青海高山辣根菜中水溶性总多糖的提取工艺研究

2021-12-07刘明珠芦永昌

青海农林科技 2021年4期

王欢，刘明珠，芦永昌*

(1.青海民族大学药学院，青海西宁 810007；2.青海省青藏高原植物资源化学研究重点实验室，青海西宁 810007；3.青海省药物分析重点实验室，青海西宁 810007；4.青海省现代藏药创制工程技术研究中心，青海西宁 810007)

高山辣根菜(Pegaeophytonscapiflorum)为十字花科植物无茎荠的干燥根和根茎[1-3]。根茎顶端有数个分枝，有密集横环纹，其上有叶柄残基。根圆柱形，长5-16cm，直径0.6-1.5cm。表面黄棕色至灰黄褐色，粗糙，有明显的皱纹和纵沟。质松泡，易折断，断面不整齐，皮部淡棕色至黄棕色，木部淡黄白色至浅黄棕色，周边与中心部呈灰白与黄色相间的花纹。《藏医卷》记载其主要用于肺热及肺病引起的咳嗽、咯血、肺水肿、气管炎和发热等的治疗。藏医经典著作中对其功效的记载为清热滋阴和凉血止血[4-5]。本试验研究高山辣根菜中多糖的含量。

1 材料与方法

1.1 仪器、试剂、药材

ST-08B型高速万能粉碎机(永康市帅通工具有限公司)；台式高速冷冻离心机(赛墨飞世尔科技有限公司)；UV-Vis 1240型紫外—可见分光光度计(岛津(香港)有限公司)；HH-4型数显恒温水浴锅(金坛市江南仪器厂)；电子天平(梅特勒—托力多仪器有限公司)；DZF6050型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。

葡萄糖、苯酚、95%乙醇、浓硫酸、0.3mol/L HCl、0.3mol/L NaOH均为分析纯。

2020年7月，高山辣根菜采于青海省，经青海民族大学芦永昌教授鉴定为高山辣根菜。

1.2 试验方法

1.2.1对照品贮备液的制备

精密称取105℃烘干至恒重的葡萄糖对照品1.0g葡萄糖，用适量蒸馏水溶解再用水定容到100ml容量瓶中，摇匀。再从中吸取1ml移入25ml容量瓶，用水定容，摇匀，即得0.4mg/ml的对照品贮备液。

1.2.2 苯酚溶液的制备

称取苯酚25.0g，用适量蒸馏水溶解，最后定容于500ml棕色容量瓶中，摇匀，即得质量分数为5%的苯酚溶液，置冰箱中冷藏备用。

1.2.3 标准曲线的制备

精密量取标准液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于10ml容量瓶中，再依次加入1.0(空白对照)、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml蒸馏水使成1.0ml，加入新制的5%苯酚溶液1.0ml，摇匀，迅速沿壁加入浓硫酸5ml，摇匀，室温冷却后，加水定容至刻度。将以上样品于30℃水浴中加热显色15min，室温冷却，于紫外—可见分光光度计上490nm波长处测其相对应的吸光度，记录数据。以吸光度A对其相对应的葡萄糖浓度C进行线性关系拟合，获得标准曲线，如图1所示。研究结果表明，线性关系良好，相关方程为A=0.0191C+0.0291，r=0.9995。

1.2.4 最大吸收波长的选择

取对照品溶液1ml于10ml容量瓶中，以1ml蒸馏水同法显色做空白，按照1.2.3项下的操作方法显色，在350-700nm间进行紫外光谱扫描(扫描间距2nm)。另取样品溶液1ml同法显色重复试验，结果发现二者均在490nm处有最大吸收峰，因此确定最大检测波长为490nm[6-8]。

1.2.5 正交试验设计

在单因素试验的基础和相关文献的参考下[9-11]，对提取过程采取正交试验设计。以高山辣根菜多糖提取液中多糖提取率为考察指标，对工艺中的固液比、提取温度、提取时间、提取次数进行考察，因素及水平设计见表。

表1 正交实验因素水平Table.1 Orthogonal experimental factors

2 结果与分析

2.1 提取次数对多糖得率的影响

在温度为85℃中回流提取，固定料液比(液为水)1∶20，提取时间2h，分别对2.0g高山辣根菜粉末提取1、2、3、4、5次，过滤且将滤液定容于50ml容量瓶中。再从上述溶液中取1ml定溶于25ml容量瓶。继续从以上稀释的样品中取1.0ml，加以上显色剂于10ml容量瓶中显色，定容后测其相对应的吸光度，总多糖提取率的结果如图2所示。实验结果表明，提取3、4、5次的提取率和提取2次时的提取率相差不大，考虑节省时间，最优提取次数选为提取2次。

2.2 固液比对多糖得率的影响

温度为85℃中回流提取，固定提取次数2次，提取时间2h，分别对2.0g药材加入1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30的水进行提取，过滤并将滤液定容于50ml容量瓶中。以上容量瓶中取1ml定溶于25ml容量瓶，再继续从以上稀释后样品中取1.0ml加入以上显色剂于10ml容量瓶中显色定容后测吸光度，多糖的提取率如图3所示。由试验结果可知，料液比在1∶20后提取率增加不明显，考虑节省资源，最佳料液比选为1∶20。

2.3 提取时间对总多糖提取率的影响

温度为85℃中回流提取，固定料液比1∶20，提取次数2次，分别对2.0g药材进行1、1.5、2、2.5、3h提取，过滤且将滤液定容于50ml容量瓶中。从上述溶液中移取1ml定溶于25ml容量瓶，再继续从以上稀释液中移取1.0ml，加入显色剂于10ml容量瓶中显色定容后测其相对应的吸光度，结果如图4所示。由试验结果可知，提取时间为2h后，多糖的提取率增加不明显，因此，该试验最佳提取时间选为2h。

2.4 提取温度对多糖得率的影响

固定料液比1∶20，提取次数2次，提取时间为2h，分别对2.0g药材在65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃进行提取，过滤且将滤液定容于50ml容量瓶中。从以上溶液中移取1ml定溶于25ml容量瓶，再从以上稀释溶液中取1.0ml，加显色剂于10ml容量瓶中显色定容后测其相对应的吸光度，实验结果如图5所示。由研究结果可知，总多糖提取率在温度为85℃后提取率变化不大，因此，最佳的提取温度为85℃。