MiR-155调控Wnt/β-catenin信号通路影响非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡和DDP耐药性的研究

龚春梅 徐敬根 彭玲 邓春燕

成都市双流区第一人民医院，四川 成都 610200

非小细胞肺癌(NSCLC)是由上皮引起的恶性肿瘤，最常见于肺实质，并可侵袭转移周围邻近组织，在实体瘤恶性肿瘤发病率中居于首位[1]。DDP是治疗非小细胞肺癌的重要化疗药物，被用于非小细胞肺癌的辅助治疗，可促进肿瘤细胞死亡[2]。然而，在非小细胞肺癌治疗中存在 DDP耐药的发生，导致治疗效果差。

在肿瘤调节过程中，microRNAs(miRNAs)作为癌基因或肿瘤抑制因子发挥作用，microRNAs有助于探索非小细胞肺癌进展的发病机制[3]。既往研究显示，miR-155在多种肿瘤中均发挥重要功能，可以被作为肿瘤预后相关的标记物[4]。我们的研究探讨miR-155在非小细胞肺癌发生、发展以及DDP耐药性机制。

1 材料与方法

1.1Real-time PCR检测各组A549细胞和A549/DDP细胞中miR-155和Bax和Bcl-2的表达

采用Trizol试剂提取各组A549细胞和A549/DDP细胞，进行DNA反转录合成。引物依据各基因序列(见表1)。对目的基因进行Real-time PCR检测。根据2-△Ct法进行半定量分析。

表1 引物序列

1.2Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达变化 BCA法蛋白定量后于-20℃保存。分离蛋白利用10%SDS-PAGE电泳，并将胶用半干转膜法转移至PVDF膜，100mA,1.5h去除非特异性背景利用室温，5%脱脂奶粉作用，2 h。分别加入一抗1:1000，1:1500稀释的Wnt1，β-catenin单抗，摇床，4℃，过夜，避光条件下加入1:2000羊抗兔二抗，孵育30 min，PBST洗涤，化学发光剂显色1 min，X片曝光成像，观察结果。

2 结 果

2.1调控MiR-155对非小细胞肺癌细胞A549和耐药细胞株A549/DDP中MiR-155表达影响 转染miR-155 mimics于非小细胞肺癌细胞A549中，可促进MiR-155表达增加；而转染miR-155 inhibitor于耐药细胞株A549/DDP，可显著下调MiR-155表达。

2.2调控MiR-155对非小细胞肺癌细胞A549和耐药细胞株A549/DDP中Bax和Bcl-2表达影响 上调非小细胞肺癌细胞A549中MiR-155表达后，可减少Bax表达，增加Bcl-2表达；而转染miR-155 inhibitor于耐药细胞株A549/DDP下调其在耐药细胞中的表达，增加Bax表达，减少Bcl-2表达。

2.3调控MiR-155对非小细胞肺癌细胞A549和耐药细胞株A549/DDP中Wnt1/β-catenin信号通路的影响 上调非小细胞肺癌细胞A549中MiR-155表达后，可导致Wnt1、β-catenin表达增加；而转染miR-155 inhibitor于耐药细胞株A549/DDP下调其在耐药细胞中的表达，可导致Wnt1、β-catenin表达减少。

3 讨 论

目前对非小细胞肺癌采用放疗和化疗结合的多模式治疗成为控制其局部发展的重要方式，取得了重大进展，但非小细胞肺癌的化疗耐药问题导致治疗容易失败。MiRNA具有广泛的调控功能，在生理病理环境中都有重要的作用，可参与细胞增殖、分化和凋亡等生物学过程。

Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤增殖、EMT以及侵袭过程发挥重要作用[5-6]。本研究证实上调MiR-155可通过激活Wnt/β-catenin通路，减少Bax表达，增加Bcl-2表达，进而导致凋亡受到抑制，肿瘤细胞进一步增殖。结论：MiR-155可调控Wnt/β-catenin信号通路，促进非小细胞肺癌细胞的增殖，抑制其凋亡。MiR-155在非小细胞肺癌耐药细胞中表达显著增高，抑制MiR-155表达可抑制Wnt/β-catenin通路，促进耐药细胞凋亡，抑制耐药细胞增殖。