助阳补肺除痹颗粒治疗间质性肺疾病机理研究

2021-12-02袁成波

吉林中医药 2021年11期

袁成波，王檀

（长春中医药大学附属医院肺病科，长春 130021）

间质性肺疾病是呼吸系统中难治疾病，其发病率有逐年增高的趋势，目前西医治疗药物局限[1]。“助阳补肺除痹颗粒”是在长春中医药大学附属医院呼吸内科多年治疗间质性肺炎、肺纤维化、“肺痹”的临床实践中，对“阳和汤”加减应用，并在此基础上总结而成的经验方剂，主要用于肺痹急性发作。MUC5B启动因子基因的多态性与间质性肺疾病的发生发展相关，特别是特发性肺间质纤维化的易感因素[2]。本实验通过动物造模后予助阳补肺除痹颗粒给药，并将醋酸泼尼松作为阳性对照药组，观察对MUC5B 启动因子的影响，探讨助阳补肺除痹颗粒抗肺纤维化的作用机理，验证助阳补肺除痹颗粒治疗肺纤维化安全性、有效性[3]。报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF 级Wistar 大鼠60 只，体质量200～220 g，雌雄各半。

1.2 药品与试剂助阳补肺除痹颗粒：规格：每袋10 g，人用量：每次10 g，每日3 次，生产批号：20130301、20170201，由长春中医药大学附属医院制剂中心提供；醋酸泼尼松片：规格：每片5 mg，每瓶100 片，国药准字H12020689，产品批号：1312041，天津天药药业股份有限公司产品；注射用盐酸博来霉素，规格：1.5 万USP/支，批准文号：国药准字H20055883，批号：海正辉瑞制药有限公司产品。中性缓冲福尔马林组织固定液，规格：10%，每桶 5 L，批号：20170205，备案号：吉长械备20150129，长春赛默瑞特科技有限公司产品。基质金属蛋白酶9（MMP-9）ELISA 检测试剂盒，批号：20170901A，美国R &D 公司产品。

1.3 仪器电子天平，可调高速匀浆器，台式离心机，酶标仪。

1.4 方法 SPF 级Wistar 大鼠60 只，按体质量将大鼠随机分为6组，每组10 只。分别为假手术组，模型组，阳性对照药醋酸泼尼松（5 mg·kg-1·d-1）组，助阳补肺除痹颗粒设高剂量（9.28 g·kg-1·d-1）、中剂量（4.64 g·kg-1·d-1）和低剂量（2.32 g·kg-1·d-1）3 个给药剂量组。给药体积为15 mL·kg-1体质量，假手术组及模型组给予同体积蒸馏水。

1.5 肺纤维化模型复制方法将各组大鼠分别自气管内注入盐酸博来霉素，肺纤维化造模，建模后第2 天起每天灌胃给药助阳补肺颗粒1 次。假手术组和肺纤维化模型组动物灌胃给予等体积蒸馏水。分别于造模后第7 天、第14 天和第28 天，每组随机选取10 只动物做相关指标检测。

1.6 检测指标助阳补肺除痹颗粒对肺纤维化模型大鼠肺组织MUC5B 水平的影响，以及肺泡炎期、肺纤维化期病理变化的影响。大鼠分别于造模后第7 天、第14 天和第28 天给药助阳补肺除痹颗粒后1 h，每组随机选取10 只动物，处死后剖取右侧肺组织，按每克肺组织加9 mL 生理盐水，制成10%组织匀浆，3 000 rpm 离心10 min，取上清。采用酶联免疫法（Elisa）检测肺组织MUC5B 水平以及肺泡炎期、肺纤维化期病理变化的影响。结果以均数加减标准差（）表示，统计学处理方法采用组间t检验。

2 结果

2.1 助阳补肺除痹颗粒对肺纤维化模型大鼠肺组织MUC5B 水平的影响模型组中，3 批动物肺组织中MUC5B启动因子水平，明显高于假手术组（P＜0.01），醋酸泼尼松组动物及助阳补肺除痹颗粒高剂量组，3 批动物肺组织中MUC5B 启动因子水平明显低于同期模型组（P＜0.05，P＜0.01），助阳补肺除痹颗粒中剂量组肺组织中MUC5B 启动因子水平，明显低于同期模型组（P＜0.05，P＜0.01），低剂量组动物肺组织中MUC5B 启动因子水平，第28 天时明显低于同期模型组（P＜0.05）。见表1。

表1 助阳补肺除痹颗粒对肺纤维化模型大鼠肺组织MUC5B 水平的影响（，n =10）（pg·mL-1）

注：与模型组比较，# P ＜0.05，## P ＜0.01

2.2 助阳补肺除痹颗粒对肺纤维化模型大鼠肺泡炎病理学积分的影响模型组中，3 批动物肺组织中肺泡炎的病理积分则明显高于假手术组（P＜0.01），醋酸泼尼松组动物及助阳补肺除痹颗粒高剂量组3 批动物肺组织中肺泡炎的病理积分明显低于同期模型组（P＜0.05，P＜0.01），助阳补肺除痹颗粒中剂量组肺组织中肺泡炎的病理积分明显低于同期模型组（P＜0.05，P＜0.01），低剂量组动物肺组织中肺泡炎的病理积分第28 天时明显低于同期模型组（P＜0.05）。见表2。

