米尔贝肟与吡喹酮复合片剂对猫自然感染胃肠道蠕虫的疗效观察

季正剑，张佶，李建梅，候照峰，叶状，彭月梅，刘丹丹，许金俊，陶建平*

(1. 扬州大学兽医学院/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009；2. 高邮市农业农村局，江苏 高邮 225600；3. 中国农业科学院家禽科学研究所，江苏 扬州 225125 )

猫因食性复杂和活动范围广泛而易感各种寄生虫，其中胃肠道蠕虫感染较为广泛，据报道猫常见感染蠕虫的种类包括吸虫(华枝睾吸虫、棘口吸虫、横川氏后殖吸虫)、绦虫(泡状带绦虫、犬复孔绦虫、曼氏迭宫绦虫)、线虫(心丝虫、钩虫、弓首蛔虫)等[1-2]，这些寄生虫感染会引起程度不一的临床症状，从亚临床感染或轻度胃肠道疾病到严重腹泻、厌食、贫血、发育障碍甚至死亡，特别是在高强度感染的幼龄动物身上[3]。此外，一些猫科胃肠道寄生虫具有人畜共患的潜在危险，可能引起公众健康问题，如猫弓蛔虫、华支睾吸虫、贾第鞭毛虫、隐孢子虫等[4]。因此，应采取适当的措施来防治猫寄生虫病， 包括使用安全有效的抗寄生虫药物，如近年来备受关注的具有广谱抗线虫、绦虫、吸虫等特性的药物米尔贝肟(milbemycin oxime)与吡喹酮(praziquantel)复合制剂[5]。

米尔贝肟属于大环内酯类抗体内外寄生虫药物，是米尔贝霉素A3与A4的肟化衍生物，其作用机制是强化体内外寄生虫的主要神经传导物质γ-氨基丁酸的结合力，使氯离子持续进入细胞膜内，使膜电位处于持续超极化状态而使虫体神经传导中断进而麻痹、死亡。据报道米尔贝肟能防治犬猫体内外寄生虫，如心丝虫、钩虫、鞭虫、蛔虫以及毛囊虫、疥癣、虱、跳蚤等，但对吸虫与绦虫无效[6]。吡喹酮是一种酰化异喹啉吡嗪类化合物，也是一种广谱抗绦虫和吸虫药物，其作用机制是直接作用于寄生虫被膜，并破坏寄生虫结构，同时影响寄生虫碳水化合物代谢，破坏寄生虫体内钙离子稳态和膜对钙离子的通透性，从而导致寄生虫肌肉组织的强直收缩和随后的表皮解体[7]。米尔贝肟与吡喹酮联合应用不仅扩大了驱虫谱，而且提高了驱虫效率，安全可靠，其口服咀嚼片配方已商业化。本研究旨在评估含有米尔贝肟(2 mg/kg)和吡喹酮(5 mg/kg)的商业口服制剂(Milbermax®)对自然感染胃肠道蠕虫的猫的治疗效果，为猫寄生虫病的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物

家猫150只，分别购自扬州市、泰州市、镇江市和无锡市的城郊或农村，年龄为1.5月龄至成年。猫运至实验室后分笼饲养7～10 d，使其适应环境和驯服，并观察猫的精神状态与饮欲食欲等。同时逐一采集猫刚排出的新鲜粪便，分别用饱和盐水漂浮法与水洗沉淀法检查蠕虫虫卵。挑选猫弓首蛔虫(Toxocaracati)、毛细线虫(Capillariaspp.)、钩虫(Hookworm)、华支睾吸虫(Clonorchissinensis)、棘口吸虫(Echinostomatidae)、心形咽口吸虫(Haryngostomumcordatum)、曼氏迭宫绦虫(Spirometramansoni)、犬复孔绦虫(Dipylidiumcaninum)等虫卵中之一呈阳性，且精神状态与食欲良好的猫用于试验。共105只猫。

1.1.2 试验药物

Milbermax®(Novartis Sante Animale)。规格：① 每片含米尔贝肟16 mg和吡喹酮40 mg；② 每片含米尔贝肟4 mg和吡喹酮10 mg。

