酸枣果肉多糖含量测定

查 娜，南 丁，娜 仁

(阿拉善盟食品药品检验研究中心 巴彦浩特 750306)

酸枣为鼠李科植物酸枣 Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) Hu ex H.F.Chow.的干燥成熟果实。又名山枣、野枣，喜欢温暖且干燥的环境，耐干旱、耐寒、耐碱，是普遍分布于我国华北、西北、内蒙古、辽宁等地的野生药用植物，也是较早被收录在我国卫生部颁布的药食同源的两用品种。中医典籍《神农本草经》中很早就有记载，酸枣“味酸平”。唐代以后，入药改果实为种仁[1]。酸枣仁是《中国药典》收载的中药材。目前，酸枣主要入药部位为种子，其酸枣果肉的使用、开发、利用较少，部分被用于其附加产品，比如酸枣汁、酸枣糕、酸枣面等。相关报道及研究显示酸枣果实具有相当的药用价值，酸枣果肉含三萜类化合物、有机酸、矿物元素、糖类等有效成分。研究其药用成分和含量有助于酸枣的全面利用和产业的发展。所以，本文针对酸枣果肉多糖进行了测定及研究，为酸枣多糖的利用提供有效的科学依据和数据。

1 仪器试剂与样品

1.1 仪器

岛津公司UV-2450型紫外-可见分光光度仪

1.2 试剂

5%苯酚溶液；硫酸(优级纯)；D-无水葡萄糖对照品(批号：110833-201908，中国食品药品检定研究院)。

1.3 样品(酸枣果肉)

野生酸枣3批(阿拉善、巴彦诺尔、宁夏)，网购酸枣4批(辽宁、山西、甘肃、新疆)，种植酸枣1批(宁夏)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1mL中含0.1mg的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

样品提取参照《中国药典》2020年版一部枸杞子质量标准枸杞多糖含量测定方法。经过前期试验最终确定取样量为0.3g，去掉乙醚提取步骤，“加水100mL，加热回流2小时”连续提取2次。

2.3 样品测定条件的确定

按照供试品溶液制备方法，在300nm～600nm波长，测得酸枣果肉样品溶液紫外吸收光谱图(蓝线)与D-无水葡萄糖对照品溶液吸收光谱图(黑线)一致,且最大吸收波长为489nm、485nm，并参照《中国药典》[2]，最终确定测定波长为490nm，结果见图1。

图1 光谱图

2.4 标准曲线的制备

参照《中国药典》2020年版一部枸杞子质量标准枸杞多糖含量测定方法，制备标准曲线。得回归方程：y=0.005714x+0.00279,r2=0.99935(n=5)。结果表明，对照品溶液在22.620μg～113.10μg范围内呈良好的线性关系，见表1。

表1 线性关系考察结果

2.5 加样回收试验

取酸枣果肉样品约0.3g，精密称定9份，按照供试品溶液制备方法制备，精密量取0.5mL，置具塞试管中，分三组，每组三份，分别精密加入D-无水葡萄糖11.31μg、22.62μg、33.93μg，照标准曲线制备方法，自“各精密加入5%苯酚溶液1mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(μg)。计算回收率见表2。

表2 D-无水葡萄糖加样回收试验结果(n=9)

2.6 重复性试验

取酸枣果肉样品按供试品溶液方法制备6份，测定每份样品多糖含量。结果样品中多糖平均含量为6.2%，RSD%为1.3%，表明重复性良好见表3。

表3 样品多糖含量测定重复性试验结果

2.7 耐用性试验

考察供试品溶液的稳定性。供试品溶液在0，1h，2h，3h，4h测定其吸光度，结果无明显差异，确定4小时内供试品溶液较稳定。见表4。

表4 稳定性试验结果

2.8 样品含量测定

8批酸枣样品取果肉，按照供试品溶液制备方法制备、测定，多糖含量在4.5%～6.7%范围，结果见表5。

表5 样品含量测定结果

3 结论

根据上述实验，本方法操作简单可行、分析方法验证指标均符合要求，可作为酸枣果肉多糖含量测定的方法。研究并开发酸枣果肉当中多糖有效成分，不仅能避免酸枣药材的资源浪费，也有助于酸枣药材的产业发展。

4 注意事项

4.1试验发现，浓硫酸的纯度及加入方式对实验结果的影响较大，采用优级纯硫酸且沿壁缓慢加入摇匀，避免反应液暴沸溅出比色管。

4.25%苯酚溶液需临用现配。