没食子多酚反向温敏凝胶的制备及对宫颈炎的作用*

王秋平，宋端慧，藏洁，杨金香，齐云云，韩博

(石河子大学药学院，石河子 832002)

宫颈炎和非特异性宫颈炎的研究属于疾病病因不明的性传播感染医学研究领域[1]。严重的宫颈炎会导致不孕和异位妊娠[2]。研究表明，宫颈炎是病原体侵入损伤部位所致，常见病原体包括沙眼衣原体、淋病奈瑟球菌、葡萄球菌、链球菌以及大肠埃希菌等[3]。临床上的治疗药物主要是抗菌药物。由于抗生素滥用和假阳性诊断可能导致耐药病原体的出现[2]，寻找既有抗菌又有抗炎作用的中药进行替代治疗已成为一种策略。

没食子是壳斗科植物没食子树(QuercusinfectoriaOliv.)幼枝上的干燥虫瘿，由没食子峰科昆虫没食子蜂(Cynipsgallae-tinctoriaeOliv.)幼虫寄生而形成的。没食子可治疗湿性白带过多、子宫出血、泻痢不止等[4]。中药制剂“没食子栓”(没食子是主药)治疗阴道炎和宫颈炎的效果显著。没食子含没食子鞣质50%～70%，其次为没食子酸(2%～4%)及丙酸、树脂等[5]。没食子鞣质可通过调控基因表达、诱导细胞凋亡、血管舒张、调节细胞信号通路等[6-7]发挥抗炎、抗菌、抗氧化等作用[8-11]。但药物溶液如妇炎洁，以阴道给药的方式进入体内后，极易流出，不利于药物的吸收。如何改进传统剂型、开发新制剂，以延长药物在病变部位的作用时间，是实现妇科中药制剂临床合理用药亟待解决的问题。

温敏凝胶是指以溶液状态给药后，利用高分子材料对外界温度的响应发生相转变，由液态转化为非化学交联半固体凝胶的制剂。在临床上，温敏凝胶可用于妇科阴道给药[12]。本研究拟制备反向温敏凝胶，以液态形式存在体外，进入体内后受热贴于阴道内壁，方便给药的同时，可减少药液的流出，延长药物在病变部位的保留时间，提高生物利用度[13]。在此基础上，为了增强凝胶系统的缓释作用，笔者加入了纳米颗粒的制备。研究表明，在阴道给药系统中，纳米颗粒在生物粘附、易于渗透黏膜和控制释放方面具有优势[14]。本研究探讨将没食子多酚纳米颗粒-温敏凝胶复合制剂应用于阴道，以评价治疗宫颈炎的可行性，为宫颈炎的新药开发提供参考，同时扩展没食子的应用范围。

1 材料与方法

1.1仪器与设备 Waters HPLC-MS 纯化制备系统(美国Waters公司，配有HPLC泵、二元梯度模块、样品管理器、紫外-可见检测器、QDa 检测器以及Mass Lynx 数据处理系统)；扫描电子显微镜(SEM，evo18，德国蔡司公司)；超声波细胞破碎仪(JY92-IIN，上海冠森生物科技有限公司)；黏度计(DV-C，美国博勒飞Brookfield公司)；酶标仪(LL007L67xMark，上海艾研生物科技有限公司)。

