牛病毒性腹泻病例的血清学诊断

连小丽

（甘肃省定西市安定区畜牧兽医局高峰畜牧兽医站 743000）

牛病毒性腹泻病毒（BVDV）隶属于黄病毒科，是瘟病毒属成员之一，主要引发病毒性腹泻-黏膜病，以致病牛免疫耐受能力降低、屡次出现感染、母牛流产风险明显增高、奶牛产奶量下降，对牛只健康生长造成严重影响。病畜分泌物、排泄物及血液等均可能成为本病的传染源，既往调查发现[1]，牛病毒性腹泻在全国范围中均可发生，有广泛流行性特征，对牛养殖户经济效益形成较明显的影响。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 被检血清

2019 年在内蒙古某奶牛场随机选择300 头牛，采集尾静脉血液，常规离心、分离血清后待检。已知本牛场所有牛既往均没有接种过BVDV 疫苗。

1.1.2 检测试剂

牛病毒性腹泻抗体（BVDV-Ab）、抗原（BVDV-Ag）检测试剂盒。

1.1.3 主要仪器设备

高速台式离心机（5810）、恒温培养箱（INE 500）以及酶标仪（Elx808IU）等。

1.2 检测方法

采用酶联免疫试验（ELISA）方法检测BVDV-Ab、BVDVAg，严格依照试剂盒说明书上指示内容进行操作。

（1）把试样对应的微孔按序编号，各板均要设置阴性、阳性对照孔，空白对照孔，其中空白对照孔不添加试样于酶标试剂，其他各步操作一致。

（2）将50μl 阴性、阳性对照分别添加到阴、阳性对照孔，而后先把样品稀释液40μl 添加到待测样品孔，而后再加入10μl 待测样品。通过加样把试样添加到酶标板孔底，尽量做到不触碰孔壁，轻摇使其混合均匀。

（3）采用封板膜进行封板处理后，将其安放在37℃恒温箱内，连续孵育30min。

（4）小心撕掉封板膜，弃除液体，甩干，各孔加满洗涤液，静置30s 后弃除，以上操作反复进行5 次，拍干。

（5）朝各孔添加50μl 酶标试剂（空白孔除外），孵育及洗涤反复同上。

（6）每孔各添加50μl 显色剂A，随后添加50μl 显色剂B，轻摇混匀，37℃避光条件显色15min。

（7）各孔均添加50μl 终止液，终止反应（此时蓝色立即转变为黄色）。

1.3 指标观察与判断

把空白孔调零，采用450nm 波长依次检测各孔的吸光度（OD 值），检测要在添加终止液15min 之内进行。

试验有效性判断标准为：阳性、阴性对照平均值分别≥1.00、≤0.10[2]。

临界值（CUT OFF)=阴性对照孔均值=0.15，若试样OD值≥临界值（CUT OFF) 则被诊断为BVDV 阳性，否则为BVDV 阴性。

2 结果

2.1 统计牛病毒性腹泻抗体/抗原感染情况

300 份牛血样均顺利完成牛病毒性腹泻抗体与抗原检测，统计发现，BVDV-Ab、BVDV-Ag 阳性率分别是7.00%（21/300）、0.67%（2/300）。表明该牛场中存在牛病毒性腹泻感染情况，和全国既往报道的数据相比较，感染率相对较低。

2.2 阳性牛群内牛病毒性腹泻抗体/抗原的转换值

参照试剂盒说明书，BVDV-Ab 转换值≥0.300 与BVDVAg 转换值＞0.300 时分别被判断为阳性。参照以上情况，进一步分析BVDV-Ab、BVDV-Ag 显阳性的试样发现，BVDV-Ab、BVDV-Ag 转换值的平均值分别为0.900 与3.302，明显高于判定阳性的临界值，表明本牛场确实存在牛病毒性腹泻感染情况。

3 讨论

牛病毒性腹泻是由BVDV 引起的一种牛群接触性传染疾病，其临床症状多样，且时常变化，如体温升高、黏膜发炎、糜烂、坏死、腹泻、流产等。本病在全国各地均有发生，感染对象以黄牛、水牛与牦牛等为主，冬末与春天是本病高发期，新发病牛只呈现出爆发流行，发病后能获得较长期的强免疫，呈现出零星散发[3]。患病牛与带毒牛是本病主要传染源，患病牛只的鼻汁、唾液、粪尿等分泌物与排泄物中均可含有大量BVDV，一般会通过消化道与呼吸道感染传播本病。各年龄段的牛只均可能会感染本病，其中6～18 月龄的牛感染率相对较高，山羊与猪等可能会自然感染，形成抗体，但基本不会出现明显的症状表现，呈现出隐性感染，牛群内存在较高的感染率。

针对畜病的发病原因，可能是牛种引进前没有进行严格的隔离、检疫，以致带进BVDV；病牛自身携带病毒、处理不规范、消毒不彻底，饲养管理欠缺规范性等。针对本病症的兽医诊断要点有：幼龄牛与青年牛染病后体温上升，达到41～42℃，持续高热4～7d，食欲减退或废食，反刍暂停，口周流涎，流眼泪，奶牛泌乳性能下降，口腔黏膜出现不同程度溃烂及消化道出血与溃疡等，特别是食道黏膜腐烂，结合病畜以上症状表现，通常能初步作出诊断。而若要作出最后诊断，需要病原学和血清学检查。其中血清学诊断过程需要提取疑似病例的血液标本，检测时可供选择的方法较多，如ELISA 方法、中和试验等[4]。相关人员要认真观察试验结果，采集病畜相应情况，疾病一经确诊后应立即采取对症治疗方法。在本次检测中，采用ELISA 方法检查300 份牛血样，牛病毒性腹泻抗体与抗原阳性率分别是7.00%、0.67%，表明该牛场中存在牛病毒性腹泻感染情况。计算阳性牛群内牛病毒性腹泻抗体/抗原的转换值，平均值分别是0.900 与3.302，明显高于判定阳性临界值，表明本牛场确实存在牛病毒性腹泻感染情况。

当下，兽医临床上针对牛病毒性腹泻尚没有根治手段与免疫方法，针对患病牛只，只有在加强监测、照护、饲养管理来增强牛只机体抵抗力，结合症状表现采用对症治疗手段。针对病情相对较严重的养牛场，可以应用注射本病弱毒疫苗的方法，该种方法不适用于健康牛与妊娠牛只。通过加强各种规范化的饲养管理措施去增强牛的抵抗能力。养殖户自觉树立定期消毒意识，可以选择过氧乙酸、3.0%火碱、聚维碘等对养殖环境进行消毒处理。有报道指出[5]，猪瘟弱毒疫苗在防治本病黏膜型病畜方面表现出良好的效能，具体在公牛配种前30d，母牛临产前30d 各头均肌肉注射10 头份，而后每间隔10～12 个月注射1 次，小牛犊在1～3 月首免（3 头份），6～8 月后再进行免疫1 次。针对无病症的养殖场，要定期采用血清学监测方法进行净化，针对发病牛群及时进行隔离治疗，最好应用扑杀方法，并且要予以无害化处置。在购置种牛、饲料过程中要加大检查力度，尤其是跨区域、跨省运调牛种，规避养殖区中出血病牛或带有BVDV 的牛。