铁皮石斛多糖软膏制备工艺及其质量标准研究

2021-11-17朱朋艳乔妙刘海杨张莹霜朱强强袁文娟王宣军

中国民族民间医药·下半月 2021年9期

朱朋艳乔妙刘海杨张莹霜朱强强袁文娟王宣军

【摘要】目的：制备铁皮石斛多糖软膏并建立其质量控制方法。方法：以铁皮石斛多糖浓缩粉为主药，PEG400和PEG3350为基质，薄荷脑，苯氧乙醇等为辅料采用水包油的方法制备软膏。紫外分光光度法建立铁皮石斛多糖的含量方法，采用加速试验和长期试验进一步考察其稳定性。结果：确定铁皮石斛多糖软膏的最佳制备工艺，PEG400和PEG3350的比例为2∶1时，软膏的黏度最佳，易于涂展;多糖含量在20～100μg/mL呈良好的线性关系，回归方程y=0.0101x+0.0971（r2=0.9997），平均回收率为107.8%，RSD=2.1%。该软膏在高温、高湿、强光下均具有良好的稳定性。结论：该软膏制备工艺简便可行，稳定性良好，可用于铁皮石斛多糖软膏的制备;建立的质量标准专属性强，重复性好，可作为该软膏的质量控制。

【关键词】铁皮石斛多糖;软膏;制备工艺;质量标准

【中图分类号】R285【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2021）18-0026-05

Study on Development and Quality Standard of Dendrobium Candidum Polysaccharide OintmentZHU Pengyan1，3QIAO Miao1，3LIU Haiyang2ZHANG Yinshuang2ZHU Qiangqiang3YUAN Wenjuan1，2*WANG Xuanjun1，2

1.Key laboratory of Puer Tea Science，Ministry of Education，Yunnan Agricultural University，Kunming 650201，China;

2.College of Science，Yunnan Agricultural University， Kunming 650201，China;

3.College of Food Science and Technology，Yunnan Agricultural University，Kunming 650201，ChinaAbstract：Objective To prepare Dendrobium candidum polysaccharide （DOP） ointment and establish its quality standard. Methods The ointment was prepared by oil in water method with Dendrobium officinale polysaccharide concentrated powder as main drug，PEG400 and PEG3350 as matrix，menthol and phenoxyethanol as excipients. The content of DOP in ointment was determined by UV. The stability of DOP ointment was further investigated by the accelerated test and long-term test.Results The optimum preparation technology of DOP ointment was determined. When the ratio of PEG400 and PEG3350 was 2∶1，the viscosity of the ointment was the best and easy to spread. The DOP content showed a good linear relationship in the range of 20～100μg/mL，and the regression equation was y=0.0101x+0.0971（r2=0.9997）. The average recovery was 107.8%，RSD was 2.1%. The ointment had good stability under high temperature，high humidity and strong light irradiation.Conclusion The optimized process of the DOP ointment was simple and feasible; the quality standard of the DOP ointment is specific and controllable.

Keywords：Dendrobium candidum polysaccharide （DOP）;Ointment; Preparation Process; Quality Standard

鐵皮石斛是兰科草本植物，集药用、食用、美容于一身的名贵中药材，可单方和配伍使用，与“雪莲、人参、首乌、茯苓、野灵芝、珍珠、冬虫夏草、苁蓉”并称为中华九大仙草[1]，主要分布在我国安徽、浙江、福建、云南等地[2]。目前，铁皮石斛收载于《中国药典》2020年版一部，具有益胃生津，滋阴清热之功效。用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软[4-5]。文献[3]报道其主要成分包括多糖、生物碱、联苄类、菲类化合物、黄酮类物质、氨基酸及微量元素等，其中铁皮石斛多糖类物质占41.1%[6]，除了增强免疫力和抗肿瘤作用外[7-8]，还具有清除自由基和抗脂质过氧化作用[9]、保湿[10]以及抑菌消炎等护肤功效[11]，可用于化妆品的开发[12-14]。

软膏剂是皮肤科常用制剂之一，具有良好的附着性、涂展性，使用方便，安全可靠[15]。本文利用铁皮石斛多糖为原料，以PEG400和PEG3350为基质，制备含铁皮石斛多糖的软膏，建立其质量控制方法，并对药物的稳定性进行了考察，为铁皮石斛多糖应用于化妆品提供前期基础。