1.2药品与试剂 普朗尼克F-127(批号：04835564，相对分子质量12 600，美国Sigma公司)；乙腈(批号：01259913，色谱纯，美国Fisher公司)；甲酸(批号：01101164，质谱级，上海麦克林有限公司)；消糜栓(批准文号：国药准字Z20025663，规格：3 g，7粒，通化万通药业股份有限公司)；福林酚试剂(F-C试剂，批号：011003211，规格：500 mL，山东西亚化学工业有限公司)；水合氯醛(批号：04548971，规格：100 g，含量：99%，山东西亚化学工业有限公司)；聚己内酯(PCL，批号：S26795，规格：100 g，上海源叶生物科技有限公司)；海藻酸钠(批号：S11053，规格：100 g，上海源叶生物科技有限公司)；泊洛沙姆407(P407，批号：S30692，规格：500 g，上海源叶生物科技有限公司)；泊洛沙姆188(P188，批号：S25322，规格：100 g，上海源叶生物科技有限公司)；羟丙基甲基纤维素(HPMC，批号：S14175，规格：500 g，上海源叶生物科技有限公司)；磷酸盐缓冲液(PBS，pH值7.4，批号：R20857，规格：500 mL，上海源叶生物科技有限公司)；没食子酸标准溶液(批号：B20851，规格：1 m L，1000 μg·mL-1，上海源叶生物科技有限公司)；碳酸钠(批号：S24152，规格：500 g，含量≥99.8%，上海源叶生物科技有限公司)，苯酚(批号：S30715，规格：500 g，含量≥99.0%，上海源叶生物科技有限公司)；阿拉伯树胶粉(批号：S11034，规格：500 g，上海源叶生物科技有限公司)；大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，批号：201805239)；大鼠表皮生长因子受体(EGFR)酶链免疫吸附测定(ELISA)检测试剂盒(批号：201804234，上海酶联生物科技有限公司)；大鼠表皮生长因子(EGF)ELISA检测试剂盒(批号：2018029322，上海酶联生物科技有限公司)。没食子药材于2016年3月购自广东省广州市，由石河子大学药学院韩博教授鉴定，拉丁名是QuercusinfectoriaOliv.，全药材入药，标本(No.20160305)置通风干燥处，防潮，保存于新疆特色植物药资源重点实验室药剂组。

1.3动物 SD大鼠(洁净级，雌性，未孕)，体质量(180±20) g，购买于新疆实验动物研究中心，生产许可证号：SCXK(新)2011-0004，动物设施使用证号：SCXK(新)2011-0004。所有大鼠均置于可控环境中：温度(22±2) ℃，湿度(50±10)%，光照，12 h光/暗循环。动物实验进行之前，给予标准颗粒适应性饲养大鼠约1周。在实验中尽一切努力减轻动物的痛苦。

1.4从没食子中提取多酚类化合物 精确称取50.0 g干燥的没食子粉末，通过水回流提取3次，每次加入纯化水2 L，提取液分别用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯连续萃取3次，利用旋转蒸发仪将各萃取液分别进行浓缩，将乙酸乙酯部分的浓缩液作为样品，以聚酰胺为吸附剂，用乙醇-水梯度(0%，10%，15%，20%，25%，30%，40%，60%，100%)进行洗脱。所得部分分别浓缩、标记、避光密封保存。

1.5没食子多酚成分的HPLC-MS分析 采用HPLC-MS分析没食子中多酚的成分，HPLC-MS条件为：C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相A为0.2%甲酸溶液，流动相B为色谱乙腈；梯度洗脱程序设置为0～8 min(93% A)，8～35 min(93%→80% A)，35～50 min(80%→70% A)，50～60 min(70%→0% A)；浓度：1 mg·mL-1；流速：1 mL· min-1；进样量：20 μL；光谱条件为220 nm。

ESI-MS 条件：负离子模式；扫描范围：100～1250(m/z)；源温度：150 ℃；干燥气温度：250 ℃；毛细管电压2.64 kV；锥孔电压50 V；碰撞电压45 V；去溶剂气体：N2，800 L·h-1。

