难治性肺炎支原体肺炎患儿T细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES检测水平及其意义的研究

张松林 熊蕾蕾 余燕娟 靳秀红

郑州大学附属儿童医院河南省儿童医院郑州儿童医院呼吸内科 450000

肺炎支原体肺炎是小儿常见肺炎类型，近年来发病率明显上升，且患儿群体呈低龄化趋势，重症肺炎比例明显增多，治疗难度提高。一般认为病程较长、反复发作、病情较重、大环内脂类抗生素治疗效果不佳者为难治性肺炎支原体肺炎，治疗难度更大，通过分析其病情程度针对性制定干预措施对改善预后有积极作用。有相关报道指出，免疫紊乱是肺炎支原体肺炎主要发病机制，且可诱导多种炎性细胞因子，从而形成全身免疫反应及炎性反应［1］。本研究以郑州大学附属儿童医院收治的肺炎患儿及支气管狭窄、需做纤维支气管镜、无感染病灶的儿童为研究对象，以分析T细胞亚群、白细胞介素（IL）-8、IL-10、调节激活正常T 细胞表达和分泌因子（RANTES）的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取郑州大学附属儿童医院2018 年7月至2021年1月收治的支气管狭窄患儿进行前瞻性研究，根据不同感染类型分组，难治性肺炎支原体肺炎患儿34 例为观察组，其中男21 例，女13 例；年龄范围为3～12 岁，年龄（7.43±1.09）岁；病程范围为5～22 d，病程（13.61±4.16）d。普通支气管肺炎患儿32 例为肺炎组，其中男20 例，女12 例；年龄范围为2～12 岁，年龄（7.24±1.15）岁；病程范围为4～23 d，病程（13.95±4.23）d。支气管狭窄、需做纤维支气管镜、无感染病灶的儿童31例为对照组，其中男20例，女11 例；年龄范围为2～11 岁，年龄（7.06±1.20）岁。3 组研究对象的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。患儿家属知情本研究并签署同意书。

本研究经郑州大学附属儿童医院伦理委员会审批通过（伦审号2019-0513）。

1.2 选取标准 难治性肺炎支原体肺炎纳入标准：入院前或者入院后肺炎支原体肺炎患儿经大环内酯类抗菌药物正规治疗7 d及以上，临床征象加重，仍持续发热，肺部影像学所见加重者。肺炎组即支气管肺炎纳入标准：肺部体征可闻及密布固定性的中、细湿啰音，胸部X 线片征象为肺野中内带小片影或小斑片影，部分融合成较大片状影，符合支气管肺炎诊断标准。对照组纳入标准：即胸部CT 提示局部气管狭窄，需进一步行纤维支气管镜检查，肺部无感染的健康儿童。排除标准：哮喘、其他变态反应性病史；采血前1 个月均无免疫药物治疗史；合并其他病原体感染；心肺功能异常。

1.3 方法 3 组儿童于入院次日晨起空腹采取静脉血3 ml，其中2 ml 不抗凝，3 000 r/min（离心半径8 cm），离心15 min，-80 ℃冻存血清。另1 ml 新鲜全血EDTA-2Na 抗凝后上流式机待用。采用流式细胞仪收获淋巴细胞，用Cell Quest Plot 软件程序分析数据获取CD4+、CD8+的表达率。采用ELISA 法检测血清IL-8、IL-10、RANTES 浓度，其中血清IL-8、IL-10在标本采集当天由郑州大学附属儿童医院检验科完成，血清RANTES 浓度检测由郑州大学附属儿童医院检验科协同完成。试剂盒均购自北京万泰生物药业股份有限公司。

1.4 观察指标 （1）统计3组T细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES 水平检测结果。（2）分析难治性肺炎支原体肺炎患儿不同病情程度的T 细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES 水平。疾病严重程度以crub-65评分进行评估，每存在下列情况之一则计1 分：意识障碍、血尿素氮＞7 mmol/L、呼吸频率＞30次/min、收缩压＜90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）或舒张压＜60 mmHg、年龄＞65 岁，1 分表示轻度，2 分表示中度，3 分及以上表示重度。（3）分析难治性肺炎支原体肺炎患儿T 细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES 水平与疾病严重程度的相关性。（4）难治性肺炎支原体肺炎患儿疾病严重程度的多因素分析。

1.5 统计学分析 采用SPSS 23.0统计软件分析，计量资料采取Bartlett方差齐性检验与Shapiro-wilk正态性检验，均确认具备方差齐性且近似服从正态分布，以（±s）表示，采用Mann-WhitneyU检验，组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis 检验，相关性采用Spearman相关系数进行直线相关分析，以logistic 多元回归方程行多因素分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 3 组T 细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES 水平检测结果 3组CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05），且观察组均CD4+、CD8+水平均低于肺炎组、对照组，IL-8、IL-10、RANTES水平均高于肺炎组、对照组（均P＜0.05）。见表1。

表1 3组研究对象T细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES水平检测结果（± s）

表1 3组研究对象T细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES水平检测结果（± s）

注：观察组为难治性肺炎支原体肺炎患儿，肺炎组为普通支气管肺炎患儿，对照组为支气管狭窄、需做纤维支气管镜、无感染病灶儿童；IL为白细胞介素，RANTES为调节激活正常T细胞表达和分泌因子；与观察组比较，aP＜0.05；与肺炎组比较，bP＜0.05

