HMGB1-RAGE信号通路和子痫前期发病机制相关性分析

王 蕊,魏 莉,卢洪涛,李冉冉

(山东省枣庄市妇幼保健院医学遗传与产前筛查科,山东 枣庄 277100)

作为妊娠期特有疾病，子痫前期主要是指孕妇在妊娠期间发生的血清蛋白、血压以及血脂的异常情况，其发病率高达6%～8%，是孕产妇及围产儿死亡的主要因素。子痫前期发病机制尚不明确，考虑与母胎界面免疫平衡失调、血管内皮损伤、滋养细胞迁移受限有关。作为一种炎性细胞因子，高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与细胞表面受体结合后可推动介导炎症反应，进而在炎症形成及发展中发挥作用[1]。晚期糖基化终末产物受体(RAGE)则是HMGB1主要受体，其与HMGB1亲和力高，两者结合后会对核转录因子-kB(NF-KB)信号通道产生活化作用，进而对炎症因子分泌产生刺激[2]。目前，临床关于HMGB1-RAGE信号通路在子痫前期中的参与作用研究较少。为探究两者相关性，此次研究收集2019年1月至2021年1月我院64例子痫前期患者作为研究对象，并总结汇报研究结果。

1 资料与方法

1.1一般资料:前瞻性收集我院子痫前期患者64例，来源时间范围为2019年1月至2021年1月，根据疾病程度分组，轻度组与重度组分别为34例、30例，平均年龄分别为(29.63±4.02)岁(22～37岁)、(29.53±4.09)岁(21～38岁)；孕周分别为(32.39±1.14)周(25～35周)、(34.95±1.21)周(26～36周)。研究设计将病例组与正常对照组做对照，选择同期健康孕妇(n=30)作为对照组，最大年龄孕妇36岁，最小年龄是23岁，年龄平均(29.18±4.21)岁，孕周(33.84±1.64)周(25～36周)。三组有可比性(P>0.05)。

1.2纳入与排除标准:入组标准：①所有入组对象B超显示为单胎。②子痫前期诊断标准参照《妊娠期高血压和子痫前期指南2019版》[3]；③患者及家属已明确研究目标及流程，自愿参与研究并在知情同意书签字，医学伦理委员会掌握研究相关事项，并批准。④产妇年龄≥18岁，可正常交流。排除标准：①心脏受损或肝肾异常者；②合并精神异常、心理障碍或意识丧失患者；③合并原发性高血压、糖尿病及心脑血管疾病患者；④听力丧失、语言沟通不顺畅，对研究无法做到顺利配合患者。

1.3方 法

1.3.1样本采集:产妇分娩前与清晨空腹状态下采集患者外周静脉血，以2mL为宜，按照3000r/min离心速率实施离心处理，时间以5min为宜，提取血清，保存于-80℃冰箱环境中，留作批量待测。产妇剖宫产时于采集胎盘母体面中央组织3块，规格为1cm×1cm×1cm，需要注意的是要避开梗死及钙化区域，采用生理盐水进行漂洗，并将其固定温度为4℃、浓度为40g/L多聚甲醛溶液中，另外两块组织保存于无菌冻存管中，放置于-80℃冰箱中。

1.3.2检测方法:胎盘组织及血清HMGB1、RAGE、NF-kBp65检测采用酶联免疫吸附法检测，试剂盒购自凯斯勒生物医药扬州有限公司，按照试剂盒操作标准执行各项检测流程，保障检测结果的准确性。采用免疫组化法对胎盘组织HMGB1、RAGE、NF-kBp65进行定位，严格按照说明书进行。

1.4观察指标:检测三组血清及胎盘组织中HMGB1、RAGE、NF-kBp65表达情况，对胎盘组织中HMGB1、RAGE、NF-kBp65蛋白定位进行免疫组化试验，根据染色结果计分，+、++、+++分别表示弱阳性、中度阳性与强阳性。分析HMGB1、RAGE、NF-kBp65与子痫前期相关性。

2 结 果

2.1三组血清中HMGB1、RAGE、NF-kp65含量比较:与对照组及轻度组相比，重度组患者血清HMGB1、RAGE、NF-kp65含量明显较高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 三组血清中HMGB1 RAGE NF-Bp65含量比较