表2 助阳补肺除痹颗粒对肺纤维化模型大鼠肺泡炎病理学积分的影响（，n =10）分

注：与模型组比较，# P ＜0.05，## P ＜0.01，### P ＜0.001

2.3 助阳补肺除痹颗粒对肺纤维化模型大鼠肺纤维化病理学积分的影响模型组中，3 批动物肺组织中肺纤维化的病理积分则明显高于假手术组（P＜0.01），醋酸泼尼松组动物及助阳补肺除痹颗粒高剂量组3 批动物肺组织中肺纤维化的病理积分明显低于同期模型组（P＜0.05，P＜0.01），助阳补肺除痹颗粒中剂量组肺组织中肺纤维化的病理积分明显低于同期模型组（P＜0.05，P＜0.01），低剂量组动物肺组织中肺纤维化的病理积分第28 天时明显低于同期模型组（P＜0.05）。见表3。

表3 助阳补肺除痹颗粒对肺纤维化模型大鼠肺纤维化病理学积分的影响（，n =10）分

注：与模型组比较，# P ＜0.05，### P ＜0.001

实验结果表明，观察助阳补肺除痹颗粒对肺纤维化模型大鼠肺组织MUC5B 水平的影响，以及肺泡炎期、肺纤维化期病理变化的影响，模型组动物肺组织中MUC5B 启动因子水平，在造模后不同时期均明显高于假手术组（P＜0.05，P＜0.01），说明模型动物肺纤维化时MUC5B 启动因子水平增高。阳性对照组及助阳补肺除痹颗粒高剂量组动物肺组织中MUC5B启动因子水平在不同时期与同期模型组比较均明显下降（P＜0.05，P＜0.01），助阳补肺除痹颗粒中剂量组动物肺组织中MUC5B 水平于第28 天时与同期模型组比较显著性下降（P＜0.05），低剂量组动物肺组织中MUC5B 水平于第14 天、第28 天时与同期模型组比较显著性下降（P＜0.05）。最终说明助阳补肺除痹颗粒可通过降低肺组织中MUC5B 水平阻止肺纤维化的发展。

造模第7 天：阳性对照组，肺间隔增厚，毛细血管扩张、充血，大量炎症细胞浸润；助阳补肺除痹颗粒高剂量组，局部肺泡壁增厚，可见炎症细胞浸润；助阳补肺除痹颗粒中剂量组，肺泡壁明显增厚，以巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞为主的炎症细胞浸润；助阳补肺除痹颗粒低剂量组，肺泡间隔明显增厚，局部充血、水肿，可见炎症细胞肺浸润。肺泡腔内可见出血；助阳补肺除痹颗粒高剂量组，助阳补肺除痹颗粒低剂量组，肺泡炎症减轻。助阳补肺除痹颗粒对于炎症疗效甚微。说明助阳补肺除痹颗粒对于炎症有不显著疗效。

造模第14 天：阳性对照组，肺间隔增厚，有纤维化；助阳补肺除痹颗粒高剂量组，局部肺泡壁增厚，可见炎症细胞浸润，有纤维化；助阳补肺除痹颗粒中剂量组，有炎症变化，轻度纤维化；助阳补肺除痹颗粒低剂量组，可见炎症变化，轻度纤维化；助阳补肺除痹颗粒高剂量组、低剂量组，无差异，肺泡炎症减轻为，个别纤维化。表面看助阳补肺除痹颗粒对于炎症有不显著疗效，纤维化无疗效。说明助阳补肺除痹颗粒对于炎症有不显著疗效，纤维化无疗效。

造模第28 天：阳性对照组，肺间隔增厚；助阳补肺除痹颗粒高剂量组，局部肺泡壁增厚，有轻度纤维化；助阳补肺除痹颗粒中剂量组、低剂量组无差别，有轻中度纤维化；助阳补肺除痹颗粒高剂量组，低剂量组，无差异，肺组织个别纤维化。说明助阳补肺除痹颗粒对于肺组织纤维化有不显著疗效。

MUC5B参与ILD早期炎症反应及最终肺纤维化，研究[4-6]表明MUC5B 导致肺纤维化的标志。本研究发现助阳补肺除痹颗粒与泼尼松片对间质性肺疾病患者MUC5B 有影响，即2组均对肺泡炎症和肺纤维化有影响[7]，但其影响2组之间无明显差异。

3 讨论

本研究在助阳补肺除痹颗粒药学、药效学前期研究已完成的情况下从ILD 发病机理研究方面入手[8]，通过实验研究，验证助阳补肺除痹颗粒治疗间质性肺疾病的有效性[9]，探讨其作用及疗效的机理研究的同时，使中医药在治疗间质性肺疾病提供现实的依据。为今后对助阳补肺除痹颗粒治疗ILD 进行器官、细胞、分子、基因等多层次多靶点的研究，提供了有效的帮助[10]。

本研究经文献查询及调研，对肺间质纤维化的中医辨证、病因病机，治则治法进行了系统论述。临床观察表明，助阳补肺除痹颗粒治疗间质性肺疾病疗效确切，为间质性肺疾病的发展提供了方便[11]，能有效改善其临床症状，且临床无副作用，为以后间质性肺疾病在临床的发展提供了可靠的依据[12]，中医药的优势在治疗间质性肺疾病方面尤为突出[13]。

本研究选用临床疗效颇佳的助阳补肺除痹颗粒治疗间质性肺疾病[14]，结果显示，助阳补肺除痹颗粒可以有效改善间质性肺疾病患者血清MUC5B 启动因子水平[15]。MUC5B 启动因子在间质性肺疾病的发生发展过程中起着重要的作用[16]。目前临床研究表明：应用助阳补肺除痹颗粒治疗间质性肺疾病治疗组血清MUC5B 启动因子浓度值均对照组显著下降[17]，提示助阳补肺除痹颗粒可以通过间质性肺疾病患者黏液蛋白分泌发挥医治炎症的作用[18]。

综上所述，助阳补肺除痹颗粒可通过降低肺组织中MUC5B 水平阻止肺纤维化的发展，可增强机体的免疫力，抑制肺纤维化，起到治疗间质性肺疾病的作用。