乙型肝炎病毒低病毒载量与血清标志物表达研究

宋 林 张锦伟 韩亚男

（大连市公共卫生临床中心（大连市第六人民医院），辽宁 大连 116031)

据不完全统计，全球约有4亿乙型肝炎病毒携带者，其中亚太地区为乙型肝炎高发地区[1]。目前我国约有80%的病毒性肝病患者属于乙型肝炎[2]。随着医疗技术的不断发展，基因诊断技术开始广泛应用于临床诊断中。尤其是磁性纳米颗粒应用于基因分离中会大幅度提高基因检测的准确性，实现超敏感检测[3-4]。本文探究乙型肝炎病毒低病毒载量（HBV-DNA定量检测）与血清标志物表达的关系，具体研究内容和结论如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年1月至2018年10月期间我院肝病科诊疗的乙型肝炎患者共180例为研究对象。其中男性95例，女性85例；年龄在21～68岁；慢性肝炎重度49例、中度81例、肝癌23例、肝硬化27例；低浓度血清标本110例，高浓度血清标本70例。患者均未接种相关疫苗，均符合最新修订的关于病毒性肝炎及肝病的诊断标准[5]。

1.2 方法 ①样本采集：患者均于清晨空腹抽血8 mL（肘静脉抽血），使用密封凝胶管采血并保存，静置一段时间，待血液完全凝固后再进行血清分离，以3 500 r/min的速度离心10 min。血清保存，注意保存条件[6]。②仪器与试剂：选择全自动电化学发光免疫分析仪（罗氏公司生产，型号E170），包括配套试剂、质控品以及定标液等。选择罗氏荧光定量PCR仪Light Cycler 480 Ⅱ，包括配套试剂。严格按照乙型肝炎病毒载量检测说明书进行操作。

1.3 观察指标 ①检测并记录不同浓度病毒载量下乙型肝炎e抗原浓度和乙型肝炎表面抗原浓度。②分析乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、HBV-DNA三者间的相关性。③不同乙型肝炎e抗原浓度下乙型肝炎病毒载量。④比较在不同血清模式下HBV阳性率以及HBV-DNA含量。

1.4 统计学方法 采用SPSS 200统计学软件对数据进行分析。计量资料采用（）表示，组间比较行t检验；计数资料采用[n（%）]表示，组间比较行χ2检验；以Pearson相关性分析进行相关性判断；P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同浓度下乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原浓度对比 高浓度下乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原浓度与低浓度下两种抗原浓度相比差异明显（P＜0.05）。见表1。

表1 不同浓度下乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原浓度对比（）

表1 不同浓度下乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原浓度对比（）

2.2 低浓度乙型肝炎病毒载量组乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、HBV-DNA三者间的相关性分析 低浓度乙型肝炎病毒载量组中，Pearson相关性分析显示，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原呈正相关关系（P＜0.05），乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原定量与HBV-DNA含量并无明显相关性（P＞0.05）。见表2。

表2 低浓度乙型肝炎病毒载量组乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、HBV-DNA三者间的相关性分析

2.3 不同乙型肝炎e抗原浓度下乙型肝炎病毒载量对比 乙型肝炎e抗原浓度介于0-1S/CO占比最多64.54%，浓度在100S/CO以上占比最少2.73%，对相关指标进行分析，发现乙型肝炎e抗原浓度与HBV-DNA含量存在相关性（P＜0.001）。见表3。

表3 不同乙型肝炎e抗原浓度下乙型肝炎病毒载量

2.4 血清标志物与乙型肝炎病毒载量定量检测结果对比 不同血清模式下乙型肝炎病毒载量定量检测结果存在显著差异（P＜0.05）。见表4。

表4 血清标志物与乙型肝炎病毒载量定量检测结果对比

3 讨 论

乙型肝炎病毒的主要诊断依据包括症状、体征、病史、生化指标（天门冬酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶）、分子生物学指标以及血清学标志物等。其中血清学标志物检测临床较为常见，其中包括乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎e抗体、乙型肝炎表面抗体以及乙型肝炎核心抗体5项主要指标，另外还包括乙型肝炎病毒X蛋白、HBVS2抗原以及HBV前S1抗原等[7-9]。但前5项主要指标是目前诊断乙型肝炎最重要、最常用的免疫学标志物。另外，HBV-DNA定量检测是检测乙型肝炎病毒是否存在或者复制的重要方法[10-12]。在一般情况下，HBV检验呈阳性或者乙型肝炎表面抗原呈阳性则表示乙型肝炎病毒存在，且多存在于慢性肝炎、急性肝炎或者无症状携带者[13-14]。乙型肝炎表面抗原是乙型肝炎病毒基因组mRNA表达产生的，乙型肝炎表面抗原浓度过高时则表示病毒正在复制[15-17]。本研究结果显示，在低浓度与高浓度载量标本中，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原2种标志物浓度差异有统计学意义（P＜0.05）。随着HBV-DNA含量的升高，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原浓度也会升高，说明高浓度情况下乙型肝炎病毒的表达能力较强[18-20]。低浓度载量下，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原浓度成正相关（rs=0.398，P＜0.001）；HBV-DNA定量检测与乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原定量检测不存在相关性。上述结果说明不同浓度下，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原浓度变化呈正相关，其浓度变化不会明显影响HBV-DNA定量检测结果，这一研究结果与多项研究结果相符[21-22]。分析其原因可能是因为限定的DNA浓度较低，随着DNA数值增加，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、HBVDNA三者间的相关性才会逐渐显现出来，对于低浓度标本，应侧重于联合检验[23-24]。乙型肝炎e抗原浓度介于0-1S/CO占比最多64.54%，浓度在100S/CO以上占比最少2.73%，不同浓度下HBV-DNA检测结果差异有统计学意义（P＜0.05）。尽管乙型肝炎e抗原为阴性，只能说明病毒处于持续的低拷贝状态，并不能表示体内无病毒拷贝，因此需要密切监测HBV-DNA含量的变化[25-27]。此外，在不同血清模式下（阳性）HBV-DNA含量存在显著差异，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。这一研究结果与王秀丽和姚鹏[29]的研究结果并不一致，可能因为样本量的差异较大，也可能因为检测过程中出现偏差，需进一步探讨。

综上所述，乙型肝炎病毒低病毒载量与血清标志物表达存在相关关系，联合检测可在乙型肝炎病毒感染早期进行诊断并及时治疗，另外在疗效观察、掌握病毒复制情况以及预后判断等方面都有重要作用。