鸭圆环病毒病研究进展

蒋山翊， 张天天， 田 琴， 张明华， 周碧君，2，3， 程振涛，2，3， 王开功，2，3*， 文 明，2，3*

(1. 贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025； 2. 贵州省动物疫病研究室，贵州 贵阳 550025； 3. 贵州省动物生物制品工程技术研究中心，贵州 贵阳 550025)

鸭圆环病毒病(Duck circovirus disease，DuCVD)是由鸭圆环病毒(Duck circovirus， DuCV)引起鸭的1种传染性疾病[1]。各日龄和品种的鸭均可感染，病鸭表现羽毛发育不良、生长迟缓、呼吸困难、体重减轻和贫血等症状[2]。DuCV通过侵害免疫系统而引起免疫抑制，降低机体的免疫功能，使被感染的鸭更容易受到其他病原微生物的侵害，导致鸭群的死亡率增加[3]。DuCV于2003年首次在德国发现，之后在匈牙利、美国、中国、韩国和波兰等国家陆续报道有感染病例，提示其流行范围在不断扩大[4～6]。傅光华等[7]于2008年首次在我国大陆地区番鸭中检测到DuCV感染。随后在福建、浙江、江西、广东、山东等省陆续发现有DuCV感染病例[8]。近年来，DuCV在我国鸭群中的感染及与其他病原混合感染情况呈明显上升趋势，严重威胁我国养鸭业的发展。现将DuCV的相关研究情况概述如下，为科学防控和进一步深入研究提供参考。

1 病原学特征

DuCV是圆环病毒科，圆环病毒属的成员，无囊膜，单链环状DNA结构，衣壳呈二十面体对称，直径为15～16 nm，是目前已知最小的鸭病毒。目前还不能对DuCV进行分离培养，所以对其病原学特征的研究十分有限。

2 病毒基因组结构

DuCV是1种单链环状DNA病毒，基因组大小约1.99 kb，主要包含3个主要的开放阅读框ORF1、ORF2、ORF3。ORF1和ORF2分别编码与病毒复制有关的Rep蛋白和核衣壳Cap蛋白。ORF3位于ORF1的互补链，并编码ORF3蛋白。ORF3蛋白是1种新发现的具有凋亡活性的病毒蛋白，其生物学功能尚不清楚[9，10]。通过使用dottup程序进行基因组序列分析，发现在DuCV基因组的Rep和Cap基因之间有1个4重串联重复序列(QTR)，此特征不存在于其他圆环病毒基因组[11]。目前DuCV有 2种基因型：DuCV-1和DuCV-2。DuCV-1又分为4个子类型DuCV-1a、DuCV-1b、DuCV-1c和新定义的子类型DuCV-1d；DuCV-2分为3种亚型，包括DuCV-2a、DuCV-2b、DuCV-2c[12]。Hong Y-T等[13]在北京鸭中建立实验性DuCV基因型1(DuCV-1)感染，发现DuCV-1对免疫器官造成了广泛损害，可导致免疫抑制。

3 流行病学

据报道，中国鸭群中无症状DuCV感染率很高，且长期养殖的种鸭血清DuCV阳性率显著高于短期养殖的肉鸭群，表明DuCV可通过水平传播[14]。刘少宁[15]在2006—2007年从我国养鸭业比较集中的山东、江苏、四川、福建、广东5个省份的36个鸭群中采集临床发病的343只病(死)鸭病料进行检测，死鸭中DuCV阳性率为81.63%(280/343)，各省群体阳性率为94.44%(34/36)，表明我国鸭群中DuCV的感染较为普遍。Liu Hao等[9]在2018—2019年用PCR方法对广东、广西、云南的4种鸭进行DuCV流行病学调查，结果鸭群DuCV的总感染率约为36.91%，其中大于4周龄的鸭比小于4周龄的鸭更容易受到感染。Niu Xinxin等[16]发现DuCV-1和DuCV-2主要集中在东部沿海城市和迁徙中的中国野鸭；通过PCR检测2013—2016年11种野鸭的189个样品，阳性率为2.12%，表明携带DuCV的野鸭可能是鸭圆环病毒病流行和传播的重要因素。