1.6没食子纳米颗粒(NPs)的制备 利用纳米沉淀法将没食子多酚制备成聚合物纳米。分别准确称取15 mg海藻酸纳和F-127，各自加入纯化水3 mL使其完全溶解；将没食子多酚112.5 mg加入纯化水3 mL中，充分混合。在磁力搅拌(700 r·min-1)下，将海藻酸纳、F-127、没食子多酚溶液和纯化水7.5 mL混合均匀，利用注射器(5号针头)将溶于二氯甲烷3 mL中的聚己内酯(0.09 g)溶液以1 mL· min-1成滴状地加入上述混合物中。将所得的胶体悬浮液在室温下搅拌(500 r·min-1)蒸发2 h以去除二氯甲烷。将除去二氯甲烷的溶液以超声波细胞破碎仪超声3次(20 kHz)，每次15 min。然后将该纳米颗粒溶液以1 1180×g的速度离心5 min，分离上清液和沉淀；用纯化水洗涤沉淀3次(2795×g，3 min)，以去除未形成纳米颗粒的没食子多酚。将制备的纳米粒利用冷冻干燥机进行分散冻干，并收集用于后续的实验。同时，将分离出的上清液和清洗3次沉淀的上清液收集待用。

1.7负载纳米颗粒的温敏凝胶(NPs-凝胶)的制备 分别准确称取0.4 g HPMC、1.25 g P188和10.5 g P407加入50 mL纯化水中，用磁力搅拌器将混合物轻轻搅拌至完全溶解，然后在4 ℃下储存在冰箱中，直到获得澄清的均匀溶液。在凝胶中加入NPs，混合均匀后存储于4 ℃冰箱中以便用于后续实验。

1.8表征

1.8.1扫描电子显微镜(SEM)的表征和Zeta电位的测定 将制备的NPs以及凝胶依次进行SEM的表征。借用马尔文粒度仪，将NPs-凝胶进行Zeta电位的测量，以分析评价其胶体稳定性。

1.8.2测定NPs-凝胶的胶凝温度、胶凝时间以及黏度值 将NPs-凝胶溶液放置在烧杯中，并将其置于恒温加热磁力搅拌器中，升高温度的速度是每分钟1 ℃，记录磁珠停止转动的时间为胶凝时间，温度记录为凝胶温度。用黏度计测定胶凝温度下NPs-gel的黏度值。

1.8.3纳米颗粒包封率(EE%)的测定 采用福林酚(F-C)法测定并计算纳米颗粒的包封率[15]，具体方法如下。首先用没食子酸标准溶液建立标准曲线。将0，0.05，0.10，0.20，0.30，0.50 mL没食子酸标准溶液(0.05 mg·mL-1)加入6个试管中，依次标号为1—6。每根试管中加入蒸馏水至0.5 mL，然后加入0.5 mL的F-C试剂(1 mol·L-1)。涡旋混合器完全振荡混匀后，将碳酸钠(Na2CO3)4 mL溶液(50 mg·mL-1)溶解于各试管中。2～8 min后，将离心管固定在装有纯化水800 mL的烧杯中，烧杯置于540 W的微波炉中加热6 min。将没有加入没食子酸标准溶液的试管溶液设置为空白，测定每根试管中溶液在765 nm波长处的吸光度值。以标准溶液的吸光度为纵坐标，以相应的没食子酸浓度为横坐标绘制标准曲线。

测定“1.6”项中收集的所有上清液中没食子多酚的含量。将0.005 mL上清液、0.495 mL纯化水和0.5 mL F-C试剂混合在一起，再加入Na2CO3溶液4 mL(50 mg·mL-1)混合均匀。2～8 min后，将离心管固定在装有800 mL纯化水的烧杯中，烧杯置于540 W的微波炉中加热6 min，然后测定释放药物溶液在765 nm处的吸光度值。根据标准曲线和该上清液在765 nm处的吸光度值，按公式(1)计算包封率(EE%)。

EE%=1-C1×V1/m公式(1)

C1为根据标准曲线计算的上清液浓度(mg·mL-1)，V1为上清液体积(mL)，m是制备NPs时加入没食子多酚的总质量(mg)。

R%=(C1×V2)/(m×EE%) 公式(2)