2.2三组胎盘组织中HMGB1、RAGE、NF-kp65 mRNA比较:三组胎盘组织中HMGB1、RAGE表达重度组最高，对照组最低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 三组胎盘组织中HMGB1 RAGE NF-kp65 mRNA比较

2.3三组胎盘组织中HMGB1、RAGE、NF-kBp65蛋白定位表达比较:重度组HMGB1、RAGE、NF-kBp65强阳性表达均高于轻度组及对照组(P<0.05)，有统计学意义，见表3。

表3 三组胎盘组织中HMGB1 RAGE NF-kBp65蛋白定位表达比较

2.4HMGB1、RAGE、NF-kBp65相关性分析:子痫前期孕妇血清HMGB1、RAGE与NF-kBp65呈现出明显的正相关(r=0.387，P<0.05)，有统计学意义。

3 讨 论

子痫前期多发于妊娠20周后，患者常伴随高血压及蛋白尿症状，部分合并全身脏器功能受损，呈现出动态性发展，随着病情进展，会诱发HELLP综合征、胎儿宫内窘迫、脑出血等，增加心血管疾病风险，威胁到母婴生命安全。以往有学者在研究中发现子痫前期孕妇娩出胎盘后，子痫前期症状能够得到不同程度好转，但母体血管内皮损伤症状可持续长达10年，部分会发展为慢性高血压，因此子痫前期发病主要源于胎盘[4]。在缺血缺氧状态下，滋养细胞炎性因子释放会大量增加，作用于胎盘，使得胎盘缺血损伤加重。

作为损伤相关模式分子，HMGB1在炎症及免疫调节中有着重要的参与作用，其与传统白介素、肿瘤坏死因子等早期炎性因子相比，尽管作用时间晚但能够持续较长时间，参与组织损伤及细胞死亡，具有促炎作用[5]。文献报道，HMGB1是多功能蛋白质，细胞分化、细胞外信号传导及DNA修复等均有HMGB1的参与，不仅如此其还参与了固有免疫应答[6]。近年来，有学者在研究中发现胎盘组织中也有HMGB1表达，随着胎盘炎症表达增加而升高[7]。此次研究检测了三组孕妇胎盘中HMGB1 mRNA表达情况，结果发现重度组患者HMGB1 mRNA最高，显著高于对照组与轻度组。正常孕妇HMGB1主要定位于滋养细胞细胞核，而合并子痫前期孕妇除滋养细胞外，在细胞质中也呈现出高表达，提示HMGB1存在核浆转移，可能是子痫前期的重要病理过程。从本研究结果看，重度组患者血清HMGB1水平明显高于轻度组与对照组，考虑母体血清中HMGB1会随着胎盘组织HMGB1的升高而升高。HMGBI在外周血中的大量存在，会对母体心血管系统产生一定的影响，增加血管壁通透性，诱发血压升高，加重缺氧缺血症状，形成子痫前期。作为HMGB1的特异性受体，RAGE在正常生理状态下的蛋白水平及mRNA为低表达，当出现RAGE配体堆积后，会经受体依赖作用使得RAGE上调，活化细胞，对配体生物学作用起到放大作用，与HMGB1结合后会对炎症细胞产生激活作用，引起组织细胞受损。NF-KB能够对多种炎性因子表达产生调控作用，是炎症反应的核心因子，既往研究证实其能够对IL-2、IL-6、TNF-α等炎症因子产生调控作用，通过对炎性细胞因子的诱导形成组织损伤，在NF-KB通路作用下，形成一个局部炎症微环境[8]。NF-KBP65术后NF-KB的其中一个亚基，其激活模式始于P65亚基的激活，因此NF-KB转录活性可以通过p65表达得以反映。此次研究研究发现患者血清及胎盘组织中RAGE、NF-KBP65在重度组表达最高，子痫前期孕妇血清HMGB1、RAGE与NF-kBp65呈现出明显的正相关(r=0.387，P<0.05)，有统计学意义，提示HMGB1、RAGE通过NF-kB信号通路参与了子痫前期的病理过程。但由于样本少、精力有限，关于子痫前期病因机制还有待大量研究证实，后续研究应扩大规模，引入更多因子，深入探究子痫前期发病机制，为临床提供更多可靠的依据。

综上所述，HMGB1-RAGE信号通路与子痫前期发病机制密切相关，在患者胎盘及血清中呈现高表达，可将上述指标作为诊断、评估子痫前期的可靠指标，以便早期诊断、治疗，增强患者预后。