吡喹酮片剂，由哈尔滨宏达动物药品厂生产。规格0.2 g/片。

1.2 方法

1.2.1 试验设计

给药前1 d 将粪便虫卵检查呈阳性的猫逐只称重、编号，挑选体况相近的猫随机分组如下。Ⅰ组：Milbermax®组(米尔贝肟2 mg/kg+吡喹酮5 mg/kg)，Ⅱ组：吡喹酮单方组(吡喹酮5 mg/kg)，Ⅲ组：阳性对照组，每组35只猫(表1)。Milbermax®组参照说明书中的给药方案与给药途径给药。吡喹酮单方组按猫体重计算用药量，一次口服。阳性对照组一次口服无活性成分的片剂(外观与复方米尔贝肟相近)。给药后每天观察试验组猫的精神状态、饮欲食欲及排虫情况，收集排出的虫体或节片进行虫种鉴定，以了解排虫种类和排虫高峰。同时在给药前1 d和给药后第7天与第14天，收集感染毛细线虫的猫新鲜粪便，用麦克马斯特氏法(McMaster method)计算每克粪虫卵数(eggs per gram，EPG)[8]。给药后第15天结束试验，对所有试验猫进行安乐死，随后按寄生虫学完全剖检法，收集各只猫消化道、肝脏、气管与肺脏、膀胱内的虫体，进行虫体种类鉴定[8-11]，并以虫种类别分别计数。

表1 感染不同种类蠕虫的猫数量 只

1.2.2 检测项目

驱虫率与驱净率：根据在猫体内检获的各种蠕虫的虫体数，按下列公式计算各试验组各种蠕虫的驱虫率与驱净率[12]。

驱虫率=[(对照组平均残留虫体数-试验组平均残留虫体数)/对照组平均残留虫体数]×100%。

驱净率=(驱净虫体的动物数/全部试验动物数)×100%。

虫卵减少率与虫卵转阴率：根据给药前及给药后不同时间点猫粪便中的毛细线虫卵的变化情况，按下列公式计算各试验组毛细线虫卵的减少率与虫卵转阴率[12]。

虫卵减少率=[(驱虫前EPG-驱虫后EPG)/驱虫前EPG]×100%。

虫卵转阴率=(虫卵转阴猫数/驱虫猫数)×100%。

应用SPSS软件对各试验组给药前后EPG平均数及组间不同时期虫卵减少率进行描述性统计，并用Duncan氏新复极差法对组间平均值进行多重比较(P<0.05)。

1.2.3 效果评价

按粪便虫卵数变化，每只试验动物的临床药效试验结果按以下标准评价[12]：

治愈：粪便中蠕虫虫卵减少率≥90%，试验动物的体征恢复正常。

有效：粪便中蠕虫虫卵减少率≥60%，试验动物的体征好转但未完全恢复正常。

无效：粪便中蠕虫虫卵减少率<60%，试验动物病情无明显缓解，仍有腹泻、呕吐等临床表现。

按驱虫率与驱净率评价：高效驱虫药，其一次给药后的驱净率在60%以上[8]。

2 结果与分析

2.1 临床观察

在整个试验期间，所有试验猫的精神状态、饮欲食欲、排便情况均正常。猫给药后最早在给药后1 h有虫体排出，最迟在给药后第6天排出虫体，排出虫体的高峰期在给药后48～72 h。用肉眼在粪便中能检视到的虫体主要是猫弓首蛔虫和绦虫。

2.2 驱虫效率

2.2.1 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对华支睾吸虫的驱虫效果

粪检华支睾吸虫卵呈阳性的47只猫，给药15 d后对华支睾吸虫的剖检结果见表2。阳性对照组猫感染华支睾吸虫最多的达1 212条，最少为13条，每只猫平均282.3条。Milbermax®组体内残留活虫数每只猫平均7.6条，吡喹酮单方组为19.3条。Milbermax®组驱虫率与驱净率均高于吡喹酮单方组，分别为97.3%和53.3%，而吡喹酮单方组为93.2%和31.3%。

表2 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对华支睾吸虫的驱虫效率

2.2.2 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对棘口吸虫与心形咽口吸虫的驱虫效果

粪检棘口吸虫或心形咽口吸虫卵呈阳性的54只猫，给药15 d后对棘口吸虫或心形咽口吸虫的剖检结果见表3。阳性对照组中感染棘口吸虫的猫有8只，平均每只猫感染13条，其中最少为1条，最多达76条；感染心形咽口吸虫的猫有13只，平均每只猫感染98.9条，其中最少为4条，最多达536条；其中3只猫同时感染两种吸虫。在Milbermax®组的1只猫肠道内检获4条心形咽口吸虫，其对棘口吸虫的驱虫率和驱净率均达100%，对心形咽口吸虫的驱虫率达99.7%，驱净率为92.3%，而吡喹酮单方组对棘口吸虫与心形咽口吸虫的驱虫率和驱净率均达100%。

表3 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对棘口与心形咽口吸虫的驱虫效率

2.2.3 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对曼氏迭宫绦虫的驱虫效果

粪检曼氏迭宫绦虫卵呈阳性的36只猫，给药15 d后对曼氏迭宫绦虫的剖检结果见表4。阳性对照组猫感染曼氏迭宫绦虫最多的为13条，最少1条，平均5.3条。Milbermax®组剖检时体内残留活虫平均数为0.8条，吡喹酮单方组0.9条，二者驱虫率相近，但就驱净率而言Milbermax®组(75.0%)高于吡喹酮单方组(50.0%)。