C2为标准曲线计算的释放多酚浓度(mg·mL-1)，V2是释放液的体积(mL)，m是制备NPs-gel时加入没食子多酚的总质量(mg)。

1.9动物实验

1.9.125%苯酚胶浆和消糜栓胶浆的配制 取苯酚6.25 g、阿拉伯树胶粉18.75 g，加纯化水至25.00 mL，配成25%的苯酚胶浆。以体表面积法计算大鼠给药剂量。正常人对于消糜栓的常用剂量是每天3 g(1粒)，用人的常用剂量乘以人与鼠的换算系数0.018(此时大鼠的标准体质量为200 g)，则大鼠的给药剂量为270 mg·kg-1·d-1。具体配制如下：取8.30 g消糜栓加热溶解，加阿拉伯树胶粉45.00 g，加纯化水至25.00 mL，配成0.33 g·mL-1的阳性药。

1.9.2实验大鼠宫颈炎模型的建立与给药 将大鼠随机分为6组，每组6只即对照组、阳性药组、NPs-凝胶组、物理混合物组、空白凝胶组和模型组。采用25%苯酚胶浆诱导大鼠宫颈炎模型。除对照组外，其他大鼠均阴道给药[用1 mL注射器(针头换为灌胃针)插入阴道约2 cm处]，每只给予25%苯酚胶浆0.15 mL，3 d一次，共4次，12 d；对照组大鼠则给予等量0.9%氯化钠溶液替代25%苯酚胶浆。每次给药结束后，将每只大鼠倒吊5 min，防止药液流出。

造模结束后，不同组接受不同的治疗：阳性药组每天给予270 mg ·kg-1的消糜栓胶浆(0.33 g·mL-1，每只0.15 mL)；NPs-凝胶组给予NPs-凝胶(每只0.15 mL，多酚含量约为30 mg)；物理混合组每只给予空白凝胶和游离没食子多酚的物理混合物0.15 mL(多酚含量约为30 mg)；空白凝胶组给予相同体积的空白凝胶；对照组和模型组采用相似的阴道给药途径给予等体积0.9%氯化钠溶液。所有大鼠采取阴道给药的方式连续给药7 d，给药的同时除对照组外其余大鼠继续给予25%苯酚胶浆。最后一次给药后24 h处死动物，收集宫颈组织并计算脏器指数。

1.9.3一般情况观察 从造模当天开始，观察并记录大鼠宫颈口和阴道分泌物，评分标准见表1[16]，查看大鼠是否出现与空白组大鼠不一样的现象，如扎堆、少动、竖毛等。

表1 外阴红肿和阴道分泌物评分标准

外阴红肿和阴道分泌物评分标准具体如下：

根据外阴红肿面积的大小分为：①正常：外阴及阴道口黏膜无充血、红肿(0分)；②轻度红肿：红肿占外阴面积小于1/3(1分)；③中度红肿：红肿占外阴面积的1/3～2/3(2分)；④重度红肿：红肿占外阴面积大于2/3(3分)。

1、完善线路另一侧的断路器，给线路配置一套光纤差动保护。光纤差动保护由于其保护原理与过度电阻无关，且动作速度快，可以有效快速切除高阻接地情况下的故障；

根据阴道分泌物占自制医用棉签面积的大小分为：①正常：无自制医用棉条未见分泌物(0分)；②少：阴道分泌物占自制医用棉条面积小于1/3(1分)；③中：阴道分泌物占自制医用棉条面积的1/3～2/3(2分)；④多：阴道分泌物占自制医用棉条面积大于2/3(3分)。

1.9.4组织病理学检查 从每组随机取出3个宫颈组织样本，置于10%甲醛溶液中进行固定，常规脱水，石蜡包埋，纵向切片，厚5 μm，进行HE染色。在显微镜下进行观察并分析。

1.9.5大鼠宫颈组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)指标检测 分析大鼠血清中的TNF-α、EGF和EGFR的表达情况，根据试剂盒说明书进行操作。