1仪器与材料

1.1材料铁皮石斛多糖（批号20190427，实验室自制）、PEG400（山东优索化工科技有限公司）、PEG3350（北京索莱宝科技有限公司）、硬脂醇（化妆品级）、甘油（北京索莱宝科技有限公司）、无水葡萄糖（分析纯）、苯酚（分析纯）、浓硫酸（分析纯重庆川东化工有限公司）、三乙醇胺（分析纯）、苯氧乙醇（日化级）、薄荷油（日化级）;其他辅料均为药用规格或分析纯。

1.2仪器HITACHI/U-2910紫外分光光度计（天美中国科学仪器有限公司），PHS-2F型pH计（上海力辰仪器科技有限公司），HH-ZK4恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司），BSA224S-CW电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司），SIGR/3-18KS离心机（北京科誉兴业科技发展有限公司），KBF-P240恒温恒湿箱（德国BINDER）。

2方法与结果

2.1软膏剂所用基质配比的研究

2.1.1外观性状检测标准软膏剂应均匀，细腻，具有适当的黏稠性，宜涂布于皮肤上或黏膜上并且无刺激性。均匀性是指取软膏约1g，置于表面光洁的玻璃板中间，小心再盖上同样大小的玻璃板，夹紧四周，对着日光观察，应无颗粒状，色泽均匀、细腻。

2.1.2pH值测定将1g软膏稀释至10mL去离子水中，用PHS-2F型pH计测量pH值。根据中国药典二部附录ⅥH规定的乳剂型基质pH要求，W/O型乳剂基质pH应小于8.5，由于此次配制的铁皮石斛软膏剂用于体表的涂抹，其基质pH值应与人体组织液pH值（7.0～7.4）相符合，故进行软膏剂配方篩选pH值应控制在7.0 ～ 7.4内。

2.1.3黏度测定使用NDJ-1型旋转黏度计，检测软膏剂的黏度。铁皮石斛多糖软膏用体表的涂抹，适宜黏度控制在102～105mpas范围内。

2.1.4软膏基质配比选择改变PEG400和PEG3350的配比，按“2.2”项下软膏剂的制备方法制备。按上述检测方法检测软膏剂的各项指标。由表1所给出各组软膏剂各项指标结果，可知当两者比例为2∶1时，软膏黏度适宜，易于涂抹，因此确定该比例用于软膏的制备。

2.2软膏的制作主药：铁皮石斛多糖浓缩粉;油相：PEG3350、PEG400、硬脂醇;水相：甘油、0.1%苯氧乙醇、0.02%三乙醇胺、0.5%薄荷脑、纯化水（自制）。在70℃恒温水浴条件下，将油相缓慢的加入水相中，以乳化机均质乳化1h后，以少量多次的方式加入铁皮石斛多糖浓缩粉，搅拌至多糖完全溶解，充分搅拌均匀，紫外灭菌2h分装，即得，成品如图1所示。所得多糖软膏，质地细腻，涂展性好，稠度适宜，气味清香。

2.3软膏多糖含量的测定

2.3.1葡萄糖标准曲线的绘制精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.0010g至10mL容量瓶中，加水定容至刻度，制成100μg/mL溶液储备液。分别精密量取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置于具塞试管中，各自加水补至1mL，精密加入1mL 5%苯酚（现配现用），摇匀，再精密加入5mL浓硫酸，摇匀，置沸水浴30min，取出放至室温，于488nm波长测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得标准曲线方程为：y=0.0101x+0.0971，r2=0.9997。如图2所示测定的吸光度与葡萄糖浓度呈良好的线性关系。图1铁皮石斛多糖软膏成品图

2.3.2稳定性试验取本品约1g（批号：20201223），精密称定，于25mL量瓶中，分别加乙醇20mL，使完全溶解，加水定容至刻度，冷藏30min 后，全部置于离心管中，10000rpm离心20min，小心弃去上清液，沉淀加水溶解后，少量多次转移至100mL容量瓶加水定容至刻度，摇匀;精密量取1mL置于具塞试管中，精密加入1mL 5%苯酚（现配现用），摇匀，再精密加入5mL浓硫酸，摇匀，置沸水浴30min，取出，放冷至室温，置紫外分光光度计488nm 波长测定吸光度值。结果RSD为3.4%，表明样品溶液在24h内稳定。结果见表2。

