奶牛乳房炎的诊断与防控的研究进展

牛桂锋

（山东省诸城市畜牧业发展中心 山东潍坊 262200）

奶牛乳房炎是目前危害奶牛养殖业的最重要疾病之一，根据奶牛乳房炎的临床表现可将其分为临床型乳房炎和隐性型乳房炎，引起奶牛乳房炎的病原很多，其中最主要的病因是病原微生物感染。能够引起奶牛乳房炎的病原微生物有140多种，其中主要包括球菌、杆菌、真菌、支原体和病毒等，根据病原微生物的来源和传播途径等，可将这些病原微生物分为环境性微生物和传染性微生物两种。除了这些病原微生物以外，环境卫生条件差、饲料营养品质失衡及粗暴养殖同样也是奶牛乳房炎的重要诱因。

奶牛乳房炎的频繁发生不仅会阻碍奶牛养殖业的健康发展，同样也会对消费者的健康造成影响，如何能够快速准确的诊断奶牛乳房炎并有效的治疗及预防该病一直是研究人员研究的重点，本文从乳房炎的流行情况、不同类型的诊断方法及常用疫苗的免疫效果及存在的问题进行了综合讲解，以期为后续相关制剂的研发及饲养人员的合理选择提供参考和指导。

1 奶牛乳房炎的流行情况

据报道，奶牛乳房炎在全球主要的奶牛养殖区都是广泛流行的，国外地区的奶牛乳房炎平均发病率为25%～60%，美国的奶牛乳房炎发病率较高，可达50%；而在欧洲的牛奶主要产区如丹麦、芬兰、瑞士、法国等，临床型奶牛乳房炎的发病率在16%左右，在我国的重要邻国俄罗斯，乳房炎的发病率可达38%。与国外相比，我国奶牛乳房炎的发病情况更为严重，发病率通常为20%～75%，而在部分地区发病率甚至超过75%。由此可见，如何及时准确的诊断奶牛乳房炎并有效治疗，同时对奶牛乳房炎进行合理的免疫防护，对降低我国奶牛乳房炎的发病率，促进我国奶牛养殖业的健康发展是十分重要的[1]。

2 奶牛乳房炎的诊断

临床型奶牛乳房炎具有明显的临床症状，因此较容易诊断。奶牛乳房炎的准确诊断主要是针对隐性型奶牛乳房炎，传统的诊断方法包括病原分离鉴定、乳汁体细胞计数、乳汁pH值检测、酶检测、乳汁导电率检测等，虽然能够对隐性型乳房炎进行检测，但存在灵敏度不高、主观判断较多容易造成诊断误差、不易于进行大规模检测等问题。因此，本文主要是介绍诊断隐性型奶牛乳房炎的新的诊断方法[2]。

2.1 单重PCR检测方法

随着分子生物学的大力发展，聚合酶链式反应（PCR）被广泛的应用于病原微生物的检测，而病原微生物感染是导致奶牛乳房炎的最主要原因。因此，有大量研究人员通过设计检测诱导奶牛乳房炎发病的主要病原微生物（如金黄色葡萄球菌、乳源无乳链球菌等）的特异性检测引物，进而对隐性型奶牛乳房炎进行检测。该方法与传统的病原分离鉴定相比，其灵敏度和特异性更高，且更适用于大批量的流行病学检测，但由于奶牛乳房炎通常是由多种病原微生物混合感染引起，因此研究人员又在单重PCR检测的基础上建立了多重PCR检测方法。

2.2 多重PCR检测方法

为了同时检测能够引起奶牛乳房炎的多种病原微生物，研究人员建立了多重PCR检测方法，其中最常见的是检测乳房链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌的四重PCR体系和检测金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和停乳链球菌的三重PCR检测方法。多重PCR检测方法克服了单重PCR仅能检测单一病原的缺点，但由于要同时检测多种病原，所以需要对PCR的反应体系和程序进行最佳的优化，也降低了检测方法的灵敏度。

