大鼠血清葡萄糖测定分析的影响因素

李 红,敬海明,林长缨,郭 婧,张 勐,张 超,高 珊,余儒洋

(1.北京市疾病预防控制中心/北京市预防医学研究中心,北京100013;2.中国农业大学动物医学院,北京100083)

血糖是指血液中葡萄糖（glucose）。血糖含量异常升高可引发糖尿病（diabetes mellitus，DM）。DM是以高血糖为特征的代谢性疾病，糖尿病肾病、糖尿病足和眼部疾病等一系列并发症严重危害人类健康。关于影响大鼠血糖异常的相关因素［1-6］、血糖异常的中药治疗［7-8］等已有较多研究报告。作为临床诊断依据的血糖水平，实验室检测结果的质量非常重要。

对样品检测实施严格的全面质量控制，包括样品分析前、分析中和分析后3个阶段。样品送到实验室进入分析中的这个阶段，检测系统涉及仪器、试剂、校准品、质控品和分析人员等，探讨分析中使用的检测仪器、试剂对大鼠血清葡萄糖测定的影响，以及比较收到送检血样即刻检测与不同条件放置再检测之间的差异，对于保证样品检测过程的质量具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 仪器设备

7600-日立全自动生化分析仪、7170-日立全自动生化分析仪均购自日本日立高新技术有限公司。

1.2 试剂、校准品和质控系统

葡萄糖氧化酶法血糖测定试剂、校准品和质控血清均购自中生北控生物科技股份有限公司，己糖激酶法血糖测定试剂、复合校准品和质控血清购自日本和光纯药工业株式会社。

1.3 大鼠血样

本中心生化分析实验室收到送检清洁级Wistar大鼠血清样品，均由军事医学科学院实验动物中心提供［SCXK-（军）2012-0004、SYXK（京）2013-0033］，分别包括比较两台生化分析仪测定的71只大鼠（体质量为160～200 g）血样，比较两种方法所用试剂测定的90只大鼠（体质量为200～250 g）血样，以及比较不同保存条件下测定的140只大鼠（体质量为408～799 g）血样。

1.4 实验方法

在7600-P模块-日立生化分析仪和7170-日立全自动生化分析仪上使用己糖激酶法试剂同时检测71只大鼠血清葡萄糖水平。在7600-P模块-日立生化分析仪上分别用葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法试剂检测90只大鼠血清葡萄糖水平。

将另外140只大鼠血样编号，每个血样分装5个冻存管并立刻加盖，冻存管放入冻存盒保存，在7600-P模块-日立生化分析仪上使用己糖激酶法试剂分别即刻检测，以及4℃冷藏保存4 h、24 h后，－20℃与－80℃冷冻保存1个月后检测血清葡萄糖水平。具体操作按照试剂盒及仪器使用说明进行。

1.5 统计学方法

采用SPSS 20.0软件包进行统计处理。组间比较采用配对t检验，以P＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清葡萄糖水平检测结果

71只大鼠血清使用两台生化分析仪检测的葡萄糖水平差值为0.03 mmol/L。采用己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法试剂检测90只大鼠血清中葡萄糖水平，结果显示前者比后者低0.35 mmol/L。4℃冷藏分别保存4 h、24 h后的检测结果与即刻检测140只大鼠血清中葡萄糖结果一致，－20℃和－80℃分别冷冻1个月后测定结果降低。具体检测结果数据见表1。

2.2 检测结果的相关性分析

两台生化分析仪、即刻检测与4℃冷藏分别保存4 h和24 h检测结果的差异无统计学意义（P＞0.05）。两种方法的试剂、即刻检测与－20℃和－80℃分别冷冻1个月检测的结果差异明显（P＜0.05）。比对各结果的相关性均良好，具体的统计学分析数据见表2。

表1不同方法检测大鼠血清葡萄糖含量Table 1 The serum glucose content in rats detected by different mothods

表2大鼠血清葡萄糖检测结果的相关性Table 2 Relationship of detected results for serum glucose content in rats between different mothods

3 讨论

依据美国临床实验室标准协会（CLSI）文件EP9-A2中的要求，使用两台仪器检测时，结果差异应无统计学意义，且有良好的相关性［r≥0.975，或r2≥0.95）］［9］。血糖测定有全自动、半自动仪器和快速血糖仪等多种检测方式，不同仪器生产厂家、不同检测速度的仪器等都会造成检测结果的差异［10-11］。比色杯材质为石英玻璃或塑料，水浴是循环恒温水浴或恒温液控制，进样方式为轨道式或圆盘式，反应时间为固定或可选择模式，试剂加入可添加2种或者4种等，均可影响检测结果［12］。设计生产的差别可造成仪器精密度和准确度的差异，检测系统涉及的仪器设备是分析中实验室检测的基础，做好仪器设备日常维护保养是检测工作质量的另一保证。

已有文献报告，不同的血糖检测方法其结果有差异性［13］。本研究中两种试剂测定结果差异有统计学意义，但两个结果相关性良好。另外，血清即刻测定与4℃冷藏保存4 h、24 h测定结果的差别无统计学意义，且相关性良好；与－20℃和－80℃冷冻保存1个月测定结果差异均有统计学意义，但相关性良好。实验室收到血样后离心分离血清，尽量及时检测，不能及时检测的样品应加盖密封保存并在24 h内进行检测。国家卫生健康委临床检验中心各实验室之间质量评价葡萄糖水平的可接受范围为±0.33 mmol/L或±10%［14］。实验室条件不同，有些检测结果的差异虽然没有临床意义，但是动物实验比对应尽量保持一致性。因此，需要严格控制检测过程分析中的每个环节，保证动物实验结果的准确性。