犬猫脓皮病调查及毛太好抗细菌香波的体内外效果评价

柳项，雷镒妃，肖雅夫，胡长敏

（1.肽泽（武汉）生物科技有限公司，武汉 430075；2.华中农业大学，武汉 430070）

脓皮病又称细菌性毛囊炎，由化脓性细菌感染犬猫皮肤后引发，是犬猫常见皮肤病之一［1，2］。据调查显示，猫皮肤病占猫类疾病的10.1%，其中细菌性皮肤病占2.72%［3］；犬皮肤病占犬类疾病的29.26%，其中脓皮病占到了28.33%［4］。研究表明，伪中间型葡萄球菌是犬脓皮病的主要致病菌［5］，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌等也可造成犬脓皮病的发生，且单一菌种感染较少见，混合性感染多见［6］。猫脓皮病多继发于真菌性感染引起的皮肤病，脓皮病致病菌多为芽孢杆菌。伪中间型葡萄球菌（Staphylococcus pseudintermedius）是一种革兰氏阳性菌，具有兼性厌氧、凝固酶阳性、β溶血等特征［7］。当动物免疫力低下，或因温度、湿度、pH、机械损伤等因素打破表皮常在菌群平衡后，皮肤受损导致表皮结构改变，黏膜处的伪中间型葡萄球菌就会通过犬舔舐转移到患处，渗出的血清及表皮脱落物成了这些细菌良好的培养基，细菌即在患处大量繁殖，常引起脓皮病、伤口感染等。

毛太好抗细菌香波是一款专为脓皮病动物研发的产品，有效成分主要有两种：首先是细胞穿膜肽（Cell penetrating peptides，CPPs），其最早于人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）中的反式转录激活子（Transactivator，TAT）中发现，这段小分子短肽可以被周围细胞所吸收，跨膜进入细胞内，因而被称为细胞穿膜肽［8］。其在进入细胞后能够被正常分解，有较好组织相容性，且细胞毒性小，已成为药物靶向治疗的理想载体。其次是粉防己，它是一种常用的传统中草药，主要有效成分是来自干燥根的粉防已碱（Tetrandrine，TET）、防己诺林碱等，二者均属于双苄基异喹啉类生物碱，其中TET活性最强，具有抗病原微生物、抗肿瘤、抗炎等作用。有研究结果表明粉防己提取物可通过影响acrR和maeR基因突变来逆转大肠杆菌AcrAB-TolC外排泵的多重耐药性［9］。

脓皮病是犬、猫的重要疾病，患病动物皮损状态下的清洁需求难以得到保障，而治疗脓皮病导致的抗生素滥用则可能导致超级耐药菌存在，对动物和人类的生命健康造成威胁。本研究对武汉地区犬脓皮病发病情况进行了调查，并对毛太好抗细菌香波进行了体内外效果评价，以期为推动宠物功能性洗护产品的推广与应用及高效防控犬猫脓皮病奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

试验病例来源于武汉地区10家采样点。10家店中包括宠物店5家，猫舍4家，猫咖1家，共15个病例。15个病例中犬猫比2∶13，犬中比熊犬1例，古典牧羊犬1例；猫中英国短毛猫6例，布偶猫5例、俄罗斯蓝猫1例，曼基康猫1例。选用毛太好抗细菌香波原液、市场同类型香波2种（样品1、样品2）进行药敏试验，以生理盐水（与无菌水进行1∶10稀释）作对照。

1.2 方法

1.2.1 采样皮肤刮片：在患病皮肤与健康皮肤交界处反复刮擦至轻微渗血后，将刮下的组织碎屑用无菌胶布粘取后固定在载玻片上。皮肤粘片：直接用无菌胶布粘取皮肤碎屑、皮屑、渗出液体等病料，之后固定在载玻片上。毛囊采样：直接将毛发连根拔起，保留毛根部分，用胶布粘取后固定在无菌载玻片上。

1.2.2 病原菌接种用移液器吸取EP管中预处理的菌液200µL转移至TSA培养皿中，接菌完毕后倒置平板，在37℃恒温箱中过夜培养。用接种环粘取单个菌落后三区划线接种至另一板TSA培养皿中，倒置后继续放37℃恒温箱中培养24 h。

1.2.3 镜检用乙醇消毒载玻片，接种环挑取少量细菌用画圈方式于玻片中央均匀的涂布成适当大小的薄层，火焰快速固定后进行革兰氏染色，在显微镜下观察细菌形态并做好记录。

