细胞块结合免疫组化技术在恶性胸腔积液病理诊断中的 效果观察

方晓华

(江门市中心医院，广东 江门 529000)

0 引言

胸腔积液是临床多发呼吸系统疾病之一，大部分是因为胸膜间皮瘤、非小细胞肺癌等发展而形成的。临床上，主要应用胸腔积液脱落的细胞实施检查，该方法能够将胸腔积液中是否存在肿瘤进行判断，其在疾病诊治中具有重要作用。以往关于胸腔积液的判断以胸腔积液细胞涂片法为主，但是因为间皮细胞缺乏显著增生或者细胞形态结构并不明显，进而导致误诊的出现，浆膜腔原发性间皮性肿瘤与转移性癌的鉴别诊断难度较大[1]。近年，在医疗技术水平日益提高的背景下，免疫组化染色技术使用范围越来越广，其能够有效鉴别诊断间皮性肿瘤与转移性癌。基于此，本次研究针对细胞块结合免疫组化技术在恶性胸腔积液病理诊断中的应用效果进行分析，具体如下。

1 资料与方法

1.1 资料

随机抽选本院2019年1月至2021年2月接收的30例恶性胸腔积液患者，其中有18例男，12例女；最小年龄36岁，最大年龄67岁，均值(52.23±3.15)岁。原发肿瘤组织学分型：6例小细胞癌，9例鳞癌，15例腺癌。经医院医学伦理委员会批准。纳入标准：恶性胸腔积液诊断标准与《恶性胸腔积液诊断与治疗专家共识》相符；自愿签署研究同意书。排除标准：合并器官功能障碍；伴有全身感染；具有精神疾病史；哺乳期或者妊娠期妇女。

1.2 方法

1.2.1 细胞学涂片

标本静置大约6-12h，去除上清液，向试管中放置50mL进行5min离心操作，离心速度为每min2000r，然后将上清液去除，均匀混合底部0.5mL左右的细胞液，在载玻片上均匀涂抹，然后采用95%的乙醇进行10-30min固定，采用HE染色。

1.2.2 制作细胞块

在50mL的离心管中放入胸腔积液，按照每min2500r的速度进行大约10min的离心操作，多次离心后，将底部沉渣保留下来，将上清液去除，添加4%的中性多聚甲醛进行固定，离心静置1h后向包埋盒中放置沉淀物，实施常规脱水包埋，然后切片，厚度约0.4μm，最后实施HE染色。

1.2.3 免疫组化染色

利用免疫组化技术分析恶性胸腔积液细胞块切片，应用DAB显色实际与抗体，试验期间，免疫组化染色方法严格按照说明书展开。细胞蜡块切片，厚度为4μm，常规烤片1h脱蜡直至出水，过氧化氢将内源性过氧化物酶阻断，微波抗原修复，添加一抗4℃孵育过夜，DAB显色，然后应用苏木素再次染色，PBS代替一抗为阴性对抗。

1.3 观察指标

分析细胞角蛋白7(CK7)、肾母细胞瘤基因1(WT-1)、癌胚抗原(CEA)、甲状腺转录因子1(TTF-1)、淋巴细胞抗原(CD56)、细胞角蛋白5/6(CK5/6)和嗜铬素A(CgA)阳性检出状况[2]。

1.4 统计学方法

2 结果

小细胞癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA阳 性 表 达 率 分 别 是0.00%、16.67%、83.33%、0.00%、100.00%、100.00%、16.67%、3.33%；鳞 癌 中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA阳 性 表 达 率 分 别 是100.00%、22.22%、11.11%、100.00%、22.22%、0.00%、22.22%、33.33%；腺癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA阳性表达率分别是20.00%、13.33%、100.00%、0.00%、13.33%、0.00%、86.67%，详见表1。

表1 分析不同组织类型肺癌恶性胸腔积液细胞块中各项指标的表达[n(%)]

