辅助T 细胞标志物T-bet/GATA3 在冠心病患者中的表达及意义*

耿海华，徐 倩，卓 建，王 飞，许培曙，姚莉红，盛红专

（南通大学附属医院心血管内科，南通 226001）

冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）是冠状动脉管腔狭窄或闭塞引起的心脏病,近年来冠心病的发病率呈进一步升高和年轻化态势,是严重威胁人类健康的一大疾病。研究[1]发现炎症在冠心病事件中发挥重要作用。

Th1 和Th2 细胞是CD4+T 细胞（辅助T 细胞）的两个主要亚群。Th1 细胞由T 细胞表达的T-box（Tbox expressed in T cells，T-bet）特异性调节,主要分泌肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）等促炎因子,可引起斑块不稳定[2]。Th2 细胞由GATA 结合蛋白3（GATA-binding protein-3，GATA3）特异性调节,主要分泌白细胞介素（interleukin，IL）-4、IL-10 等多种抗炎细胞因子[3]。T-bet/GATA3 最终决定了CD4+T 细胞的分化方向[4]。正常人体内Th1 和Th2 细胞处于一个相对平衡的状态,Th1/Th2 失衡可引起持续过度的炎症反应[5]。已发现Th1/Th2 失衡与肿瘤[6-7]、哮喘[8]、过敏[9-10]等疾病的发生发展和转归有关,但Th1/Th2失衡在冠心病中的作用尚不明确。

T-bet 和GATA3 分别是决定Th1 和Th2 细胞分化的重要转录因子,本研究以T-bet/GATA3 比值作为研究指标,探讨其在冠心病中的表达和意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机抽取2019 年12 月—2020 年12 月在南通大学附属医院行冠脉造影术的266 例冠心病患者为研究对象。纳入标准:（1）临床资料完整；（2）行冠脉造影术；（3）符合临床急性ST 段抬高型心肌梗死（ST-segment elevation myocardial infarction，STEWI）、非ST 段抬高型心肌梗死（non-ST-segment elevation myocardial infarction，NSTEWI）、不稳定型心绞痛（unstable angina，UA）的诊断标准。排除标准:（1）有严重肺部感染、痛风、结缔组织病等相关炎症性疾病；（2）心肌炎患者；（3）术后合并严重心力衰竭,心功能Ⅲ～Ⅳ级、一般情况较差者；（4）有严重肝肾功能不全者；（5）合并心房颤动、扩张型心肌病、肥厚型心肌病等相关心脏结构性疾病者；（6）合并恶性肿瘤及行放化疗者；（7）近期有重大手术外伤患者；（8）溶栓治疗者。所有患者术前均予阿司匹林、氯吡格雷或替格瑞洛抗血小板聚集及他汀类药物调脂稳斑治疗。研究方案经南通大学附属医院医学伦理委员会批准,所有患者均知情同意。

1.2 分组方法

1.2.1 根据临床表型分组 根据临床综合症状、心电图和心肌标志物等,将有反复发作胸闷、胸痛症状,冠脉造影排除冠心病的患者作为对照组（46 例）,220 例冠心病患者分为:STEWI 组（56 例）、NSTEWI组（70 例）和UA 组（94 例）。

1.2.2 根据冠脉病变程度分组 根据冠脉造影结果,对患者进行Gensini 评分,并按照评分结果对冠状动脉病变程度进行分组:45～144 分,重度病变组（67 例）；21～44 分,中度病变组（73 例）；1～20 分,轻度病变组（83 例）；0 分,正常组（43 例）。

1.3 逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）用淋巴细胞分离液提取外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBWC）,提取RNA 后进行逆转录,实时免疫荧光定量PCR 检测患者PBWC 中T-bet、GATA3 mRNA 的表达。引物如下:GATA3:F:5′-GTGTTACCGTTCACCAGTTGC-3′；R:5′-GCAGGAATAGGGACAAGACAG-3′。T-bet:F:5′-TGGTGCTGCGTCTTGCTTT-3′；R:5′-CTGGCGGGCTGATGGTTAT-3′。β-actin:F:5′-CGGGAAATCGTGCGTGACAT-3′；R:5′-CAGGAAGCAAGGCTGGAAGA-3′。扩增程序:95 ℃预变性5 min,然后95 ℃15 s,60 ℃30 s,72 ℃30 s,40 个循环。

