草地土壤污染致雷州山羊颈部化脓创的诊疗

涂 轲，凌欣华，徐国宝

(梅州市农林科学院动物科学研究所，广东 梅州 514000)

1 实验材料

1.1 实验动物

雷州山羊1只，体重25 kg。由广东海洋大学农学院从附近农户家购买。实验前由广东海洋大学动物医院实验动物饲养员饲予青草、玉米粉，饲养一段时间临床检查健康后进行实验，试验期间自由摄食、饮水。

1.2 实验器材

手术盘、手术刀柄、手术刀片、手术剪、剪毛剪、止血钳、握式持针器、镊子、弯三棱缝针、10号缝线、一次性注射器(5 mL、10 mL、20 mL)、培养皿、培养基、接种环、载玻片、盖玻片、试管、试管架、酒精棉球、碘酊棉球、脱脂棉、纱布等。(以上器材均由广东海洋大学农学院临床兽医分室提供)

2 实验方法

2.1 试验药物及配置

3%双氧水：取100 mL 30%的过氧化氢，置于1 000 mL容量瓶中，加入蒸馏水定容至1 000 mL。

10%硫酸钠来苏儿：取50 g硫酸钠做溶质，溶解于400 mL 2%来苏儿中，混匀，用2%来苏儿定容至500 mL。

硫酸钠活性炭等量混合粉末：用电子天平称量等量的硫酸铜粉末与活性炭粉末，在干净的培养皿中研磨混匀，备用。

2.2 人造化脓创

在山羊放牧的草坪中随机选取5个土壤取样点，每个点取土壤20 g左右，取得的土壤样品置于干净托盘中，混匀后备用。用1:1 000～1：2 000浓度新洁尔灭溶液对手术器械进行浸泡消毒。选取颈部下1/3处，剪毛，剃毛，用酒精棉球、碘酊消毒后，用0.5%普鲁卡因于所选定的术部作局部浸润麻醉。沿血管走向，在距离颈背部约3指宽处避开血管作2～3 cm切口。以手术刀柄向下扩张切口，形成囊状，填充草地土壤。对侧颈部以同样方法处理。以左侧伤口为对照组，右侧伤口为治疗组。造病后，每天观察并记录创口的变化、体温、呼吸、脉搏及全身的其他变化。

2.3 临床诊断

实验动物造病后，每天观察、判断污染创口的发展转归情况，每2 d对实验动物的体温、脉搏、呼吸进行1次测量，以监测动物机体变化情况，直到治疗结束。

3 细菌的分离鉴定

3.1 器具清毒准备

将实验所需消毒灭菌的器械、培养皿、烧杯等物品进行流水清洗，置于烘干箱烘干后用牛皮纸包裹扎好，整齐地平放入蒸汽灭菌高压锅的内筒中，在121.3℃高温下灭菌30 min。超净工作台在使用前清理干净，紫外线照射1 h后，打开抽风设备，保持无菌环境，即可使用。

3.2 细菌的分离

在伤口化脓明显时，无菌操作，用无针头的无菌注射器从化脓创中抽取脓液，置于经灭菌的离心管中做好标记，及时进行划板培养，每个脓汁样分别在普通营养琼脂平板、血液琼脂平板做2个划线培养。

3.3 细菌培养

在超净工作台无菌的环境下，右手取针尖稍弯的接种环，火焰灭菌并冷却后，挑取少量脓液用三区划线的方法划线，左手取琼脂平板，在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入，右手将已沾脓汁的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/5～1/6，此为第一区。划线时接种环与琼脂呈30°～40°轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。划完第一区后接种环上经火焰灭菌，待冷后，在划线末端重复2～3根线后，再划下一区域(约占1/4面积)，此为第二区。第二区划完后可不烧灼接种环，用同样方法划第三区，划满整个平皿。划线完毕，将平板扣入皿盖并作好标记，置于37℃温箱孵育18～24 h，观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征(如大小、形状、透明度、色素等)。

3.4 细菌的鉴定

细菌涂片：取洁净、透明、无油迹的载玻片，先用接种环取少量水于玻片上，再挑取少量菌落，在液滴中混合并均匀涂布，自然干燥，将抹片的抹面向上，以其背面在酒精灯外焰上来回拖过数次，略加热(以不烫手为度)进行固定。

细菌染色及鉴定：用革兰氏染色法染色，将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1 min，水洗。滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。滴加脱色酒精，30s。水洗，滴加沙黄复染液，复染1 min。水洗，吸干或自然干燥，在光学显微镜下镜检，记录细菌颜色、形态、大小等。

4 治疗方法

1)清洁创围： 先用数层灭菌纱布块覆盖创面，后用剪毛剪将创围被毛剪去，剃干净，剃毛面积以距创缘周围10 cm左右为宜。离创缘较远的皮肤，可用肥皂水和消毒液洗刷干净。用酒精棉球涂擦创围皮肤，干后用5%的碘酊涂擦创围皮肤2次。

2)冲洗创腔： 用3%过氧化氢溶液和0.5%高锰酸钾交替反复冲洗创腔，直至脓汁排完。

3)清创术：扩大创口，除去深部异物，切除坏死组织，消灭创囊，做辅助切口，小心别损伤脓膜。

4)创伤用药：对照组侧灭菌纱布蘸10%硫酸钠来苏儿(2%)填塞创腔引流。治疗组侧灭菌纱布蘸2%来苏儿后，包裹硫酸钠粉活性炭粉(体积比1：1混合)填塞创腔引流。

5)根据创伤转归情况，进行治疗和换药。待伤口转为肉芽创后，用生理盐水冲洗创腔、创围，创面涂抹蜂蜜，创口表面覆以隔离用纱布。如创腔较大可对伤口进行缝合，加快伤口愈合。

5 结果

山羊颈部两侧的化脓创脓液中的致病菌经分离纯培养到2种不同形态的菌落，白色菌落和绿色菌落。

白色菌落致病菌在普通琼脂平板上生长良好，形成圆形、湿润、扁平、大小不等、灰白色的菌落。

白色菌落经革兰氏染色镜检结果：呈红色，单个散在，革兰氏染色阴性，短杆菌。

绿色菌落形成光滑，微隆起，边缘整齐波状，蓝绿色的中等大小菌落。

绿色菌落经革兰氏染色镜检结果：呈红色，单在、成对或偶尔成短链，革兰氏染色阴性，短杆菌。

6 讨论

随着社会的发展，人们对化脓创的研究、治疗等不断进步，治疗方法众多，但对化脓创的致病菌的分离鉴定以及耐药性研究依然重要，有人曾对伤口分泌物进行分离鉴定及耐药性的研究，革兰阴性杆菌为化脓性感染的主要病原菌，但葡萄球菌也在逐年增加，多数病原菌为多重耐药菌株。本次试验就针对草地土壤作为污染物致化脓创后，对其脓汁细菌进行分离鉴定以及药敏试验，了解草地土壤可致化脓创致病菌的种类。通过实验结果可以看到经草地土壤致化脓创致病菌是革兰氏阴性菌，该菌群对脂肽类、青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、头孢类等几大类抗菌药物均具有耐药性，对氟喹诺酮类抗生素敏感。提示该类化脓性感染治疗时应及时确定病原菌并进行药敏试验，合理使用抗生素有效控制感染，可在无药敏试验的情况下优先选用氟喹诺酮类抗生素作为治疗用药。