2.3 实时荧光定量PCR检测方法

实时荧光定量PCR检测方法是通过在传统PCR检测的基础上加入了荧光染料或荧光探针，从而可以实时检测样品中的病原微生物含量，目前已有报道有单独检测金黄色葡萄球菌的荧光定量检测方法及同时检测金黄色葡萄球菌、乳房链球菌、无乳链球菌的多种荧光定量检测方法。荧光定量检测方法较传统的PCR检测方法相比灵敏度更高、更适用于大规模的临床样品检测，同时可以对病原进行定量检测，但由于成本高、技术复杂，很难在基层和养殖企业中进行大规模推广。

2.4 环介导等温扩增技术（LAMP）

环介导等温扩增技术是一种新型的体外等温扩增检测特异性核酸的检测技术，该方法通过设计针对靶基因不同区域的引物，可在较短时间内对目的基因进行指数扩增。且该检测方法中可加入不同的指示剂，因此不需进行核酸凝胶电泳便可观察，临床检测上操作更为简单。目前有报道的有关于牛乳中金黄色葡萄球菌、乳链球菌和大肠杆菌的检测方法。但由于该方法对引物设计要求较高，容易产生非特异型扩增导致假阳性，因此临床应用上还需进一步改进。

3 奶牛乳房炎的疫苗

疫苗免疫一直是预防传染性疾病的最常用方法之一，且近年来国内外的研究人员在奶牛乳房炎相关疫苗的研发方面取得了瞩目的成果。目前，根据疫苗的成分可将奶牛乳房炎疫苗分为灭活苗、活苗、亚单位疫苗、载体疫苗和核酸疫苗[3]。

3.1 奶牛乳房炎灭活疫苗

灭活疫苗主要是通过甲醛等灭活剂将细菌培养物灭活后加入适当的免疫佐剂制备的，目前商品化的奶牛乳房炎灭活苗有主要针对葡萄球菌、大肠杆菌和分枝杆菌的单价疫苗以及大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的二价疫苗。虽也有研究人员成功研发了链球菌奶牛乳房炎灭活疫苗，但由于该疫苗交叉免疫原性差，仅能够抵抗同源链球菌的攻击，因此该疫苗很难商品化。

3.2 奶牛乳房炎弱毒疫苗

弱毒或减毒疫苗主要是通过自然筛选或人工传代致弱的方式，筛选出致病力弱或无致病能力的毒株进而制备的疫苗，该疫苗能够在动物体内增殖，因此无需加强免疫便可产生持久的保护力。目前，关于奶牛乳房炎弱毒疫苗的研究相对较少，仅有部分研究利用金黄色葡萄球菌减毒株制备了弱毒疫苗，并证明该疫苗能够诱导牛奶产生特异性抗体，减轻奶牛乳房炎的临床症状。

3.3 奶牛乳房炎亚单位疫苗

奶牛乳房炎亚单位疫苗指的是通过传统方法分离纯化或载体表达引起奶牛乳房炎的病原微生物的荚膜多糖、类毒素、表面蛋白等物质，并混合适当的免疫佐剂所制备的疫苗。目前关于奶牛乳房炎亚单位疫苗的报道有利用金黄色葡萄球菌的荚膜多糖CP5和CP8以及无乳链球菌主要黏附蛋白Fb s、Lm b、Srr和Sip以及重组表达停乳链球菌的Gap C1蛋白及金黄色葡萄球菌的tlsdB和TRAP蛋白制备的，且动物试验证明奶牛乳房炎亚单位疫苗能够激活机体有效的免疫应答，有很好的进一步研发的潜在价值。

4 总结

虽然到目前为止有多种检测和诊断奶牛乳房炎的方法，但由于奶牛养殖户的重视程度不高，隐性型奶牛乳房炎的发病情况被严重忽视，因此饲养人员应合理的选择适当的诊断方法，以及早诊断和发现隐性型奶牛乳房炎发病的病牛，及早治疗降低损失。针对奶牛乳房炎的疫苗近年来也得到了大规模的发展，但目前常用的商品化疫苗仍然为传统的灭活疫苗，新型疫苗的研发仍较多处于实验室阶段，如何研发出针对临床的高效的多价疫苗仍然是研发人员需要关注的重点之一。█