1.4 统计学方法 使用SPSS 22.0 软件对数据进行处理及分析,符合正态性分布的计量资料以表示,以单因素方差分析；不符合正态分布的计量资料以中位数（四分位数间距）表示,采用非参数Kruskal-Wallis 检验；计数资料以n（%）表示,采用χ2检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同临床亚型组间临床资料的比较 对不同临床亚型组患者的临床资料进行分析,结果发现4组患者的性别、高血压、血糖、B 型钠尿肽（type B natriuretic peptide，BNP）、胆固醇、低密度脂蛋白、生长刺激表达基因2 蛋白（growth stimulation expressed gene 2，ST2）、D-二聚体比较差异均有统计学意义（均P<0.05）,年龄和三酰甘油比较差异无统计学意义（P＞0.05）,进一步组间比较发现:冠心病组以男性患者居多（P<0.05）,STEWI 组、NSTEWI 组中BNP、胆固醇、低密度脂蛋白、ST2 水平均较UA 组和对照组显著升高（均P<0.05）（表1）。

表1 冠心病不同临床亚型组间临床资料分析[n，%，，中位数（四分位数间距）]

表1 冠心病不同临床亚型组间临床资料分析[n，%，，中位数（四分位数间距）]

注:与STEWI 组相比,*P<0.05；与NSTEWI 组相比,#P<0.05。

2.2 T-bet/GATA3 在冠心病不同临床亚型组间的表达比较 T-bet/GATA3 在STEWI 组中表达最高,NSTEWI 组、UA 组、对照组中依次降低（均P<0.05）（图1）。

图1 不同临床表型冠心病患者T-bet/GATA3 表达比较

2.3 T-bet/GATA3 在不同冠脉病变程度组间表达比较 与正常组相比,冠脉重度病变组、中度病变组和轻度病变组T-bet/GATA3 均显著升高（均P<0.05）,但T-bet/GATA3 在这3 组之间的表达差异无统计学意义（P＞0.05）（图2）。

图2 不同冠脉病变程度患者T-bet/GATA3 表达比较

3 讨 论

冠心病是严重威胁人类健康的主要疾病之一,本研究以炎症调节因子T-bet/GATA3 比值为切入点,探讨其所调控的Th1/Th2 失衡在冠心病中的作用。

在对冠心病患者的临床资料分析中发现,患者主要以男性、合并高血压、血糖升高者居多,这与冠心病发病的流行病学一致；STEWI 组和NSTEWI 组胆固醇、低密度脂蛋白等较UA 组、对照组显著升高,冠心病的病理基础是粥样斑块的形成,这与冠心病的病理机制有关。

本研究发现,T-bet/GATA3 比值在STEWI 组、NSTEWI 组、UA 组均显著高于对照组,提示冠心病患者体内Th1 炎症信号增加,Th2 炎症信号减低,即存在Th1 和Th2 炎症反应的失衡,且是偏向Th1 细胞的炎症优势,与X.YAN 等[11]研究结果一致。同时,Tbet/GATA3 在UA 组、NSTEWI 组和STEWI 组表达依次升高,说明T-bet/GATA3 的表达与冠心病临床表型相关,因此通过检测T-bet/GATA3 可对冠心病临床表型的判断及病情的评估提供一定的参考价值。

Gensini 评分可量化冠心病患者冠状动脉病变血管的狭窄程度和解剖位置[12]。本研究结果发现,与正常组相比,冠脉重度病变组、中度病变组和轻度病变组T-bet/GATA3 的表达均显著升高,但3 组之间差异无统计学意义,说明T-bet/GATA3 与冠心病斑块形成有关,而与冠脉狭窄程度无关。

目前研究[6]发现乳腺癌患者中存在Th1/Th2 失衡,柴胡皂甙调节Th1/Th2 平衡向Th1 转移可抑制乳腺癌的生长。在慢性心力衰竭患者体内也发现Th1、Th2 及其细胞因子IFN-γ、IL-4 的失衡,百里香酚调节Th1/Th2 极化可改善心脏功能[4]。本研究发现冠心病患者体内存在T-bet/GATA3 升高,即Th1/Th2 的失衡,并且倾向于Th1 炎症方向。调节体内Th1 和Th2 细胞炎症的平衡,可为冠心病的免疫治疗提供新的思路。