安立生坦β-环糊精包合物制备与表征

钟文君 石 雷 刘永丽 林晓艳 章海红

1.台州职业技术学院化学制药研究所，浙江台州 318000；2.浙江海正药业股份有限公司质检部，浙江台州 318000

安立生坦为高选择性内皮素受体拮抗剂，是治疗肺动脉高压的新型靶向药物，其疗效好、安全性高，被欧洲心脏病协会和美国胸科医师协会列为推荐用药[1-3]。环糊精具有外壁亲水和内侧疏水的锥形腔体结构，能包裹水不溶性药物形成包合物，掩盖药物的味道，提高药物水溶性和稳定性，作为药物载体材料发展迅速[4-6]。环糊精种类中β-环糊精毒性小、价廉易得，空腔大小适中，广泛作为包合物的主体分子使用[7-8]。安立生坦在水中溶解度小[9]，本研究使用高速均质机通过饱和水溶液法制备安立生坦β-环糊精包合物，并对质量特性进行考察，以期提高药物溶解度、稳定性和生物利用度。

1 仪器与试药

1.1 仪器

BSA224S 电子天平（精密度0.1 mg，赛多利斯科学仪器有限公司）；Agilent 1220 高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司）；QXQM-2 行星式球磨机（长沙天创粉末技术有限公司）；S-4800 场发射扫描电镜（日本日立高新技术公司）；DSC-100 差示扫描量热仪（南京大展机电技术研究院）；Bruker-D8 Advance X-射线粉末衍射仪（德国布鲁克科技公司）；RC-8D 溶出度测试仪（天津市光学仪器厂）。

1.2 药品与试剂

安立生坦（浙江永宁药业股份有限公司，含量：101.1%，批号：ALST-170413）；β-环糊精（阿拉丁试剂有限公司，批号：D1211011）；微晶纤维素（曲阜市天利药用辅料有限公司，批号：191205A）；三氟乙酸（萨恩化学技术上海有限公司，批号：FK180232）；乙腈（色谱纯，美国天地）；安立生坦胶囊和包合物胶囊（自制，规格：5 mg）。

2 方法与结果

2.1 包合物与胶囊制备

2.1.1 安立生坦β-环糊精包合物制备 安立生坦原料药经球磨机研磨并过九号筛备用。在65℃水浴条件下，β-环糊精用纯化水配制成饱和溶液，加入上述原料药粉末，β-环糊精与原料药质量比为3∶1。维持恒温，10 000 r/min 高速均质分散1 h（工作10 min，停2 min），趁热抽滤，上清液2～8℃冷藏12 h，抽滤，少量无水乙醇快速洗涤，弃去滤液，沉淀50℃常压干燥，即得包合物粉末[10-12]。

2.1.2 药物胶囊和包合物胶囊制备 分别取原料药和自制的包合物粉末，加入适量微晶纤维素，混合均匀，填充入1 号空胶囊，制得药物胶囊和包合物胶囊，规格均为每粒5 mg。

2.2 含量测定方法

2.2.1 色谱条件 仪器Agilent 1220；色谱柱：Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：40 ℃；流动相：0.02%三氟乙酸溶液-乙腈（体积比30∶70）；流速：1.2 ml/min；检测波长：262 nm；进样量：20 μl[13-15]。

2.2.2 溶液制备 对照品溶液：精密称取安立生坦对照品20.4 mg，置于100 ml 量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀，制得对照品储备液。供试品溶液：精密吸取所制备的包合物溶液1.0 ml，置于10 ml 量瓶中，加流动相定容，超声10 min，摇匀，即得。空白辅料溶液：取不含安立生坦的空白辅料适量，按供试品溶液制备方法配制，即得。

2.2.3 专属性实验 分别取“2.2.2”项下溶液，按色谱条件进样，结果显示辅料对安立生坦检测没有干扰，药物色谱峰保留时间约为3.5 min，理论塔板数均大于8500，分离度均大于2.5。

2.2.4 标准曲线绘制 精密吸取对照品储备液0.1，0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 ml 分别到10 ml 量瓶中，流动相定容并摇匀。按色谱条件检测，以峰面积A 对样品浓度C（μg/ml）进行线性回归分析，得回归方程：A=13.881C+7.891（r=0.9999）。结果显示，安立生坦在2.04～163.20 μg/ml 浓度范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 取对照品溶液适量，连续重复进样6 次，记录峰面积，计算峰面积相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）为1.57%，显示仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 取供试品溶液适量，每间隔1 h 进样1 次，连续6 次，记录峰面积，计算峰面积RSD 为1.79%，表明安立生坦溶液6 h 内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验 取所制备的包合物溶液，按供试品溶液制备方法平行制备6 份并检测，峰面积RSD 为1.83%，提示本方法重复性良好。

