一例瑶山亚种树鼩自发隆突性皮肤纤维肉瘤的诊断

唐海波，梁 亮，曹颖颖，周凡琦，王启辉，张丽峰，冷 静*

(1.广西中医药大学，广西南宁 530200；2.广西高发传染病中西医结合转化医学重点实验室，广西南宁 530200；3.广西医科大学免疫学教研室，广西南宁 530021)

隆突性皮肤纤维肉瘤(Dermatofibrosarcoma protuberans,DFSP)是一种间叶源性低度恶性肿瘤，发生于皮下，多呈结节状，具有局部侵袭性，且易局部复发[1]。该肿瘤占人类恶性肿瘤比率不高，约占总的恶性肿瘤发病率的 0.1%[2]，但其在皮肤肉瘤中却很常见[3]，不同年龄人群均可发病。目前本病病因尚不清楚，治疗首选手术切除，但如切缘状态不明或切缘阳性的则复发率较高[4]，临床上可使用 Mohs 显微外科或大范围切除等综合措施可降低复发[5]。由于DFSP临床症状不显著且较少发生转移，极易被患者忽视，及时发现并早期治疗，往往预后较良好，治疗不及时，可能会造成肿瘤周围骨质破坏等病症，进而增加疾病进程，甚至还可能发生肿瘤细胞转移并危害生命[6]。DFSP的组织病理学显示，瘤体形状不规则，其肿瘤组织源为纤维母细胞，且伴有触手状的伪足向周围蔓延生长，因此临床上常难以彻底切除而极易导致复发[7]。Hoffman 根据肿瘤晚期形成隆突性凸起的特征，将之命名为隆突性皮肤纤维肉瘤[2]。

树鼩(tree shrew，Tupaiabelangeri)为哺乳动物，归为树鼩科树鼩属，主要生活在亚热带、热带地区。树鼩全基因组与多个物种基因组比较分析证实了树鼩与灵长类亲缘关系最为接近[8]。树鼩作为新型实验动物在特定药物研发中有着独特优势，从解剖学分析，树鼩的神经系统、免疫系统和内分泌系统的组织形态特征与灵长类有很高的相似度[9]。此外，树鼩与人类在生化代谢、生理机能等方面的相似性远高于大小鼠及土拨鼠等常用啮齿类动物。树鼩的许多分子和细胞结构近似人类，同时树鼩具有个体小、饲养方法简单、价格相对便宜等优点[10]。因此，树鼩有望代替灵长类动物作为某些人类重大疾病研究的动物模型，具有广泛的应用前景[11]。广西瑶山亚种树鼩主要分布在广西金秀等地。本文首次报道了瑶山树鼩自发隆突性皮肤纤维肉瘤，为研究相关肿瘤提供背景依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 瑶山亚种树鼩，编号Ys175 ，雄性，2016年12月15日由广西金秀瑶族自治县当地农民用捕鼠笼捕获的森林野生瑶山亚种树鼩，运送至广西中医药大学人工驯化养殖实验中心[SYXK 桂 2019-0001]，动物伦理审批号(GXIRB 2018-0006)，动物使用遵循 3R原则。

引入时该野生成年瑶山树鼩体重171 g，年龄约2岁。至2019年11月24日体检时未见异常。2019年12月11日，饲养人员发现该树鼩被毛蓬松，头部有脏污，精神状态差，胸部有肿块，肿块表面溃烂并有渗出、出血，总体重178 g。对其麻醉后抗凝采血，安乐死后进行剖检，分离肿瘤组织及脑、心、肝、脾、肺、肾、睾丸、胃、肠一部分置-80℃保存，一部分用 40 g/L中性多聚甲醛固定备用。