4 致病性

DuCV主要引起宿主的免疫抑制，从而导致继发感染或多重感染。该病毒可在胸腺、肝脏、脾脏、肾脏和法氏囊中持续存在，其中法氏囊是DuCV复制的最主要器官。DuCV感染造成淋巴组织损伤，进而引起体液免疫和细胞免疫功能下降，这种免疫抑制加大了其他病原感染的概率。根据Li P等[17]的研究，新型小鹅瘟病毒和DuCV混合感染在华东地区较普遍。田琴等[18]研究显示，在贵州省某养殖场的花边鸭DuCV和小鹅瘟病毒混合感染率显著高于单独DuCV感染率。

5 临床症状

感染DuCV的病鸭常表现生长迟缓、羽毛凌乱、呼吸困难、食欲不振、生长发育不良等症状。DuCV经呼吸道侵入气管后，造成呼吸系统组织逐渐肿大，最后气管阻塞导致呼吸困难。

6 病理变化

陆晓[2]等对感染DuCV的死鸭进行解剖，发现肝脏出现土黄色的斑块，胆汁稀薄且明显减少；部分死鸭的淋巴组织严重受损，法氏囊中的淋巴细胞出现大范围损伤、坏死，组织细胞常伴有不良增生现象。最近的1项研究表明，DuCV在自然和生殖情况下还可诱发原发性硬化性胆管炎[19]。

7 诊断

目前对于DuCV的诊断主要通过实验室方法，常用方法包括荧光定量PCR、多重PCR、间接ELISA(酶联免疫吸附试验)及LAMP(环介导等温扩增法)。

7.1 荧光定量PCR荧光定量PCR是在PCR技术基础上发展的1种高度灵敏的核酸定量检测技术，其特点是灵敏度高、特异性强、重复性好、定量准确、速度快。Wang Yong等[20]成功开发了1种基于SYBR Green I的双链实时荧光定量PCR技术，用于检测DuCV的Rep基因和新型小鹅瘟病毒的VP1基因。该法可根据2种病毒的不同Tm值区分这 2种病毒，比常规PCR技术更加灵敏。

7.2 多重PCR多重PCR是在同一PCR反应体系中加入多对不同基因特异性引物，同时扩增出多个目的基因片段的PCR技术。许宗丽等[21]根据鸭源新城疫病毒、鸭瘟病毒和DuCV基因的保守序列设计了3对特异性引物，预扩增片段分别为823、576、338 bp，经过反应条件优化，建立了鸭源新城疫病毒、鸭瘟病毒和DuCV的三重PCR检测方法，特异性好、敏感性高。

7.3 间接ELISA间接ELISA是利用抗原抗体之间特异性结合的特性，对抗原或抗体进行定量或定性检测的方法，适合大批量样品同时检测。Cap作为DuCV的主要结构蛋白，具有良好的免疫原性，是血清学诊断试剂盒开发的主要候选靶标。Yang Cui等[22]通过重组Cap蛋白建立了间接ELISA方法(Cap-ELISA)。Cap-ELISA的优化结果表明，包被抗原的最佳浓度和血清稀释率分别为每孔19.5 ng和 1∶1 280；用于阳性样品检测的Cap-ELISA临界值为0.145，灵敏度临界值为1∶25 600，对DuCV抗血清的检测具有特异性。与其他用于检测DuCV的技术相比，使用重组蛋白作为包被抗原建立间接ELISA更为实用、经济且可用于大规模临床检测。