2.3.3重复性试验分别同一批号软膏样品（批号20201223）约1.000g，6份，精密称定，置25mL容量瓶中，分别加乙醇20mL，使完全溶解，其余操作同“2.3.2”项下，置紫外分光光度计488nm波长测定吸光度值;计算DOP多糖含量平均值为4.7mg/g;RSD为4.37%（n=6），重复性实验符合要求。结果见表3。

2.3.4回收率试验取同一批号软膏样品（批号：20201223）约0.500g，6份，精密称定，置25mL容量瓶中，精密加入1mg/mL葡萄糖对照品溶液（2.5mL），氮气流下吹干，加20mL乙醇，使完全溶解，其余操作同“2.3.2”项下，置紫外分光光度计488nm 波长测定吸光度值;测得DOP多糖平均含量为107.8%，RSD为2.09%（n=6）表明该法回收率较好，符合要求。其结果见表4。

2.4软膏的稳定性考察

2.4.1加速试验取3批铁皮石斛多糖软膏样品（批号：20201103、20201107、20201113）置于恒温恒湿加速箱中，分别进行高温（60±2℃）、高湿（相对湿度90%±5%）和强光照射试验（人工光源;强度：4500±500lx），于0 d、5 d、10 d取样进行测定DOP多糖含量测定。如图3所示，测定结果表明在高温、强光、高湿条件下，铁皮石斛多糖软膏中的含量无明显差异，表明该软膏具有较好的稳定性。

2.4.2长期试验稳定实验制备3批铁皮石斛多糖软膏（批号：20201103、20201107、20201113）置于恒温恒湿箱中进行加速试验，温度为30 ±2 ℃、相对湿度为65%±5%放置3个月，于0d、30d、60d取样测定DOP含量，结果表明在该实验条件下，含量测定结果无明显差异，表明软膏该较稳定。其结果如图4所示。

3讨论

本研究以制剂外观性状、稳定性、pH、黏度及有效成分含量等作为考察指标，对制剂工艺的辅料等进行筛选，得到DOP软膏的最佳制备工艺条件;继而采用加速实验及稳定性实验考察制备所得软膏的稳定性。

3.1检测波长的确定铁皮石斛多糖在浓硫酸的作用下，水解、脱水成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，在488nm处有最大吸收，吸收度与浓度成线性关系，可用于定量測定。

3.2基质的选择制备铁皮石斛多糖软膏时，考虑以PEG为基质的软膏成分简单，且操作方便。PEG稳定、不易变质，即使在高温状态也较稳定，且是良好的保湿剂。PEG3350水溶性好，比传统的油脂基质刺激小;且石斛多糖在这两种基质中有较好的溶解度;选用这两种基质制作的软膏具有良好的附着性、涂展性，使用方便，安全可靠。

3.3pH的确定研究中发现，当多糖软膏pH在6～8之间时，多糖含量具有较好的稳定性。pH较低或较高时，DOP含量会随之降低;考虑在酸性条件下，多糖容易发生水解反应;在碱性条件下，多糖可能存在烯醇化、异构化反应。且此次制备的铁皮石斛软膏用于体表的涂抹，其pH应与人体组织液的pH相近，因此，研究加入三乙醇胺调节软膏pH至7.0～7.5之间。

铁皮石斛多糖软膏最初的成品存在DOP分散不匀、颗粒较粗的现象，直接影响药物的吸收效果。故在制备时将DOP加少量乙醇溶解后配制，取得了较好的效果。成品均匀、细腻、无颗粒感。在处方中加入甘油起保湿作用，同时也有一定的防腐作用，保证了药品质量。此次研究制备的铁皮石斛多糖软膏，提供一种抑菌、抗氧化的护肤软膏，便于人们使用;并以铁皮石斛多糖含量作为此软膏剂的质量检测指标，采用分光光度法对其进行含量测定，快速准确，重现性好，为铁皮石斛软膏质量控制提供了有效的方法。

参考文献

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