木枣不同发育时期总黄酮含量测定研究

梁晓娟

(山西省畜牧兽医学校，山西 太原 030024)

黄酮类物质是一种天然的植物次生代谢产物，广泛存在于各种植物的果实、叶片、花等器官中。其具有较高的营养价值和较强的抗氧化性，是很多营养保健品和化妆品的主要功效成分。枣味甜可口、营养丰富，含有多种功能营养成分，且具有药用保健功效。黄酮类物质作为红枣重要的活性成分之一，近年来被很多学者分析研究，但多集中在干枣黄酮成分测定，不同品种、不同器官中黄酮含量比较及枣黄酮的分离纯化等方面。笔者以山西吕梁地区主栽品种木枣为材料，建立了一种枣果中总黄酮含量的测定方法，探索了木枣不同发育时期枣果总黄酮的动态变化规律，旨在为今后枣产品的开发利用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

试验材料采自山西省农科院果树研究所国家枣种质资源圃，分别在木枣果实膨大期、白熟期、半红期和全红期采样。采回后立即切片置于60 ℃烘箱中烘干，再用粉碎机粉碎后储存备用。

试验试剂为芦丁、无水乙醇、亚硝酸钠、亚硝酸铝、氢氧化钠等，均为分析纯。

1.2 试验仪器

试验仪器有电热鼓风干燥箱(上海博迅9076MBE)，植物样品粉碎机(上海标本XJA-100A)，电子分析天平(奥豪斯PR2247ZH/E)，超纯水仪(北京普析GWA-UN3-F40)，超声波清洗器(郑州博大KQ-500DB)，紫外双光可见分光光度计(上海元析UV-8000S)，高速冷冻离心机(德国Eppendorf 5810R)。

1.3 试验方法

1.3.1 芦丁标准溶液的配制

参考聂静苑等的研究方法加以改进，准确称取芦丁标准品10 mg，加95%的乙醇溶液，超声溶解10 min(功率90 W，水温28 ℃)，冷却后定容至50 mL容量瓶中，即得浓度为0.2 mg/mL的芦丁标准溶液。

1.3.2 标准曲线绘制

分别吸取芦丁标准溶液0.0 mL，1.0 mL，2.0 mL，4.0 mL，6.0 mL，8.0 mL于6个25 mL的比色管中。各加入95%的酒精溶液至10 mL，加5%的NaNO2溶液1 mL摇匀，静置6 min；加10%的AlNO2溶液1 mL摇匀，继续静置6 min；再加4%的NaOH溶液10 mL；最后加95%的乙醇溶液至刻度线，摇匀，络合反应15 min.用紫外分光光度计测500 nm处吸光度，绘制芦丁标准曲线，并对总黄酮测定方法进行验证。

1.3.3 总黄酮含量测定

1) 总黄酮提取液制备。分别称取各待测样品粉末1 g于15 mL离心管中，用70%的酒精溶液定容至10 mL，超声提取30 min(功率40 W，水温70 ℃)，5 000 rpm离心10 min.收集上清液作为总黄酮提取液，试验重复3次。

2) 总黄酮含量测定。取不同样品的提取液各1 mL分别置于25 mL比色瓶中，按照绘制标准曲线的方法进行测定操作，测定中使用的乙醇浓度为70%.络合反应结束后，测500 nm处吸光度，计算黄酮含量，以mg/g的芦丁为单位。

2 结果与分析

2.1 芦丁标准曲线

以吸光度(A)为纵坐标(y)，芦丁溶液浓度为横坐标(x)，绘制出芦丁标准曲线，见图1.

由图1可知，回归方程为y=0.011 3x+0.005 8，相关系数R2=0.009 2.表明芦丁标准品的浓度为8 μg/mL～64 μg/mL时，与吸光度线性关系良好。

图1 芦丁标准曲线

2.2 精密度试验

取芦丁标准溶液2 mL，按照标准曲线绘制方法，在500 nm处重复测定吸光度5次，得到平均吸光度x为0.2，标准偏差SD为0.003 7，相对标准偏差RSD为1.85%，说明此方法所用仪器的精密度良好。

2.3 重现性试验

分别称取重量约1 g的半红期枣样品干粉置于5个不同的离心管中，制备总黄酮提取液并测定总黄酮含量。测定结果见表1.

表1 总黄酮重现性试验结果

由表1可知，计算得到RSD值为0.76%，表明本试验重现性很好。

2.4 木枣不同发育时期总黄酮含量比较

根据建立的总黄酮测定方法，分别取样测定不同发育时期枣果样品中的总黄酮含量。结果如图2所示。

图2 吕梁木枣不同发育时期总黄酮含量

由图2可知，木枣中总黄酮含量随着果实的发育呈先升高后降低的趋势。膨大期和白熟期的总黄酮含量较高，特别是白熟期，含量高达63.75 mg/g；从白熟期以后枣果中的总黄酮含量急剧下降，半红期含量为14.19 mg/g；全红期降到最低，仅2.06 mg/g.

3 讨论与结论

黄酮类物质是植物代谢过程的转化产物，可以影响果蔬的气味、颜色，具有多种保健功效。黄酮类物质的积累与植物生长发育的过程和环境密切相关。邹玲等发现，新疆骏枣枣叶中黄酮含量随着物候期的变化由高逐渐降低，盛花期黄酮含量较高。王忠忠等研究表明，宁夏枸杞中黄酮类物质随果实发育呈下降趋势，原因可能是因为枸杞在色变期和成熟期光合产物较少，影响了黄酮的积累。本试验结果也显示，木枣果实中黄酮含量大小依次为白熟期>膨大期>半红期>全红期；黄酮在果实成熟期下降较快，可能是由于此阶段果实中各物质转化消耗了较多的光合产物，黄酮也随之降解或合成了其它营养物质，致使黄酮含量降低。而木枣在白熟期总黄酮含量很高，可能因为此时光照强度高，光合作用强，黄酮合成所需底物充足。因此，为开发黄酮含量较高的枣产品，可以考虑在木枣白熟期采摘枣果。此外，本研究所建立的枣果黄酮测定方法操作简单、精密度高、重复性好，可为今后其它枣树品种黄酮成分的测定研究提供参考。