表4 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对曼氏迭宫绦虫的驱虫效率

2.2.4 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对犬复孔绦虫的驱虫效果

粪检犬复孔绦虫卵呈阳性的9只猫，给药15 d后对犬复孔绦虫的剖检结果见表5。阳性对照组猫感染犬复孔绦虫最多的25条(均未发育至有成熟节片)，最少2条，平均10.7条。Milbermax®组和吡喹酮单方组对犬复孔绦虫的驱虫率与驱净率均达100.0%。

表5 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对犬复孔绦虫的驱虫效率

2.2.5 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对猫弓首蛔虫的驱虫效果

粪检猫弓首蛔虫卵呈阳性的20只猫，给药15 d后对猫弓首蛔虫的剖检结果见表6。阳性对照组猫感染猫弓首蛔虫最多的20条，最少2条，平均8.2条。Milbermax®组对猫弓首蛔虫的驱虫率与驱净率均达100.0%。

表6 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对猫弓首蛔虫的驱虫效率

2.2.6 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对钩虫的驱虫效果

粪检钩虫卵呈阳性的6只猫，给药15 d后对钩虫的剖检结果见表7。阳性对照组猫感染钩虫最多的19条，最少5条，平均11.7条。Milbermax®组对钩虫的驱虫率与驱净率均为100.0%。

表7 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对钩虫的驱虫效率

2.2.7 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对毛细线虫的驱虫效果

粪检毛细线虫卵呈阳性的18只猫，给药前和给药后第7天与第15天分别采集新鲜粪便，以麦克马斯特氏法计数虫卵，计算各猫给药后不同时间的毛细线虫EPG和虫卵减少率，统计平均值，结果见表8。在给药后第7天，Milbermax®组虫卵减少率为90.9%，虫卵转阴为率80.0%。在给药后第14天，Milbermax®组的虫卵减少率为100.0%，虫卵转阴率为90.0%。吡喹酮单方组对毛细线虫无效。

用Duncan氏新复极差法，对Milbermax®组、吡喹酮单方组以及阳性对照组给药前及给药后不同时期EPG平均值间进行多重比较。结果显示Milbermax®组在给药后第7天、第14天的虫卵数显著低于吡喹酮单方组和阳性对照组(P<0.05)，但给药后第7天与第14天Milbermax®组的虫卵平均数间无显著差异(P>0.05)(表8)。

表8 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对毛细线虫的驱虫效率

3 讨论

3.1 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对华支睾吸虫的驱虫效果

家猫是食肉动物，喜食淡水鱼、虾。而鱼、虾是华支睾吸虫、猫后睾吸虫、棘口吸虫等的中间宿主[13]。在扬州、泰州、镇江和无锡的城郊和农村地区，湖河渠沟密布，水域面积大，水产养殖发达，鱼、虾十分常见，猫生吃到鱼、虾的频率极高。此外，用于本试验研究的猫均非城市宠物猫，一般不用任何药物进行驱虫。因此，在用粪检法筛选阳性感染猫时吸虫的感染率较高，尤其是后睾科吸虫。在对阳性对照组的猫剖检时也发现华支睾吸虫的感染强度最高，其中有两只猫分别感染华支睾吸虫1 131条和1 212条，感染心形咽口吸虫也达536条。华支睾吸虫和猫后睾吸虫在分类上属后睾科，均寄生于猫的肝胆管内，两者的虫卵在形态与结构上很相似，不易区分。但华支睾吸虫的睾丸呈分枝状，猫后睾吸虫的睾丸呈裂状分叶，两者很容易鉴别[14]。在本研究中，剖检时从猫肝脏内获得的虫体经种类鉴别发现均为华支睾吸虫，故所有试验组均按华支睾吸虫计算驱虫效果。本研究中米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对华支睾吸虫的驱虫率达97.3%，但驱净率为53.3%，驱净率低的原因可能：一是猫感染华支睾吸虫的强度较大，因为给药后15 d剖检时残留于猫胆管内的虫体中有部分虫体虽然外观完整，但虫体颜色已发黄，表明已发生死亡；二是剂量不够或需重复用药。

