者外周血5mL放入抗凝管中，5mL放入离心管中，在4℃条件下3500r/min离心15分钟，吸取血浆和血清，置于-80℃保存，待用。

1.2.2 提取血浆RNA 采用Ambion RNA试剂盒（Thermo Scientific公司，美国）提取血浆中的RNA，根据试剂盒说明书操作，NanoDrop微量分光光度计（Thermo Scientific公司，美国）测量RNA的浓度检测。采用逆转录RNA试剂（Hifair®Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR）测量miRNA的逆转录，根据试剂盒说明书操作，提取cDNA放置在-20℃保存待测。

1.2.3 qRT-PCR检测 待测样本的PCR反应体系如表 2， 反应条件设置为 94℃（2 分钟）、94℃（10 秒）；60℃（15秒）、72℃（30秒），40 个循环，实验根据试剂盒说明书操作。qRT-PCR检测反复进行3次。详见表2。

表2 实时荧光定量PCR反应体系

1.3 观察指标 两组血清MicroRNA-146a的表达；心功能指标，包括左心室射血分数（LVEF）、每搏排血量（SV）、心脏指数（CI）；心肌损伤标志物，包括 B 型利钠肽（BNP）、心肌钙蛋白 T（CT-nT）；炎性因子（TNF-α、IL-10、CRP）。

1.4 统计学处理 采用SPSS 20.0对数据进行分析统计。计量资料以（±s）表示，采用 t检验；MicroRNA-146a与脓毒症患者各指标的相关性采用χ2相关分析。

2 结果

2.1 MicroRNA-146a表达 心肌功能损伤组MicroRNA-146a 相对表达水平（52.21±10.63）高于脓毒症组（3.01±1.12），差异有统计学意义（P＜0.01）。

2.2 心功能 心肌功能损伤组LVEF、SV和CI低于脓毒症组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。详见表3。

表3 两组心功能比较（±s）

表3 两组心功能比较（±s）

与脓毒症组比较**P＜0.01

组别 n LVEF（%） SV（mL） CI（L/min·m2）脓毒症组 50 58.18±5.13 68.24±7.07 3.78±1.02心肌功能损伤组 50 40.24±4.02** 56.01±4.79** 1.54±0.52**

2.3 心肌损伤标志物 心肌功能损伤组的BNP、CT-nT和CRP均高于脓毒症组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。详见表 4。

表4 两组心肌损伤标志物比较（±s）

表4 两组心肌损伤标志物比较（±s）

与脓毒症组比较**P＜0.01

组别 n BNP(ng/mL) CT-nT(pg/mL)脓毒症组 50 38.53±8.51 23.27±8.13心肌功能损伤组 50 245.42±67.16** 532.78±53.72**

2.4 炎性因子 心肌功能损伤组TNF-α、IL-10及CRP高于脓毒症组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。 详见表 5。

表5 两组炎性因子水平比较（±s）

表5 两组炎性因子水平比较（±s）

与脓毒症组比较**P＜0.01

组别 n TNF-α（pg/mL） IL-10（pg/mL） CRP（mg/mL）脓毒症组 50 9.07±4.12 10.76±3.09 5.85±2.31心肌功能损伤组 50 189.22±35.32** 98.22±16.72** 90.42±23.16**

2.5 相关性分析 MicroRNA-146a的表达量与BNP、CT-nT和炎性因子TNF-α、CRP呈正相关性（r=0.857、0.822、0.912、0.893；均 P＜0.01）；与 LVEF、SV、CI负相关（r=-0.473、-0.643、-0.783；均 P＜0.01）。MicroRNA-146a的表达量与炎性因子IL-10水平无相关性。

3 讨论

心血管系统对miRNAs的水平变化非常敏感，组织中miRNAs表达失调与心血管疾病直接相关[4]。MicroRNA-146a最初被确定为先天免疫和炎症反应中的负调控因子，由TLRs介导[5]。LPS和细胞因子刺激THP-1细胞可显著增加成熟MicroRNA-146a的表达[6]，在LPS的作用下心肌细胞和巨噬细胞中MicroRNA-146a的表达增加。脓毒症心肌功能损伤与心肌缺血及心力衰竭的指标BNP、CT-nT等有关[7]。本文检测了研究对象的炎性因子水平和心肌功能指标，发现心肌功能损伤组的MicroRNA-146a高于对脓毒症组，炎性因子、心肌损伤标志物水平也高于脓毒症组，而心功能指示低于脓毒症组。相关性分析发现，MicroRNA-146a与心肌功能损伤指标（BNP、CT-nT）以及炎性因子（TNF-α、CRP）呈正相关，与 LVEF、SV、CI呈负相关，说明血清MicroRNA-146a可以作为脓毒症患者心肌功能损伤的预测指标。其他报道也证实了血清MicroRNA-146a与心肌功能损伤密切相关，促进心肌细胞凋亡、心肌纤维化和冠状动脉斑块的形成[8]。脓毒症是一种由细菌感染引起的全身炎症综合征，可导致多器官功能衰竭的疾病，尤其是心脏功能损伤是脓毒症常见的并发症，严重可引起心律失常和心力衰竭[9]。脓毒症的主要炎性介质 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10等，它们由巨噬细胞和单核细胞分泌，负责感染性级联反应的放大，已被证明可引起发烧、低血压和心肌抑制[10]。在严重的脓毒症中，持续的全身性炎症可将稳定的动脉粥样硬化斑块转变为不稳定的斑块，导致斑块破裂或中风。有研究报道，将心肌细胞暴露于促炎性细胞因子（如TNF-α，IL-1β和IL-6），促炎性细胞因子的急性释放在心肌细胞抑制中扮演重要角色[11]。心肌损伤后的脓毒症患者其炎性因子水平升高加剧，影响患者预后。

综上，MicroRNA-146a可作为脓毒症伴心肌功能损伤的判断指标，有利于脓毒症的临床研究。