2.2.8 回收率试验 精密吸取对照品储备液0.5、4.0，8.0 ml，各平行3 份，置于10 ml 量瓶中，加入适量辅料，用流动相定容并摇匀，按色谱条件检测，计算平均回收率为100.51%，RSD 为1.04%，提示本方法有良好的回收率。

2.3 包合物质量表征

2.3.1 形态观察 使用扫描电镜对原料药、球磨后原料药、β-环糊精、物理混合物（球磨后原料药和β-环糊精按处方比例进行混合）和包合物进行形态观察，见图1。

图1 扫描电镜图

2.3.2 差示扫描量热分析 分别取适量的原料药、β-环糊精、物理混合物和包合物，置于铝坩埚中进行差示扫描量热分析[16]，设定温度30～300℃，升温速率10℃/min，样品升温曲线见图2。由图可知，β-环糊精在136℃附近有较宽的吸热峰，安立生坦在188℃有特征吸热峰，该峰在物理混合物的曲线中仍存在，在包合物的曲线中消失。

图2 样品差示扫描量热图

2.3.3 粉末X-射线衍射 分别取相同样品进行X-射线衍射测定，测定条件：Cu 靶，扫描范围5°～50°，电压40 kV，扫描速度5°/min，结果见图3。由图可知，安立生坦衍射强度高，体现其结晶性，物理混合物衍射图谱为药物和β-环糊精特征峰叠加，包合物图谱中药物衍射峰消失。

图3 样品X-射线衍射图

2.3.4 包合率测定 精密称取包合物粉末100 mg，置于100 ml 量瓶中，加流动相适量超声10 min，流动相定容并摇匀，0.45 μm 微孔滤膜过滤，滤液按色谱条件检测，计算包合物中药物质量[17-18]。安立生坦包合率（%）=包合物中安立生坦质量/安立生坦投入量×100%。重复测定3 批，包合率分别为68.2%、64.6%、71.1%，平均包合率为68.0%。

2.3.5 溶解度测定 取安立生坦原料药、球磨后原料药和包合物，分别置于具塞量筒中，各加入纯化水适量配制成过饱和溶液，恒温振荡器中振摇24 h[（37.0±0.5）℃，100 r/min][19]，0.45 μm 微孔滤膜迅速过滤，按色谱条件检测，计算原料药、球磨后原料药和包合物在水中溶解度分别为46.35、74.28、592.17 μg/ml，包合物中药物溶解度提高约13 倍。

2.3.6 体外溶出考察 取自制的药物胶囊、包合物胶囊，根据《中华人民共和国药典》[20]溶出度测定法中篮法的规定，纯化水900 ml 经超声脱气作为溶出介质，温度（37±0.5）℃，转篮转速100 r/min，于5、10、15、20、30、45、60 min 取样8 ml（同时补加同体积水），用0.45 μm 微孔滤膜过滤，滤液按色谱条件检测，计算累积溶出度，溶出曲线见图4。结果显示包合物胶囊在各时间点的溶出明显优于原料药胶囊，其60 min累积溶出度为83.17%。

图4 体外溶出曲线图

3 讨论

环糊精包合物制备方法，文献报道[21-23]有饱和水溶液法、共沉淀法等，为提高包合率，通常将药物溶解在乙醇、丙酮等有机溶剂中再与环糊精饱和水溶液混合[24]。实验中通过球磨破坏安立生坦晶体结构，将球磨后药物直接加入环糊精饱和水溶液中制备包合物，并结合高速均质方法促进药物分散和进入环糊精空腔，该方法能达到较高的包合率，因未使用有机溶剂，改善了制备环境、避免有机溶剂残留。所采用制备方法简便、易操作、重复性好。

扫描电镜观察显示包合物与原料药、β-环糊精形态均有明显差异，与物理混合物形态也不相同，提示形成了新的物相[25]，差示扫描量热分析结果提示包合物不是简单的混合，药物包裹进入环糊精空腔中，X-射线衍射结果提示形成了新的物相，安立生坦被包合后降低了结晶性[11]。环糊精包合作用明显提高了安立生坦水中溶解度与体外溶出度。

安立生坦为生物药剂学分类系统Ⅱ类药物（低溶解性、高渗透性），具有较好临床应用前景，将其制备成包合物能改善药物稳定性、溶出度和生物利用度，并可以进一步制备成片剂、胶囊剂等，为临床应用提供更多可行的办法。