芦根提取物的质量标准初步研究

陈炎欢，刘贤钊，江志鹏，黄照荣，李美珍

（无限极（中国）有限公司，广东江门 529100）

芦根是禾本科植物芦苇（Phragmites communisTrin.）的新鲜或干燥根茎，性寒味甘，具有清热泻火、生津止呕、除烦、利尿的功效[1-5]。芦根提取物是芦根药材采用适宜的工艺制备而成，目前尚无官方质量标准,本研究对9批次的芦根提取物的感官、鉴别，理化、香豆酸、微生物和重金属指标进行含量测定与分析评价，初步确立了芦根提取物的质量标准，为芦根提取物质量控制提供参考。

1 材料与仪器

1.1 仪器

HP1200 型高效液相色谱仪（包括二极管阵列检测器，美国Agilent公司），KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂

对香豆酸（CAS号501-98-4，中国食品药品检定研究院）；甲醇为色谱纯（德国Merck公司）；其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

1.3 材料

芦根提取物由适量芦根药材加8倍量水煎煮3次，合并滤液，70 ℃减压浓缩，经喷雾干燥而得。9批芦根提取物来源于2个厂家，编号1-9。

2 试验方法

2.1 感官测定

取本品嗅其气味、尝其滋味；另取试样适量置于白色瓷盘中观察其色泽、外观，并检查有无异物。

2.2 药材及样品配制

2.2.1 对照药材溶液配制

取芦根对照药材1.0 g，置于锥形瓶中，加入三氯甲烷10 mL，超声（250 W，40 kHz）处理20 min，过滤，取续滤液，即得。

2.2.2 供试品溶液配制

取本品粉末约8.0 g，置于锥形瓶中，加入三氯甲烷10 mL，超声（250 W，40 kHz）处理20 min，过滤，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶剂并定容至0.5 mL，即得。

2.3 薄层色谱测定

分别吸取芦根对照品药材溶液35 µL，供试品溶液20～25 µL，点于同一硅胶板上，以石油醚（60～90 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（20∶10∶2，体积比）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%磷钼酸乙醇溶液，在110 ℃加热至斑点或条带显色清晰，置可见光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点上。

2.4 理化指标测定

水分按照《食品安全国家标准 食品中水分的测定》（GB 5009.3—2016）规定的第一法进行测定。灰分按照《食品安全国家标准 食品中灰分的测定》（GB 5009.4—2016）规定的方法进行测定。粒度按照《中华人民共和国药典（2020版）》第四部通则粒度和粒度分布测定法第二法（筛分法）进行测定，过100目筛。

2.5 对香豆酸的含量测定

2.5.1 对照品溶液制备

精密称取对香豆酸对照品约1 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得对照品溶液。

2.5.2 供试品溶液制备

精密称取本品约1.0 g于50 mL小烧杯中，加水20 mL，加热使溶解，取出，放至室温，转移至25 mL棕色容量瓶中，加水至刻度，摇匀，用0.45 µm的针式过滤器过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

2.6 色谱条件

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱（150 mm或250 mm×4.6 mm，5 μm）。流动相：以乙腈为流动相A，以0.2%甲酸溶液为流动相B，按18∶82比例（体积比）进行洗脱；波长310 nm；柱温30 ℃；流速1.0 mL/min；进样量10 μL；理论塔板数按对香豆酸计不低于5 000。

2.7 线性关系考察

精密称取对香豆酸对照品1.411 mg置于50 mL容量瓶中，按2.5.1项下制备方法加甲醇溶解制成储备液，再精密吸取该储备液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL分别至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，按2.6项下色谱条件分析，测定峰面积。

3 结果与分析

3.1 感官测定结果

试验观察结果为：9批芦根提取物为黄棕色至棕褐色干燥均匀粉末，色泽均匀，具有芦根特有的气味，无异味，无正常视力可见外来异物。

3.2 芦根提取物薄层色谱测定结果

S为芦根对照药材。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。结果见图1。

图1 芦根提取物薄层色谱图

3.3 理化指标测定

芦根提取物水分、灰分、粒度测定结果，见表1。

表1 芦根提取物水分、灰分、粒度测定结果

3.4 线性关系考察

以对香豆酸对照品的浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，求得回归方程：Y=1.327 9X-0.093 6，R2=0.999 9。结果表明对香豆酸在2.802 3～28.022 5 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

3.5 精密度试验

精密称取2.5.1项下制备的对香豆酸对照品溶液（浓度11.209 0 µg/mL），重复进样6次，分别计算峰面积及保留时间的RSD值，保留时间和峰面积的RSD值分别为0.04%和0.06%。不对称度以对香豆酸计不高于1.2。理论塔板数，以对香豆酸计约12 000。表明仪器精密度良好。

3.6 稳定性试验

精密称取芦根提取物（批号CLUG-A-922656）按2.5.2项下制备的供试品溶液，按2.6项下色谱条件分别于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h测定，记录色谱图，结果供试品中对香豆酸峰面积的RSD为0.43%（n=6），表明本品溶液在24 h内稳定。

3.7 重复性试验

精密称取芦根提取物（批号CLUG-A-922656）同一天内按2.5.2项下制备的6份供试品溶液，按2.6项下色谱条件测定，对香豆酸平均含量为0.018%，RSD为1.88%。分离度大于1.5。表明该方法重复性良好。

3.8 回收率试验

精密称取芦根提取物（批号CLUG-A-922656，对香豆酸含量为0.018%）约0.5 g于9个50 mL小烧杯中。另取对香豆酸对照品（纯度99.3%）1.723 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容（此对照品溶液含对香豆酸17.109 4 µg/mL），分别吸取该对照品溶液 2.5 mL（以对香豆酸计 42.773 5 µg）、5.0 mL（以对香豆酸计85.547 0 µg）、7.5 mL（以对香豆酸计128.320 4 µg），分3组加入含样品的9个50 mL小烧杯中，按2.5.2项下制成供回收率测定用供试品溶液，按2.6项下色谱条件测定，计算对香豆酸的回收率，平均回收率为98.09%（95%～105%），RSD值为0.72%，表明该方法准确度良好。

3.9 样品含量测定

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶各10 µL，注入液相色谱仪，测定。根据所得对照品溶液和供试品溶液色谱图中对香豆酸峰面积计算供试品中待测组分对香豆酸含量。结果见表3，9批芦根提取物中对香豆酸含量按干燥品计算分别不低于0.01%。

表3 芦根提取物对香豆酸含量测定结果

3.10 重金属指标测定

重金属指标按照《食品安全国家标准 食品中多元素的测定》（GB 5009.268—2016）第一法电感耦合等离子质谱法（ICP-MS）规定的方法测定铅、砷、镉、汞含量。结果见表4。

表4 芦根提取物铅、砷、镉、汞测定结果

3.11 微生物检查

菌落总数的测定按《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》（GB 4789.2—2016）规定的方法进行；霉菌和酵母的测定按《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》（GB 4789.15—2016）规定的方法进行；大肠埃希氏菌的测定按《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数》（GB 4789.38—2012）规定的方法进行。沙门氏菌的测定按《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）规定的方法进行。结果见表5。

表5 芦根提取物微生物检查结果

4 结论与讨论

根据对芦根提取物中的鉴别、水分、灰分、粒度、对香豆酸含量、重金属和微生物测定结果，结合食品和药品质量标准的制定原则和相关国家标准以及产品特性、市场要求制定本标准初步制定了芦根提取物质量标准，结果见表6。本研究初步建立的芦根提取物质量标准，提高了其质量评价的客观性与专属性，为进一步规范芦根提取物生产、销售行业提供了科学依据。