3.2 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对棘口吸虫和咽口吸虫的驱虫效果

在我国报道寄生于猫的棘口科吸虫有：枪头棘隙吸虫(Echinochasmusbeleocephalus)、日本棘隙吸虫(E.japonicus)、藐小棘隙吸虫(E.liliputanus)和叶形棘隙吸虫(E.perfoliatus)等，该科虫体的鉴别要点是虫体前端口吸盘周围有头冠(或头领)，其上有1～2行头棘。虫卵呈卵圆形，淡黄色或金黄色，有卵盖，内含一个卵细胞和多个卵黄颗粒，但在棘口科的各种类间难以鉴别[15]。因此，在本试验中按棘口吸虫计算驱虫效果。心形咽口吸虫分类上隶属双穴科(Diplostomatidae)、咽口属(Pharyngostomum)，是一种体长仅有1.4～2.1 mm的小型吸虫，其虫卵与棘口吸虫卵相比卵黄颗粒少而间隙大，但两者的大小和形态相近，且在猫体内可发生混合感染。因此，在本研究中按吸虫卵形态进行分组，然后按阳性组剖检时检获的两种吸虫数和猫感染数分别统计驱虫效果。本研究中米尔贝肟与吡喹酮联合应用对棘口吸虫的驱虫率与驱净率均为100%，对心形咽口吸虫的驱虫率与驱净率均>90.0%，表明米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对棘口吸虫和咽口吸虫具有良好的驱虫效果。

3.3 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对毛细线虫的驱虫效果

寄生于猫的毛尾目(Trichurata)线虫主要有毛尾科(Trichuridae)的猫毛尾线虫(Trichurisfelis)和锯齿毛尾线虫(T.serratas)，毛细科(Capillariidae)的肺毛细线虫(Capillariaaerophila)和猫毛细线虫(C.feliscati)[8-11]，前两者寄生于猫的大肠(主要是盲肠)，后两者分别寄生于猫的气管与支气管以及膀胱内。毛细线虫和毛尾线虫的虫卵均呈棕黄色，腰鼓形，两端有卵塞，易从粪便中鉴别。毛尾线虫外观呈鞭状，附着在肠黏膜上，易识别。但毛细线虫细长呈丝状，不易分离鉴别。为了判定粪检结果的正确性，我们在试验正式实施前对粪检虫卵呈阳性的数只猫进行了寄生虫学剖检，结果在毛细线虫或毛尾线虫卵呈阳性的猫体内均未能在其肠道、肺与膀胱内找到毛尾线虫或毛细线虫。故在随后的试验中用虫卵减少率与转阴率来评价药物对毛尾目线虫的驱虫效率。而且在剖检阳性对照组的猫时，也没有发现一例感染毛尾线虫。因此，我们将该类虫卵归属于毛细线虫。本研究中米尔贝肟与吡喹酮复合制剂给药14 d后对毛细线虫的虫卵减少率为100.0%，虫卵转阴率为90.0%，表明米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对毛细线虫亦具有良好的驱虫效果。

3.4 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对其他胃肠道蠕虫的驱虫效果

据报道米尔贝肟与吡喹酮联合应用可以有效防治猫(犬)心丝虫、猫弓首蛔虫、绦虫、结膜吸吮线虫等[16-18]。Cvejic等[5]的研究表明米尔贝肟与吡喹酮分别以2 mg/kg和5 mg/kg的剂量给药对多房棘球绦虫100%有效，本研究中米尔贝肟(2 mg/kg)与吡喹酮(5 mg/kg)复合制剂对犬复孔绦虫100%有效，但对曼氏迭宫绦虫的驱虫率和驱净率分别为84.9%和75.0%，原因可能与不同种属绦虫对药物的敏感性有差异相关。Schenker等[19]研究发现米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对猫感染成熟猫弓首蛔虫和其四期幼虫有很高的疗效，本研究结论与之相符。本研究中米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对钩虫的驱虫效果达100%，高于文献报道的米尔贝肟单独使用对三期犬钩口线虫幼虫的驱虫效果[20]。

另外，本研究首次报道了米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对棘口吸虫、心型咽口吸虫、华支睾吸虫及毛细线虫的驱虫效果，结果显示米尔贝肟与吡喹酮联合应用对棘口吸虫、心型咽口吸虫、华支睾吸虫及毛细线虫有良好的驱虫效果，且Milbermax®组与吡喹酮单方组相比，驱虫效率更高，驱虫普更广。

3.5 米尔贝肟与吡喹酮复合制剂对试验动物的安全性

米尔贝肟毒性低，杀虫活性高，其口服半数致死量在500 mg/kg以上，是临床推荐用量的2 000倍以上[21-22]。在本研究中Milbemax®组，在整个试验期间猫均未出现不良反应，这一结果与文献报道相一致[23-24]，表明含有米尔贝肟和吡喹酮的口服咀嚼片(Milbemax®)为控制猫胃肠道蠕虫病提供了一种新的和安全有效的方法。

4 结论

米尔贝肟(2 mg/kg)与吡喹酮(5 mg/kg)复合制剂对猫感染的猫弓首蛔虫、毛细线虫、钩虫、华支睾吸虫、棘口吸虫、心形咽口吸虫、曼氏迭宫绦虫和犬复孔绦虫等均有良好的驱虫效果，是一种安全有效的猫类寄生虫广谱驱虫药物。