1.1.2 主要试剂 抗CD31抗体(克隆号JC/70A)、抗CD34抗体(克隆号QBEnd/10)、抗CD68抗体(克隆号 RG-M1)、抗Vimentin抗体(克隆号V9)、抗s-100抗体(克隆号4C4.9)、抗ki-67抗体(克隆号MIB-1)，均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.1.3 主要仪器 包埋机(HistoStar)，美国ThermoFisher公司产品；切片机(RM2245)、组织切片染色机(ST5010)、免疫组化染色机(BOND MAX)，德国Leica公司产品；全自动血液细胞分析仪(BC-6800PLUS)、全自动化学分析仪(Bs-2000)，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司产品；全自动凝血分析仪(CS-5100)，日本SYSMEX公司产品。

1.2 方法

1.2.1 血液肝功能、肾功能及血常规等检查 血常规、肝功、心脏功能、电解质、肾功能全套、凝血功能采用全自动血液细胞分析仪及全自动化学分析仪检查。

1.2.2 组织病理学观察及免疫组化 将固定好的组织，常规石蜡包埋、切片，苏木精-伊红染色法(HE)进行组织病理学观察；常规免疫组化检查肿瘤标记分子表达情况。

2 结果

2.1 发病树鼩整体形态及剖检病变

发病雄性树鼩被毛粗糙、无光泽，头部有毛发脱落，形态消瘦，精神状态差。颈胸部有巨大肿瘤，几乎超过身体横断面积，质地较软，边缘界限不清。直径约 4.3 cm×3.9 cm，肿瘤表面溃烂、出血、局部有结痂及坏死(图1A)。肿瘤重8.96 g，占身体总体重的 5.03%。切面光滑灰白色。肿物呈扁平圆形(图1C)。四肢脚掌溃烂出血，触地有痛感(图1B)。剖检心、肺、肝、肾、脾等脏器未见明显异常，未见肿瘤转移。

A.肿瘤大体外观及位置；B.脚掌溃烂出血；C.瘤体剥离形体A.The general appearance and location of the tumor; B.The sole of the foot is festered and bleeding; C.Tumor exfoliation

2.2 组织形态结构变化

HE染色结果显示，该瑶山树鼩自发性肿瘤组织由包裹有结缔组织的结节构成，肿瘤位于真皮层，表皮局部可见溃疡形成。肿物组织血管丰富，主要由梭型细胞构成。瘤细胞呈束状、席纹状或车辐状排列，异型性明显，核分裂像多见，胞浆中伴有轻度脂肪变性和散在的小炎性灶，组织局灶伴有钙化(图2)。其余各器官组织学形态结构未见明显异常，未见肿瘤发生转移(图3)。

2.3 肿瘤组织免疫组化结果

肿瘤免疫组化显示，肿瘤细胞Vimentin 呈弥漫强阳性表达，ki-67瘤细胞少量呈阳性表达，阳性率约1%～2%，血管周围CD31和CD34呈阳性，CD68及S-100均为阴性(图4)。各项标记分子免疫组化结果与人的隆突性皮肤纤维肉瘤(dermatofibrosarcoma protuberant，DSFP)非常相似。综合病理剖检及病理切片等诊断本例原发性瑶山树鼩肿瘤为隆突性皮肤纤维肉瘤。

2.4 发病树鼩血常规及生化检测结果

所测发病树鼩血液生理指标与李进涛等[12]和白继丽等[13]所测定的树鼩血液生理指标比较分析，中性粒细胞测得绝对值为0.11(参考值0.59～3.30×109/L)、淋巴细胞绝对值为0.03(参考值0.36～2.98×109/L)、单核细胞绝对值为0.15(参考值0.18～0.68×109/L)、血红蛋白为11 (参考值123.46～176.78 g/L)、血小板计数为54(参考值311.88～549.80×109/L)以及血小板比容为0.042(参考值0.108～0.282 %)，较参考值均明显偏低，几种常见的重要免疫细胞明显下降，提示本树鼩免疫功能低下，抗感染或抗肿瘤能力差。