3 讨论

胸腔积液是许多肺癌患者并没有发现原发病灶前的主要症状，如何确诊胸腔积液的性质在肺癌组织学分型中具有重要作用。据有关资料显示[3]，关于非小细胞肺癌的治疗方案的制定也是以病理分型为基础而形成的。

本次研究主要应用胸腔积液离心制作细胞块方法，同常规涂片方法相比，其具有显著优势。常规图片是在静置标本后直接展开细胞学涂片，对具有诊断意义的细胞进行查找，但是该方法很可能混有炎性渗出物和红细胞，而且标本细胞密度偏低，导致细胞涂片厚度不同，导致多个细胞重叠，增加了恶性肿瘤漏检率。连续且细胞块，能够将组织学结构尽可能的保留下来，包括乳头结构、腺管和腺泡等，与此同时，细胞块能够为基因检测和免疫组化检测奠定基础[4]。本次研究中的胸腔积液细胞块HE染色切片中可以发现乳头状结构和腺管状结构，鳞癌上也能够发现与组织学类似的结构特点，小细胞癌中能够发现被挤压的肿瘤细胞。为进一步明确具体类型，为临床治疗方案的制定提供参考，需要结合免疫组化检查方法，通过检测P63、CEA、WT-1、CK7、DK5/6、CD56等抗体，从而对其诊断价值进行探讨。本次研究结果显示，小细胞癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA阳性表达率分别是0.00%、16.67%、83.33%、0.00%、100.00%、100.00%、16.67%、3.33%；鳞癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA阳性表达率分别是100.00%、22.22%、11.11%、100.00%、22.22%、0.00%、22.22%、33.33%；腺 癌 中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA阳性表达率分别是20.00%、13.33%、100.00%、0.00%、13.33%、0.00%、86.67%，腺癌中，CEA、TTF-1和CK7具有较高的阳性率，TTF-1是一种核蛋白，其主要存在成人Ⅱ型肺泡上皮和肺组织中，大部分肺小细胞癌和肺腺癌经过免疫组化检查提示TTF-1表现为阳性。此外，腺癌中，CEA和CK7同样具有良好的表达，尤其是CK7，表达较高，小细胞癌和鳞癌中，该指标表达相对偏低。鳞癌中，P63、CK5/6具有较高的阳性率，P63是一种鳞癌标记物，其具有较高的阳性率和面赶驴，CK5/6主要存在于细胞膜与细胞浆中，小细胞癌及腺癌中未见CK5/6表达，由此可见，该指标具有较高的特异性和敏感性。小细胞癌中，CgA及CD56具有较高的阳性率。据有关资料显示[5]，免疫组化标记物包括CD56、CgA及Syn，本次研究结果与之相似，于胸腔积液细胞块中实施免疫组化，小细胞癌中，CgA和CD56具有较高的阳性率。

细胞块结合免疫组化技术能够弥补传统细胞涂片检查的不足，更好地保存细胞标本，促进诊断准确率的提高[6]。该检测方法利用许多特异性抗体对细胞有关抗原进行检测，同时结合酶着色反应将细胞分布状况、定位和活性等清楚的反映出来，从而对疾病的良性和恶性进行判断，同时判断肿瘤类型[7]。因为连续切片，对于多项检查的实施十分有利，该方法有助于诊断准确率提高，除此之外，该检查方法具有操作便捷、简单等特点，能够对阳性物质准确定位。免疫组化技术利用专业仪器进行染色，能够尽量减少人为因素造成的影响，确保诊断结果准确性，与此同时，只需要一名人员进行操作，减少了医疗自愿的浪费，该检查方法检查设备操作简单，并不会导致受检者痛苦程度，对于配合度的改善十分有利[8]。而且以上两种检查方法结合对于疾病的鉴别诊断十分有利，其为临床诊治提供了重要数据参考。

总而言之，细胞块结合免疫组化技术在恶性胸腔积液诊断中具有较高的应用价值，其有助于诊断率提高，鳞癌及腺癌鉴别诊断过程中，建议应用CK5/6、TTF-1和P63；针对小细胞癌的诊断，建议应用CgA与CD56。