7.4 环介导等温扩增该方法是1项核酸恒温扩增技术，具有高度的特异性和敏感性，而且可在等温条件下于30～60 min内完成，可用于检测临床样品的快速直接诊断[23]。赵光远等[24]根据GenBank中DuCV基因序列，在保守区设计了6对特异性引物，并对反应条件进行优化，建立了1种适用于DuCV的LAMP技术，表现出较高的灵敏度，DNA最小检出限为10 fg，是常规PCR的1 000倍。

8 综合防控措施

8.1 科学管理加强饲养管理，避免产生各种应激，控制合理的饲养密度及通风换气。遵循预防为主、防重于治、全进全出的防疫及饲养原则。

8.2 严格检疫种鸭的引进必须经过严格检疫，防止从疫区引进种鸭、鸭苗、种蛋，引进的种鸭、鸭苗要隔离观察14 d以上，确认健康之后方可混合入群。其次，因为鸭免疫抑制性疾病目前尚无有效的疫苗和药物进行防治，所以养殖过程中应及时隔离、坚决淘汰发病和带毒鸭，病死鸭要统一无害化处理，力争净化本场的DuCV等病原微生物。定期对鸭舍进行排查，对已经出现病鸭的鸭舍应将病鸭迅速隔离，针对该区域做好消毒清洁工作，在确保完全清洁、通风、消毒之后才能购入新鸭[25]。

8.3 定期消毒消毒是消灭病原的有效措施。DuCV虽然能够与多种病原微生物发生混合感染，造成鸭大范围发育不良，但其抵抗外界物理、化学因素的能力不强，所以加强消毒能够有效杀灭 DuCV。对于畜禽空舍，一般选用高锰酸钾与30%福尔马林混合进行熏蒸消毒处理，每立方米用30%福尔马林14～42 mL、高锰酸钾7～21 g、水7～21 mL，熏蒸7～42 h。2%福尔马林溶液可用于器械消毒，器械置于药液中浸泡1～2 h即可。处理排泄废物可选用浓度10%福尔马林溶液。

8.4 控制饲料喂养优质饲料是增强鸭抵抗疾病能力的基础，首先一定要保证饲料来源于正规渠道，对于腐败、变质的饲料要坚决淘汰；其次饲料成分及投喂时间也要严格控制，科学配制饲料，饲料中添加多种维生素，提高鸭的抗病能力和自身免疫功能。

8.5 疫苗免疫开发高效的疫苗是预防DuCV感染的关键策略。Zhaolong Li等[3，26]用开发的DuCV灭活疫苗在体外PBMC(外周血单核细胞)培养中繁殖，在番鸭体内诱导产生了更高的抗体，表现出很强的保护能力，通过DuCV攻击没有表现典型的羽毛异常和矮化症状，体重的倍数变化也没有明显差异，免疫效果好。Huang Juan等[27]开发了1种带有Cap编码基因的DuCV DNA疫苗，可以诱导细胞免疫反应并产生抗体；通过测量Cap特异性抗体和相关的细胞因子水平，在体内评估这种DNA疫苗的免疫原性，结果表明该疫苗可以诱导显著的特异性免疫反应，以保护鸭免受DuCV攻击。

9 小结与展望

DuCVD是1种免疫抑制性疫病，对鸭等水禽造成严重危害。某些细菌、真菌感染及一些营养性疾病与DuCV感染的临床表现相似，需要进行实验室鉴别诊断。另外，由于DuCV常以隐性感染的方式存在，养殖过程中通常不会对DuCV进行检测，这为DuCV的传播创造了条件。DuCV侵害鸭的免疫系统后常导致鸭群更容易发生其他病原的感染，所以对DuCV进行鉴别诊断的同时，也要考虑其他传染病原感染的可能性。为了更好地防控DuCV感染，应对该病毒的病原学和生物学特性，以及对动物免疫系统的影响进行不断深入研究，探究该病毒具体的分子致病机制，研制出更有效的新型疫苗，以减少其对我国养鸭业的危害。