基于水产品中喹诺酮类和磺胺类兽药残留检测方法与思路分析

李新

摘要：磺胺类药物与喹诺酮类药物是一种人工合成的抗菌药物，目前主要用于集约化养殖当中，如果使用量过多或者不遵守休药期规定会导致药物残留在水产品当中，危害人们健康。近年来国际组织对牲畜和水产品中的兽药残留最大允许残留限量作出明确规定，同时检测技术也在不断进步，以下对相关内容进行分析。

关键词：水产品;喹诺酮类;磺胺类;兽药残留;检测方法

一、当前水产品兽药残留常用检测方法

超高效液相串联质谱法不需要对样品衍生化处理，能够同时对多个目标物测定，体现出灵活性高、选择性广的优势，目前这一技术已经在食品安全分析中广泛利用。QuEChERS是农产品检测的快速样品前处理技术，具有操作简单、检测速度快、价格低廉、安全性高的优势。问世以来，在农药残留检测中得到了普遍利用。目前已逐步用于兽药残留检测当中，能够分析肉制品中磺胺类兽药的残留，有相关研究人员对红霉素、泰勒菌素、北里霉素、硝沙霉素以及恩诺沙星、丹诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、林可霉素恶喹酸在内的10几种残留物检测，方法为在线固相萃取液相色谱-串联质谱法，我国相关人员借助HPLC-MS/MS内标法对水产品当中18种磺胺类药物的残留含量进行分析，不过这两种检测手段较为繁琐，并且检测成本偏高，以下就喹诺酮类和磺胺类兽药残留检测进行深入分析。

二、喹诺酮类和磺胺类兽药残留检测技术

（一）材料与仪器准备

在分析过程中主要利用的仪器包括超高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪、天平、旋转蒸发仪、离心机、氮吹浓缩仪，使用材料包括超纯水、乙腈、甲醇、甲酸、C18填料;醋酸为优级纯、无水硫酸钠为分析纯。标准物质如下：吡哌酸、西诺沙星、萘啶酸、诺氟沙星、氧氟沙星、依诺沙星、单诺沙星、环丙沙星、洛美沙星、氟甲喹、恩诺沙星、沙拉沙星、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶钠、磺胺间甲氧嘧啶钠、磺胺氯哒嗪、磺胺多辛、磺胺甲恶唑、磺胺异恶唑、磺胺地索辛。标准溶液和内标溶液配置方法如下：乙腈溶剂配制质量浓度范围0.2mg/mL-1mg/mL，将其作为标准储备溶液，并放置在-18℃或者4℃的避光条件下，保存为期三个月。再配置成10 mg/mL的标准中间液，保存时间为30天。之后借助初始流动相对中间液稀释，之后稀释成为满足标准工作液的要求，保存7天。

（二）样品前期处理

需要选取具有代表性的脊背部鱼肉，先进行破碎处理，之后再把虾类、贝类中可食部分破碎，将脊背部鱼肉、虾类、贝类共同放置在-18℃环境下保存，把破碎鱼肉样品（2g）放在规格为50 mL的离心管内部，技术人员加入10μg内标溶液，后续加入10 mL 1%的醋酸、乙腈摇匀，之后使用离心机转数设定为5000r/min，持续旋转5 min，盛出上部清液，转移到另一离心管内，该步骤重复两次，然后将提取的溶液合并。将提取的液体放在含有Na2SO4的离心管当中，溶液重量为5g，完成离心后将上部清液取出，在原底烧瓶当中处于40℃、60r/min的减压条件下蒸发，发之后加入甲醇5mL，再次转移到装满C18填料的离心管中，之后使用乙醇8mL洗涤圆底烧瓶，完成以上操作对上部清液收集，使用氮气吹干，然后加入2mL流动相，经0.22μm滤膜过滤。

（三）色谱-质谱条件

选取WatersBEHC181.7μm，2.1mm×100mm为色谱柱，流动相A为0.1%甲酸水，B为乙腈，梯度洗脱程序如表一：

采用正离子模式扫描，并且利用多反应监测采集方法，其中雾化气压力为413.8kPa、辅助气压力为413.8kPa、气帘气压力为206.9kPa、离子源温度为551℃、电喷雾电压（IS）：5400V，质谱参数见表二：

（四）优化提取剂

在水产品中兽药多残留同时测定过程中，关键在于对提取方式合理选择，提取溶剂主要包括有甲醇、醋酸乙酯、乙腈。研究发现醋酸乙酯、甲醇溶液提取过程中不易去除油脂等杂质，并且对蛋白的沉积效果不明显。乙腈可减少从组织中提取出的脂肪含量，并且具有蛋白沉积效果，所以本次研究选择乙腈作为提取溶剂，分别为乙腈、1%醋酸、5%醋酸乙腈，之后优化提取剂的酸度。

（五）优化质谱和色谱条件

质谱条件中的去阻电压和碰撞能量大小对离子分度影响明显，并且与方法灵敏度关系密切。本次实验使用的已经配制浓度为25 ng/mL标准品。

在液相检测过程中，甲醇和乙腈为流动相。在利用以氢作为流动相时容易定量。由于甲酸可以起到提升离子化效果，检测方法更加灵活，所以在试验的有机相中加入0.1%的甲酸。色谱图如下：

结束语：

综上所述，本次研究分析了石斑鱼、鲤鱼、鲢鱼等样本，利用1%醋酸、乙腈提取，前处理方法选择QuEChERS，流动相选择水、乙腈（都含有0.1%甲酸），建立了UPLC-MS/MS，形成了测定水产品中兽药残留的方法。最终实验结果如下：回收率为69%-124%，相对标准偏差为1%-19%，检测周期短，不需要理由特殊实验装置，并且实验成本低，有利于大批量水产品獸药残留检测研究。

参考文献：

[1]金钥，孙延斌，崔进， 等.水产品中喹诺酮类和磺胺类兽药残留检测方法的建立[J].食品研究与开发，2016，37（19）：122-127.

[2]孟祥龙，夏梦，张云青， 等.气相色谱串联质谱法检测水产品中有机氯和 菊酯农药残留[J].食品研究与开发，2019，40（16）：153-158.

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