2 结果

2.1LC-MS分析没食子多酚成分的测定结果 通过聚酰胺柱对没食子乙酸乙酯部位化合物的分离，得到了一些特殊的化合物。经LC-MS分析，60%乙醇-水梯度部分主要化合物的信息如图1所示。根据课题组之前的研究，溶液中所含的主要化合物依次是双没食子酸(m/z321)、三-O-没食子酰基葡萄糖(m/z635)和四-O-没食子酰基葡萄糖(m/z787)。在选定的色谱条件下，双没食子酸、三-O-没食子酰基葡萄糖和四-O-没食子酰基葡萄糖的保留时间分别为24.59，27.36，30.21，31.15，32.49，37.45和38.78 min。由于没食子酰基在葡萄糖上的结合位点不同，所以，核质比相同的同一类化合物有多个保留时间，结构上也因为没食子酰基结合位点的不同而有差异。用峰面积归一化法测定的3种化合物的含量分别为23.42%(m/z321)，33.83%(m/z635)，31.71%(m/z787)。

2.2表征

2.2.1SEM的观察和分析 依次将凝胶和NPs进行了扫描电子显微镜的观察。如图2所示，图2b是NPs-gel的围观形貌，NPs-gel具有多空隙网状结构，且空隙之间相互连通，孔径在2～20 μm范围内。图2c是NPs的SEM图，从图中可以看出，制备的纳米颗粒粒径是(53.20±7.60)nm，且粒径大小均一。

2.2.2Zeta电位的分析结果 Zeta电位是指剪切面的电位，是表征胶体分散体系稳定性的重要指标。经马尔文粒度分析仪的测定，如图2d所示，没食子多酚、NPs、空白凝胶、物理混合物和NPs-凝胶的Zeta电位值分别为(-1.66±0.12)，(-15.83±0.21)，(-63.43±6.09)，(-1.04±0.12)和(-94.93±12.17) mV。与NPs-凝胶的Zeta电位值比较，其他各组的数据均差异有统计学意义。NPs-凝胶的Zeta电位绝对值在60 mV以上，表示其有较好的胶体稳定性。换言之，将没食子多酚制成NPs 后，可以提高其胶体稳定性，在凝胶中加入纳米颗粒可以进一步提高整个体系的胶体稳定性，这将为多酚的运输和储存带来了便利。

A.LC-MS分析；B.HPLC分析；峰分布：峰1.间-双没食子酸或对-二没食子酸(m/z 321)；峰2～5. 三-O-没食子酰基葡萄糖(m/z 635)；峰6～7.四-O-没食子酰基葡萄糖(m/z 787)。

2.2.3NPs-凝胶的胶凝温度、胶凝时间以及黏度值的测定和分析 实验结果表明，NPs-凝胶的凝胶温度为(33.33±0.47) ℃，凝胶时间为(118±17) s。黏度计的测量结果显示，从20 ℃到32 ℃，随着温度的升高，NPs-凝胶的黏度值在150～220 mPa·s范围内波动且呈上升趋势。当温度上升到33 ℃时，黏度值急剧上升，表明制备凝胶的内部结构变化，测定的黏度值是(1076.67±20.55)mPa·s-1。当温度低于33 ℃时，凝胶的黏度较低，主要是以液体状态存在；当温度高于33 ℃时，NPs-凝胶溶液转变为半固体凝胶状态。

2.2.4NPs包封率的测量和分析 经过实验测量和计算，没食子酸标准曲线方程为Y=112.564X+0.022，Y代表吸光度，X代表多酚浓度(mg·mL-1)(R2=0.996 7)。通过标准曲线方程和上清液中游离药物在765 nm处的吸光度值，计算得到NPs的包封率为(14.94±2.52)%(n=3)。

2.2.5体外药物释放 如图2e所示，没食子多酚在前3 h内迅速释放，释放3 h后累积释放率是(98.44±1.68)%。比较之下，NPs-凝胶在释放48 h时的累积释放率是(13.81±1.47)%。结果表明，制备的NPs-凝胶相对于游离的没食子多酚来说有缓释的功能，这有利于延长药物在体内的作用时间，减少药物的浪费。

