丙型肝炎临床检验技术现状及研究进展

吴新花

（广西南宁上林县妇幼保健院，广西 南宁，530500）

丙型肝炎是由于感染丙型肝炎病毒（HCV）导致的典型全球性传染性疾病，HCV的传播途径比较多，主要有血液传播、母婴传播、性接触传播、家庭内传播等，但是至今对于准确的传播途径仍然未能十分明确，表明HCV的传播还有很多隐性或者综合的途径[1]。当前临床还未研制出有效的丙型肝炎疫苗。因此需要探寻灵敏、准确的HCV检验技术，早期发现HCV感染者，避免造成广泛传播[2-3]。基于此，本文对丙型肝炎临床检验技术现状及研究进展展开综述，内容如下。

1 抗-HCV检验技术

抗-HCV检验技术是出现最早，研究和应用时间最久的HCV检测技术。HCV感染者的外周血中HCV的含量和病毒抗原含量均比较低，用一般的检测方式很难检出，该种检测方式是临床经过十几年的改进最终得到的有效检验方式，并经过临床不断演变得出双抗原加薪、蛋白芯片检测法、酶联免疫吸附试验、充足免疫印迹法、免疫层析法、蛋白芯片检测法、间接酶联免疫吸附试验等多种可靠实用的方法，其中酶联免疫吸附试验因其具有成本低、操作简单、检测结果满意等优点被认为是当前临床最实用和应用最广的抗-HCV检验技术[4-5]。抗-HCV检验技术能够依照其所用的抗原时间和类型先后分成三代，第一代应用病毒基因组非结构区获取IgG试剂盒所需的抗原，能够很大程度降低HCV的输血感染率，但是使用后存在假阳性率高、抗体检出时间长、灵敏度比较低等不足；第二代试剂包含C100抗原、HCV核心区多肽5C22-3、非结构区抗原C33C、抗-C33C、抗-C22-3感染之后检验得出敏感性和特异性均比较好，通常在HCV感染之后的8-12周能够检测发现；第三代HCV抗体酶联免疫吸附试验试剂中有重组NSS多肽成分存在，能够在一定程度上降低核心区抗原的比例，同时也能够提升非结构区NSS区C33C抗原占比数据，添加NSS区抗原、敏感性和特异性均更优[6-7]。

2 HCV抗原检测技术

目前HCV抗原检验技术的不断更新和应用，有研究认为单克隆抗体、抗原抗体复合物解离剂是改良HCV抗原检验技术的关键。近年来，国外有一些研究尝试推出定性、定量法相关的双抗体夹心法对血清标本中总HCV或游离HCV核心抗原酶联免疫吸附试验试剂盒[8]。以上新型的检验技术与RT-PCR技术相比，进一步对操作进行简化、缩短检验用时、增腔环境适应性，同时也能够进一步控制假阳性率，特别适用于急性HCV的诊断、HCV血清学转换前期的抗-HCV阳性感染病毒血症分析、HCV感染者在就医过程中的病毒血症的跟踪观察等，HCV核心抗原存在的时间仅仅只有27-70天，因此延长的难度比较大，同时HCV核心抗原的检测仍然不能够脱离抗-HCV检验而单独进行[9-10]。HCV核心抗原检测的结果受到HCV核心区基因变异的影响，因此HCV抗原检测的敏感度也是动态变化的[11]。基于此，想要改良当前推广的试剂盒，便要着重提升单克隆抗体的天然抗原构象表位亲和力。

3 HCV-RNA核酸扩增检测技术

HCV-RNA核酸扩增检测技术当前在临床主要用于HCV感染途径确定之后使用，在外周血中即可检出HCV RNA，在HCV感染发生的14天内便能够检测到HCV RNA，同时在感染恢复之前血清各物质水平又会再次达到新的高峰[12]。体内HCV RNA的水平会随着饮食的变化而发生变化，当摄入的食物中脂肪、蛋白含量比较高时，HCV RNA会因与脂质、脂蛋白相结合而使得检出的水平远远比日常水平更低，这是引起检验结果不准确的主要原因之一[13]。另外HCV-RNA核酸扩增检测技术还需要应用高标准的设备进行支持和经验丰富的操作人员操作，并且这种检验技术的操作比较繁琐、检验用时长，因此在临床的可行性不太高，很难大范围的使用[14-15]。HCV-RNA核酸扩增检测技术会因不同厂商的研发，设备和方法也都各不相同，PCR的临床应用更广，检验效果也得到认可，尤其是以套式PCR技术最佳，当前临床应用最多，检验效果最好的是荧光定量PCR技术，该种检验技术的灵敏度比较高，并且检测是自动定量，因此使用比较方便[16]。

4 同时检测HCV核心抗原和抗-HCV技术

抗原抗体联合检验技术是目前临床专家经过大量实践分析出的HCV筛查试剂盒和血清学联合检验的新技术，当前比较成熟的是外周蛋白抗体以及部分核心抗体和HCV核心抗原相结合的检测试剂盒[17]。HCV核心抗原是HCV感染者体内出现的早期感染指标，差不多与HCV RNA同时出现，表明核心抗原和HCV RNA的动力学变化紧密相关[18]。HCV核心抗原检测主要是依据双抗体夹心法定性检测或血清样品HCV核心抗原水平定量检测，这种检验技术大多数情况下不会因样品内含有抗-HCV而出现检验准确度不高的情况，检验结果比较灵敏和准确，该种检验技术也能够用于HCV的早期急性HCv的临床诊断中[19]。相信在不久的将来，市场上会不断出现各种联合检验技术，通过两步检验轻松实现早期筛查、诊断和辅助治疗的目的，但是如何进一步缩短检验用时还是日后研究的方向。

5 结语

综上所述，HCV检验技术目前主要包括抗-HCV检验技术、HCV抗原检测技术、HCV-RNA核酸扩增检测技术、HCV核心抗原和抗-HCV联合检验技术四种，各有其优缺点，并且每种检验技术都在不断的改良中。对于HCV检验来说，需要在检验过程中具体依照患者身体出现的各种病变指标，将实际情况作为基础来展开相关检验工作，能够更符合临床实际需求，也能达到检验所需的目的。日后临床对于HCV的检验不仅要研究出更多更新的检验技术，还要注意解决检验灵敏度低、检验用时长、检验结果易受影响等问题，使得更好的完成检验目的，促进患者早期康复。