1.2.4 药敏实验首先对超净台紫外消毒。分别吸取4种处理液置于平板；将滤纸剪成直径10 mm的小滤纸片，并分成4份；将4组滤纸片分别放入4个平板中浸湿备用。接种环灭菌后将培养皿上的菌液在平板上涂布均匀，涂好的平板做好标记倒置。所有样品重复上述步骤，同时设置空白对照。接种之后，每天观察记录细菌生长情况。

1.2.5 抗细菌香波的体内外效果评价方法对患病动物精神状态、病灶清洁度与严重度、主要临床表现等情况做观察记录。在初次采样后，将患病动物用抗细菌香波原液涂抹全身，按摩皮肤患处5~10 min后用温清水冲洗干净，每3 d使用1次，连续使用3次。完毕后再次采样，采样部位同初次采样方法、部位一致，样品带回实验室做细菌培养与鉴定。

2 结果与分析

2.1 抗细菌香波的体外效果评价

2.1.1 分离菌株的菌落形态与镜检结果金黄色葡萄球菌菌落为直径1~2 mm的圆形或类圆形，呈单个或成串排列，菌落边缘光滑湿润，呈黄色或黄白色（图1a）；革兰氏染色镜检观察均为阳性球菌，着色不深，呈单个、成对或短链状排列（图2a）。大肠杆菌为直径不到1 mm的圆形菌落，单个散在，菌落边缘光滑湿润，呈白色（图1b），革兰氏染色镜检观察为阴性杆菌，着色良好，多呈单个排列（图2b）。枯草芽孢杆菌菌落直径较大，为3~5 mm，菌落表面似有一层凹凸不平膜，菌落边缘光滑不平整，周围渗出大量乳白色黏液（图1c），革兰氏染色镜检观察为阳性短杆菌，着色良好，呈单个或成对排列（图2c）。

图1 TSA平板37℃培养24 h的菌落形态

图2 菌落革兰氏染色镜检结果

2.1.2 药敏试验结果由表1可见，毛太好抗细菌香波、样品1、样品2药敏纸片周围均出现抑菌圈，生理盐水周围则没有出现抑菌圈。

表1 毛太好抗细菌香波对皮肤癣菌的抑菌效果

由图3可见，毛太好抗细菌香波对伪中间型葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、临床菌株C55的体外抑菌效果显著优于对照组，样品1和样品2对这3种菌的抑菌效果差异均不显著。与样品1、样品2相比，毛太好抗细菌香波对金黄色葡萄球菌的抑菌效果差异不显著；而对伪中间型葡萄球菌、临床菌株C55的抑菌效果明显更强。因此，综合认为毛太好抗细菌香波具有较好的抑菌效果。

图3 毛太好抗细菌香波对3种菌抑菌效果

2.2 抗细菌香波的体内效果评价

2.2.1 香波使用前后情况对比表2所示为使用香波前后的脓皮病动物症状表现对比情况。可以看出，使用毛太好抗细菌香波后，患病动物病灶红肿、化脓症状都有明显好转，直观表现为红肿面积缩小甚至痊愈，脓性分泌物减少或消失（图4c）。脱毛症状也得到改善，表现为脱毛区域皮肤状态好转，肉眼可见长出新生毛发。此外，病灶瘙痒与清洁度也得到很大改善，具体表现为病灶表面分泌物减少、小动物抓挠患处的频率减少以及清洗后清洁度明显提高。

表2 脓皮病临床症状评分

图4 一例患脓皮病泰迪犬使用毛太好抗细菌香波前后对比

2.2.2 抗菌效果评价由表3可知，使用抗菌液香波前在病灶处共检测出17株细菌，而使用抗菌液香波治疗后仅发现5株。经鉴定发现这5株细菌分别为：金黄色葡萄球菌1株，枯草芽孢杆菌2株，蜡样芽孢杆菌2株。与治疗前相比，金黄色葡萄球菌株数减少5株，伪中间型葡萄球菌株数减少2株，枯草芽孢杆菌株数减少3株，蜡样芽孢杆菌株数减少1株，大肠杆菌株数减少1株（表4）。使用毛太好抗细菌香波后病灶处细菌数目明显变少，抑菌效果显著。

表3 使用香波前后病灶处细菌情况

3 小结与讨论

毛太好抗细菌香波的体内外效果评价结果表明，毛太好抗细菌香波对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌都有一定抗菌效果。治疗后病灶红肿、化脓、脱毛情况明显改善，瘙痒得到缓解，清洁度大大增加，说明毛太好在皮损情况下能做到温和不刺激、有效清洁和修复皮肤屏障；药敏试验结果也说明了其对伪中间型葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、临床菌株C55有明显抑菌效果，且毛太好抗细菌香波的抑菌效果相较于样品1与样品2更好，这对于临床犬猫脓皮病的治疗具有一定推广意义。