CD4+（%）22.53±4.19 34.36±4.93a 35.12±6.75a 57.416＜0.001 CD8+（%）22.11±2.03 26.62±2.35a 27.06±3.15a 38.570＜0.001 RANTES（μg/L）33.51±3.17 30.06±3.26a 26.84±3.12ab 35.651＜0.001组别观察组肺炎组对照组F值P值例数34 32 31 IL-8（pg/ml）26.38±4.25 14.16±2.91a 7.52±1.69ab 298.193＜0.001 IL-10（pg/ml）15.73±2.11 11.06±1.85a 7.90±1.66ab 141.822＜0.001

2.2 难治性肺炎支原体肺炎患儿不同病情程度T细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES 水平 不同严重程度难治性支原体肺炎患儿CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05），随病情程度加重CD4+、CD8+水平呈下降趋势，IL-8、IL-10、RANTES 水平呈上升趋势（均P＜0.05）。见表2。

表2 难治性肺炎支原体肺炎患儿不同病情程度T细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES水平（± s）

表2 难治性肺炎支原体肺炎患儿不同病情程度T细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES水平（± s）

注：IL为白细胞介素，RANTES为调节激活正常T细胞表达和分泌因子；与轻度患儿比较，aP＜0.05，与中度患者比较，bP＜0.05

病情程度轻度中度重度F值P值例数11 13 10 CD4+（%）25.76±4.03 21.64±3.67a 17.52±3.09ab 13.458＜0.001 CD8+（%）24.50±2.15 22.16±2.46a 18.23±2.88ab 16.746＜0.001 RANTES（μg/L）29.41±3.85 32.79±4.05a 35.76±3.84ab 6.885 0.003 IL-8（pg/ml）17.35±3.49 25.56±3.21a 29.46±3.48ab 35.689＜0.001 IL-10（pg/ml）12.46±2.53 15.98±1.65a 18.33±2.41ab 19.221＜0.001

2.3 难治性肺炎支原体肺炎患儿T 细胞亚群、IL-8、IL-10、RANTES 水平与病情程度的相关性 Spearman 相关性分析结果显示，CD4+、CD8+水平与难治性肺炎支原体肺炎患儿病情严重程度呈负相关（r1=-0.516，P1＜0.001；r2=-0.489，P2＜0.001），IL-8、IL-10、RANTES 水平与病情严重程度呈正相关（r1=0.564，P1＜0.001；r2=0.612，P2＜0.001；r3=0.441，P3＜0.001）。

2.4 难治性肺炎支原体肺炎患儿疾病严重程度的多因素分析 结果显示，CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平均为难治性肺炎支原体肺炎患儿病情严重程度的影响因素（均P＜0.05），见表3。

表3 难治性肺炎支原体肺炎患儿疾病严重程度的多因素分析（34例）

3 讨 论

有数据显示，近10 年肺炎支原体肺炎感染率提高近10 倍，难治性肺炎支原体肺炎发病率同样有上升趋势［2-3］。肺炎支原体是造成呼吸道感染的主要致病菌，同时是导致小儿肺炎的首要因素。肺支原体肺炎发病缓慢，临床症状无明显特异性，但若未及时干预，可引发肺部严重损伤，甚至诱发呼吸衰竭，威胁患儿健康［4-5］。难治性肺炎支原体肺炎是反复出现的、刺激性的肺炎支原体肺炎，目前临床认为其主要致病因素与免疫功能异常、合并其他感染等因素有关［6-7］。免疫功能紊乱是导致肺炎支原体肺炎的重要机制，而T 细胞介导的免疫反应以Th1/Th2 失衡为主要表现［8］。有研究认为，肺炎支原体肺炎感染可诱发体液免疫及细胞免疫功能紊乱，Th2 细胞介导免疫处于优势，Th1 介导的免疫受到抑制［9］。本研究中观察组CD4+、CD8+水平均明显低于肺炎组、对照组，说明难治性肺炎支原体肺炎患儿免疫功能紊乱更加明显。

肺炎支原体感染期间可产生炎性因子，炎性因子过度表达是肺炎支原体肺炎主要特征。IL-8是多源性炎性细胞因子，可趋化T 淋巴细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞，促使炎症细胞聚集并释放大量活性物质，IL-8 过度表达可造成组织损伤，对反映肺炎支原体肺炎病情程度及转归情况有重要价值［10-11］。IL-10 是抑制性细胞因子，可抑制单核巨噬细胞功能起到抑制炎性反应的作用，其分泌不足会造成炎症过程中不可逆组织损伤，在机体感染或其他诱因刺激下呈高水平表达［12］。RANTES 可趋化嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞，诱导、激活T 淋巴细胞增殖，介导白细胞转移，促使白细胞附着于内皮细胞［13］。RANTES 可影响Th1、Th2 细胞而参与免疫反应，在Th1/Th2免疫失衡过程中有重要作用。本研究中观察组IL-8、IL-10、RANTES 水平明显高于肺炎组、对照组，说明炎性反应及免疫失衡在难治性肺炎支原体肺炎发病过程中有明显作用。进一步分析显示，CD4+、CD8+水平与难治性肺炎支原体肺炎患儿病情严重程度呈负相关，IL-8、IL-10、RANTES 水平与病情严重程度呈正相关，且均为难治性肺炎支原体肺炎患儿病情严重程度的影响因素，说明通过检测CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平可分析肺炎支原体肺炎患儿病情程度，对临床干预提供详细信息。

综上所述，难治性肺炎支原体肺炎患儿CD4+、CD8+水平呈低表达，IL-8、IL-10、RANTES 水平呈高表达，且CD4+、CD8+、IL-8、IL-10、RANTES 水平可用于分析难治性肺炎支原体患儿病情程度，有助于为临床制定干预措施提供客观依据，具有重要临床价值。

利益冲突：作者已申明文章无相关利益冲突。