HBV感染不同状态者血清Tim-3的差异及与HBeAg和HBV DNA的关系

谭 倩 段雨函 李锦貌

湖北省恩施土家族苗族自治州中心医院临床检验中心 (湖北 恩施， 445000)

T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)是近年新发现的一种免疫负调控因子，主要表达于T细胞表面，通过激活Tim-3/Galectin-9(Tim -3L)信号通路参与免疫调控，与病毒感染密切相关，但尚不清楚其在乙型肝炎患者中的价值[1，2]。本研究选取180例不同状态HBV感染者和50例健康体检者作为研究对象，探讨不同状态HBV感染者血清Tim-3差异，并分析其与HBeAg和HBV DNA的关系，为乙型肝炎患者诊疗提供更多理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年6月至2019年6月于本院门诊及住院诊治的180例HBV不同感染状态者作为研究对象。入组标准：①诊断标准符合中华医学会肝病学分会和中华医学会感染病学分会联合制定的《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》[3]；②排除合并其他肝炎患者；③排除合并人类免疫缺陷病毒等其他病毒感染者；④排除合并严重内科疾病者；⑤排除合并恶性肿瘤者。其中HBV携带者50例(携带组)、慢性乙型肝炎60例(CHB组)、慢性乙型肝炎急性发作者40例(急性发作组)和肝硬化组30例(肝硬化组)。携带组患者男28例，女22例，平均年龄(48.27±9.43)岁；CHB组患者男35例，女25例，平均年龄(48.61±9.27)岁；急性发作组患者男24例，女16例，平均年龄(49.17±9.25)岁；肝硬化组患者男19例，女11例，平均年龄(49.41±10.18)岁。同期选取50例健康体检者作为对照组，其中男27例，女23例，平均年龄(48.29±9.67)岁。5组人员在性别和年龄等一般资料上比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究所有研究对象均签署知情同意书，并通过本院伦理委员会批准。

1.2 观察指标与检测方法

1.2.1 标本收集 5组人员入组次日晨起空腹抽取静脉血5 ml，静置30 min，4 000r/min离心10 min，将血清分为4部分，分装冻存于-80℃冰箱，待所有标本集齐后集中检测。

1.2.2 血清ALT检测 采用连续检测法检测血清ALT，试剂盒购自北京利德曼生化股份有限公司，仪器为美国雅培C8000全自动生化仪，由检验科专业人员参考说明书进行操作及分析，参考值为5～50 U/L。

1.2.3 血清HBeAg检测 采用酶联免疫吸附法检测血清HBeAg，试剂盒购自厦门英科新创科技公司，仪器为美国Biotek公司Cytation 5多功能酶标仪，由检验科专业人员参考说明书进行操作及分析，采用样本临界值的比值(S/CO)进行判定：当S/CO<1时判定为阴性，其中CO值=OD(阴性对照组均值)×2.1。

1.2.4 血清HBV DNA定量检测 采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清HBV DNA水平，试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司，仪器为美国ABI公司7500实时荧光定量PCR检测仪，严格按说明书进行操作及分析，其检测下限定为500 copies/ml，当结果低于500 copies/ml时判定为阴性。

1.2.5 血清Tim-3检测 采用酶联免疫吸附法检测检测血清Tim-3，试剂盒购自上海瓦兰生物科技有限公司，检测仪器为美国Thermo Fisher Scientific公司Multiskan MK3酶标仪，操作按说明书进行。

2 结果

2.1 5组人员血清Tim-3和ALT检测结果 见表1。

表1 5组人员血清Tim-3和ALT比较

2.2 HBeAg阳性与阴性患者Tim-3检测结果 见表2。

表2 HBeAg阳性与阴性患者Tim-3比较

2.3 HBV DNA阳性与阴性患者Tim-3检测结果 见表3。

表3 HBV DNA阳性与阴性患者Tim-3比较

2.4 血清Tim-3在HBV感染中的诊断价值 绘制ROC曲线发现，血清Tim-3在诊断HBV感染上具有一定价值(P<0.05)，其曲线下面积为0.789，95%CI为0.711～0.842，截断值为16.45 pg/ml，敏感度为83.5%，特异度为80.1%。见图1。

图1 血清Tim-3诊断HBV感染的ROC曲线图

2.5 血清Tim-3对HBV感染进程的影响 经Logistic回归分析发现，血清Tim-3是导致HBV进展的独立危险因素(P<0.05)，OR值为1.83(95%CI：1.24～2.32)。

3 讨论

至今为止，血清学指标(HBV-M)仍是诊断乙型肝炎患者最常用的指标，可反映患者体内病毒转变过程，但不能作为判断患者是否具有传染性的直接证据[4]。近年，临床将HBV DNA定量检测作为判断HBV病毒感染、复制和诊断的直接可靠依据，这是因为其检测方法灵敏度高、特异性强，即使在HBV病毒含量极低的情况下也可检测到其复制情况，是确定HBV感染不同复制状态的“金标准”[5，6]。尽管如此，HBV DNA并非完全理想指标，且单项检测存在其劣势及不足，寻找更多敏感有效指标仍是乙型肝炎诊疗的重要方向[7]。人Tim基因位于人染色体5q33.2，首次由McIntire等[8]在研究哮喘时发现，随后发现该位点与过敏反应和自身免疫性疾病密切相关，主要编码Tim-1、Tim-3和Tim-4 3种受体蛋白[9]。其中Tim-3为Ⅰ型膜蛋白，包括胞浆区、跨膜区、黏蛋白区、免疫球蛋白Ⅴ区和信号肽区，其中，胞浆区是主要参与信号传递，免疫球蛋白Ⅴ区则主要与配体结合[10]。既往研究认为，Tim-3主要表达于分化成熟Th1细胞上，作为一个负性调节因子负性调节免疫反应，在抗病毒反应中占有一定地位[11，12]。最新研究表明，Tim基因家族是磷脂酰丝氨酸(PS)一个新的受体家族，与Ps结合可介导凋亡T细胞识别和清除[13，14]。

众所周知，HBV感染人体后是否发病 、病情轻重及转归、临床类型与遗传因素和宿主免疫功能相关，尤以细胞免疫为主[15]。研究发现，HBV感染时Tim-3可高表达，与病毒复制相关[16]。但Wu等[17]学者认为Tim-3表达与机体病毒载量无明显相关，却意外地发现与血清ALT水平呈正相关。在本研究中，5组人员血清Tim-3和ALT水平比较差异有统计学意义，提示血清Tim-3和ALT水平与HBV感染状态相关，与上述结论基本一致。但后续研究发现，血清Tim-3与HBeAg和HBV DNA相关，HBeAg阳性者血清Tim-3水平明显高于HBeAg阴性者，HBV DNA阳性者血清Tim-3水平高于HBV DNA阴性者，差异均有统计学意义，与Wu等学者研究结论不一致，不排除地区差异。此外，本研究还绘制了ROC曲线，发现血清Tim-3在诊断HBV感染上具有一定价值，其敏感度和特异度分别为83.5%和80.1%，有望成为HBV DNA联合指标指导乙型肝炎患者诊疗。最后，本研究还进行了Logistic回归分析，发现血清Tim-3是导致HBV进展的独立危险因素，提示临床工作者诊疗过程中可增大对血清Tim-3检测的关注度。

综上认为，Tim-3在HBV感染不同状态差异明显，且与HBeAg和HBV DNA状态相关，是导致HBV进展的独立危险因素。但考虑到所选研究对象样本量、居住地和观察时间等，其推广价值有待后续进一步研究。