不同地区不同成熟度青梅有机酸的测定及相关性分析

赵旭珠 - 夏 陈 朱永清 - 陈 建 陈 渝

(1. 四川省农业科学院农产品加工研究所，四川 成都 610066；2. 四川丹梅生物科技有限公司，四川 达州 635000)

青梅(VaticamangachapoiBlanco)又称酸梅子、果梅等，为蔷薇科李属，果实直径2～3 cm，果皮颜色由绿色到黄色[1]。中国是青梅的原产地及世界上适合生产青梅地域最广的国家，广东、广西、四川、浙江、江苏、福建及台湾等18个省(自治区)均适合生产[2]。青梅营养价值和药用价值很高[3]，可以促进消化、改善肠道[4]、抗疲劳[5]、护肝[6]、预防心血管疾病[7]、抑菌、消炎[8]等。目前已有关于青梅中有机酸的相关研究报道，余洋洋等[1]对青梅中有机酸的种类进行了研究，发现青梅中有机酸含量最高的是柠檬酸和苹果酸，分别为6.5%，3.4%；翟焕趁等[9]对福建青梅中有机酸含量进行了测定，发现青梅中有机酸含量最高的是柠檬酸和苹果酸，分别为4.50%～4.83%，0.24%～0.67%。但未见文献对达州青梅中有机酸含量进行研究和分析。

青梅作为中国的特色果品之一，随着人们对其营养和价值的认识，青梅加工产品已成为科研开发和市场消费的热点[10]。达州作为“中国的乌梅之乡”，青梅的年均产量在10万t以上，但因为达州的鲜果转化成品条件不足，对青梅中有机酸等功效成分的基础研究比较缺乏。试验拟对10种有机酸进行全面分析，以期为达州青梅功效成分的深入研究、产品深加工提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料

鲜青梅样品(详见表1)：四川丹梅生物科技有限公司。

表1 9个不同区域同一品种青梅信息表

1.1.2 试剂

草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、L-乳酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸、齐墩果酸、熊果酸对照品：北京索莱宝科技有限公司；

甲醇、乙腈：色谱纯，美国MREDA公司；

磷酸、磷酸铵：分析纯，成都市科龙化工试剂厂；

试验用水均为超纯水。

1.1.3 主要仪器设备

电热恒温鼓风干燥箱：DHG-9075A型，上海齐欣科学仪器有限公司；

高速万能粉碎机：FW-100型，北京科伟永兴仪器有限公司；

数控超声波清洗器：KQ-250DB型，昆山市超声仪器有限公司；

低速离心机：TD-4Z型，四川蜀科仪器有限公司；

高效液相色谱仪：1260型，美国Agilent公司；

优普系列超纯水机：UPC-1-10T型，成都超纯科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 样品前期处理 青梅样品经分拣、清洗，60 ℃烘干打粉，过60目筛，-18 ℃贮藏备用。

1.2.2 样品的制备

(1) 草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、L-乳酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸分析样品：称取青梅粉末0.5 g，加25 mL超纯水溶解，于40 ℃超声提取40 min，4 000 r/min离心5 min，收集上清液，用水定容至25 mL，以备用[11]。

(2) 齐墩果酸、熊果酸分析样品：称取青梅粉末1 g，加25 mL甲醇溶解，于40 ℃超声提取40 min，4 000 r/min离心5 min，收集上清液，用水定容至25 mL，以备用[11]。

1.2.3 标准品溶液的制备

(1) 草酸等8种有机酸标准品：称取一定量的草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、L-乳酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸，分别用超纯水定容至10 mL使标准品母液的质量浓度为2.04，3.62，3.51，3.30，1.75，2.00，3.07，3.58 mg/mL，冷藏备用[12]。

(2) 齐墩果酸、熊果酸标准品：称取一定量的齐墩果酸、熊果酸，分别用甲醇溶解并定容至10 mL，标准品母液质量浓度为0.98 mg/mL，用0.22 μm微孔滤膜过滤，备用[12]。

1.2.4 色谱条件

(1) 分析草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、L-乳酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸的色谱条件：色谱柱为Eclipse XDB-C18(3.0 mm×250 mm，5 μm)；检测波长214 nm；柱温30 ℃；进样量5 μL；流速0.5 mL/min；流动相：0.5%磷酸二氢铵—水溶液(A)，0.1%磷酸(B)；等度洗脱：0～12.9 min，10% B[13]。

(2) 分析齐墩果酸、熊果酸的色谱条件：色谱柱为Eclipse SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；检测波长210 nm；柱温30 ℃；进样量20 μL；流速1 mL/min；流动相：16 mmol/L磷酸盐溶液(A)，70%乙腈(B)，等度洗脱：0～15 min，70% B[13]。

1.3 数据处理

所得数据均为3次重复试验的平均值，使用Microsoft Excel 2016进行数据整理，并通过SPSS 20.0采用Turkey方法对数据进行分析。

2 结果与分析

2.1 有机酸标准品及青梅样品的HPLC图谱

从图1可以看出，有机酸的出峰时间均在12 min之内，而且各类物质得到了较好的分离。该方法分离效果较好，适合有机酸含量的测定。

2.2 标准曲线

以各有机酸的响应值为纵坐标(Y)，对应的质量浓度为横坐标(X)绘制标准曲线。如表2所示，10种有机酸的峰面积和质量浓度之间呈较好的线性关系，相关系数为0.999 0～0.999 9。

2.3 有机酸含量

如表3所示，不同地区不同成熟度青梅中，有机酸含量最高的是景市镇全熟黄果中的柠檬酸，为19.546%；其次是百节赵家全熟黄果中的苹果酸，为4.013%；草酸、L-乳酸、乙酸、酒石酸、丁二酸、齐墩果酸含量相对较少，抗坏血酸、熊果酸含量极少。翟焕趁等[9]用高效液相色谱法对福建青梅中有机酸含量进行了测定，发现青梅中有机酸含量最高的是柠檬酸，为4.83%，其次是苹果酸，为0.67%。达州青梅和福建青梅相比，达州青梅中柠檬酸、苹果酸的含量较高，可能是由产地和(或)成熟度不同导致。

图1 有机酸标准品和青梅样品HPLC图谱Figure 1 HPLC spectra of organic acid standards and Prunus mume samples

2.4 相关性

如表4所示，齐墩果酸与熊果酸呈极显著正相关；L-乳酸与乙酸、柠檬酸呈显著正相关，与丁二酸呈极显著正相关；乙酸与柠檬酸呈显著正相关；柠檬酸与齐墩果酸、熊果酸呈显著正相关。有研究发现，有机酸会随着熟度的不同呈上升下降趋势[14-15]，其代谢也与多种酶有关[16]。

3 结论

对四川达州不同地区不同成熟度的青梅中10种有机酸含量进行了测定，结果发现，10种有机酸中含量最高的是柠檬酸，为19.546%，其次是苹果酸，为4.013%，比其他产区青梅[9]的分析结果高。四川达州有“中国的乌梅之乡”之美称，但因为达州对鲜果转化成品条件不足，对青梅中有机酸等功效成分的研究比较缺乏，因此有必要对达州青梅的功效成分等进行深入研究，为产品深加工提供依据。

表2 10种有机酸的出峰时间、回归方程、线性范围

表3 青梅中10种有机酸的质量分数†

续表3

表4 相关性分析†