2.3没食子反向温敏凝胶对宫颈炎作用的动物实验

2.3.1大鼠的一般情况和脏器指数 末次造模结束后，给予25%苯酚胶浆的大鼠阴道口红肿，有黏性分泌物流出，毛色变差，食欲下降。每次给予造模药时，实验大鼠均表现出抵抗挣扎的行为，给药后，大鼠喜静，成群待在笼子的一个角落里，活动明显减少，由于苯酚对黏膜有强烈的腐蚀作用，导致大鼠在接受了苯酚胶浆后可出现全身轻微颤抖，这是大鼠宫颈及周边部位疼痛的反映；随着造模时间的延长，大鼠阴道口有流血的现象。给予药物治疗后，阳性药组、NPs-凝胶组以及没食子多酚物理混合组的大鼠逐渐恢复了行动和饮食。与模型组比较，阳性药组、NPs-凝胶组以及没食子多酚物理混合组的大鼠阴道红肿和阴道分泌物的情况逐渐好转，红肿逐渐消失，阴道分泌物逐渐减少甚至消失，单因素方差分析显示差异有统计学意义；空白凝胶组与模型组的情况相似，红肿和分泌物持续存在；NPs-凝胶组的大鼠情况较物理混合组更好(P=0.224，P=0.576)。具体结果见图3A和3B。宫颈红肿和分泌物结果表明，没食子多酚在促进创面愈合的同时有抗感染及提高免疫的作用。

通过解剖并称量宫颈质量，计算得到宫颈的脏器指数，具体结果见图3C。数据显示，正常组的宫颈脏器指数是(1.15±0.24)mg·g-1，模型组的脏器指数明显升高[(1.84±0.26)mg·g-1](P<0.001)；与模型组比较，除空白凝胶组外，其他组的脏器指数均显著性降低(P<0.01)；模型组与空白凝胶组的结果相似(P=0.586)，NPs-凝胶组与多酚物理混合组的结果相似(P=0.223)。表明没食子多酚可以抑制宫颈脏器指数的增加，缓解宫颈充血水肿的情况，证明其对实验性宫颈炎有保护作用。

2.3.2宫颈炎大鼠的组织病理学分析 对照组大鼠宫颈组织正常。模型组和空白凝胶组大鼠宫颈组织上皮厚度增加，角化层脱落，黏膜及其固有层充血水肿，较多炎细胞浸润，腔内有大量炎性渗出物及坏死组织。与模型组比较，阳性药组、NPs-凝胶以及物理混合组的宫颈组织病变减轻，病变处的部分组织已经开始修复，甚至接近正常；炎性细胞浸润减轻，炎性渗出减少。提示没食子多酚对实验大鼠宫颈炎有一定疗效，可加速修复宫颈黏膜上皮；将没食子多酚制备成纳米颗粒并负载到可逆温敏凝胶中治疗效果更加显著。见图4。

①与NPs-凝胶比较，t=13.272，11.255，4.009，P<0.001。

A.阴道红肿评分；B.宫颈分泌物评分；C.脏器指数；①与模型组比较，t=-17.000，-12.649，-11.180，-7.050，P<0.001；②与模型组比较，t=-11.314，-8.367，-8.062，-5.721，P<0.001；③与模型组比较，t=-4.366，-3.939，P<0.001；④与模型组比较，t=-2.880，P<0.01；⑤与模型组比较，t=-1.992，P<0.05；⑥与物理混合组比较，t=-1.668，P<0.001。