生化检测结果显示，发病瑶山树鼩总蛋白、白蛋白、肌酐较参考值均偏低。而γ-谷氨酰基转移酶、丙氨酸氨基转移酶及内生肌酐清除率均明显升高。提示该发病树鼩肝肾功能均有明显异常。

A.表皮局部可见溃疡形成(×10)；B.肿瘤主要由梭型细胞构成(×100)；C.肿物组织血管丰富(×200)；D.肿瘤细胞呈车辐状排列，异型性明显(×400)

A.脑；B.心；C.肝；E.脾；F.肺；G.肾；H.小肠；I.胃；K.睾丸

3 讨论

隆突性皮肤纤维肉瘤(DFSP)是真皮和皮下间叶性肿瘤，约占软组织肉瘤的6%[14]。DFSP 的发病机制尚不十分清楚，遗传、手术瘢痕、创伤及疫苗接种等均可引起DFSP的发生[15]。90%的DFSP病例中出现t(17;22) (q22;q13)染色体易位，导致17号染色体上胶原基因的Ⅰ型α链和22号染色体上的血小板源性生长因子β相互融合[16]，产生COL1 A1/PDGFB融合基因，从而导致肿瘤的发生[2,17]。

根据组织学形态DFSP可分为经典型、黏液型、颗粒细胞型、色素型、萎缩型、纤维肉瘤型、栅栏状、硬化型等10多种亚型[16,18]。其中以经典型最为多见，纤维肉瘤型预后最差，有较高的转移趋势和复发性[19]。经典型为梭形瘤细胞，呈车辐状结构，瘤细胞常浸润皮下脂肪组织形成蜂窝状结构[20]。免疫组化多表现为CD34阳性，部分可表现为CD4或Vimentim阳性[21]。对HMB-45、EMA、S-100、CK、Des等标记阴性。这些特征与本研究发病树鼩肿瘤免疫组化结果相吻合。说明树鼩自发性DFSP与人DSFP相似度非常高，而相关检测标记抗体可以通用，为进一步建立树鼩的隆突性皮肤纤维肉瘤模型和探索该肿瘤的发病机制提供科学依据。

A.Vimentin肿瘤细胞强阳性表达(×100)；B.Ki-67 低指数阳性(×100)；C.CD31肿瘤血管周围阳性表达(×100)) ；D.CD34肿瘤血管周围阳性表达(×100)；E、F.CD68、S-100肿瘤细胞阴性(×100)

血常规白细胞各有其特定的免疫及生理机能，在正常时常规的白细胞之间有一定的比例。但在病理情况下，免疫细胞总数或种类变化反映机体机能的状态。本研究测定发病树鼩中性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞较参考值均明显偏低。提示本树鼩免疫功能低下，容易造成继发感染，同时推测机体大量调动免疫细胞抵抗肿瘤，使该几类细胞处于大量耗竭晚期。这可能与本树鼩脚底溃烂、肿瘤体积巨大、生长快速的临床表型及处于老龄等原因有密切联系。

血红蛋白是红细胞的内含物，占红细胞重量的32%～36%，血红蛋白测定值低可能是由于营养水平、造血物质缺乏或患有贫血性疾病等引起。本例发病瑶山树鼩总蛋白、白蛋白、肌酐均较参考值偏低。由此可提示该树鼩由于肿瘤的快速生长，导致蛋白等营养物质大量耗竭。同时伴随血小板计数低下、肿瘤表面及脚底出血、凝血不良等系列老年并发症。整体情况显示，老年树鼩发生隆突性皮肤纤维肉瘤，预后不良，是一种极其严重甚至是致死性的疾病。

4 结论

肿瘤位于真皮，主要由梭性细胞构成。瘤细胞呈束状、车辐状或席纹状排列，异型性明显，核分裂像多见，局灶伴有钙化。免疫组化结果为Vimentin(瘤细胞+)、ki-67(瘤细胞1%～2% +)、CD31(血管+)、CD34(血管+)，诊断为隆突性皮肤纤维肉瘤。