2.3.3大鼠宫颈组织TNF-α、EGF和EGFR的表达水平 经给药治疗后，与模型组比较，各治疗组大鼠的TNF-α水平降低，逐渐接近于健康正常组大鼠的TNF-α水平，差异有统计学意义；空白凝胶组的结果与模型组相似(P=0.263)，NPs-凝胶组的平均水平比没食子多酚物理混合组更低，但差异无统计学意义(P=0.484)。相反，对于EGF和EGFR的表达水平来说，各治疗组大鼠炎症因子水平的表达较模型组逐渐增加，且均逐渐接近于健康正常组大鼠的水平，差异有统计学意义。空白凝胶组的结果与模型组相似(EGF水平：P=0.878，EGFR水平：P=0.672)，NPs-凝胶组的平均水平比没食子多酚物理混合组的更高，EGF水平的结果差异有统计学意义(P<0.01)，但EGFR水平的结果差异无统计学意义(P=0.294)。如图5。

3 讨论

通过聚酰胺柱分离得到没食子中特定的成分，该组分通过纳米沉淀法成功制备纳米颗粒，并将其负载到可逆温敏凝胶中形成新的剂型。温敏凝胶与纳米颗粒相结合，在方便药物传送的同时，提高生物利用度，减少给药次数，进而解决患者依从性差的问题，增强疗效。

为了实现缓释效果，温敏凝胶可以滞留足够时间，但累计释放度不高，后续实验可在纳米颗粒的粒径、制备纳米颗粒和温敏凝胶的材料等方面出发，改进和提高药物的累计释放度。对于给药频率，由于NPs-凝胶的载药量和物理混合组游离没食子多酚的含量相等，理论上应减少给药次数，但游离没食子多酚溶液容易从大鼠体内流出，考虑到药物的有效性和安全性，本实验暂将给药频次定为一天一次。对于更准确的给药频次和给药剂量的探究，需后续通过动物实验检测血药浓度后确定。

实验中用25%苯酚胶浆制备了大鼠宫颈炎模型，观察没食子多酚NPs-凝胶对实验性宫颈炎大鼠的疗效。给药后，大鼠阴道的红肿情况有所改善，分泌物减少，宫颈的肿大有所减轻。组织病理学结果表明，复合制剂使宫颈炎大鼠宫颈组织病变较模型组减轻，病变处组织已经开始修复，甚至接近正常。TNF-α是一种重要的促炎性细胞因子，是免疫反应的重要调节因子[16-17]，可促进炎症的发生、发展，不利于组织愈合。如图5A所示，治疗组TNF-α的表达降低，表明宫颈炎大鼠免疫粘附功能及细胞吞噬功能增强，即没食子多酚可通过调节免疫功能而达到治愈的效果。另外，宫颈组织的EGF和EGFR水平均增加，说明没食子多酚可刺激宫颈上皮细胞分泌EGF和EGFR，促进宫颈鳞状上皮细胞的增殖、分化，加速组织的愈合，其中以NPs-凝胶作用尤为显著。

A.对照组；B.阳性药组；C.凝胶+NPs组；D.物理混合组；E.空白凝胶组；F.模型组；箭头的不同颜色表示：黑色表示上皮，红色表示炎症细胞，蓝色表示脱落的角化层，绿色表示宫颈组织充血水肿，橘色表示坏死组织。

A.用ELISA法测定血清中TNF-α的蛋白水平；B.用ELISA法测定血清中EGF的水平；C.用ELISA法测定血清中EGFR的水平；①与模型组比较，t=-3.071，-4.479，-2.052，P<0.001；②与模型组比较，t=-2.128，P<0.01；③与模型组比较，t=6.540，6.159，7.084，P<0.001；④与模型组比较，t=6.534，P<0.01；⑤与物理混合组比较，t=3.841，P<0.01；⑥与模型组比较，t=7.273，5.928，4.226，P<0.001；⑦与模型组比较，t=3.010，P<0.05。

通过药效学实验可以看出，没食子多酚NPs-凝胶可修复病变组织，下调TNF-α，刺激宫颈上皮细胞分泌EGF，并通过增加宫颈上皮EGF和EGFR表达，加速组织的愈合，有效抑制宫颈炎的发展。