超高效液相色谱法同时检测丹参中14 种水溶性成分

陈慧芝，任君，尹予希

（乌海市检验检测中心，内蒙古 乌海 016000）

0 引言

丹参属于唇形科植物丹参的干燥根与根茎，其属于传统中药材，在我国中医治疗上具备悠久的应用历史，具备广泛的用途[1]。根据《神农本草经》上有相关记载，丹参主要用于“心腹邪气”治疗，可发挥“破症除瘕，止烦满，益气”的功效[2]。目前在对丹参水溶性成分进行检测时，应用的方法主要为高效液相色谱法，当水溶性成分分离类型较多时，各个样品的运行时间会达到60～70min，不但会造成检测的时间漫长，无法完成大量样品检测工作，同时还会导致资源被大量浪费[3]。本次研究就采用超高效液相色谱法对丹参中14 种水溶性成分进行检测，探讨超高效液相色谱法同时检测丹参中14 种水溶性成分的效果。报告如下。

1 仪器与药物

1.1 检测仪器与试剂

本次研究应用的检测仪器包括美国费丽顿公司生产的超高效液相色谱检测仪、上海科威特公司生产的MD-500 型电子分析天平、浙江诺豪器械有限公司生产的LK 型超声波清洗机、北京天科设备有限公司生产的ME200 型旋转蒸发仪、浙江海林器械有限公司生产的SP-200 型中药粉碎机以及真空干燥箱。

本次研究应用的试剂包括美国Honeywell Burdick﹠Jackson 公司生产的乙腈，批号为S28M6D；上海斯诺威亚公司生产的乙酸，批号为18 625641；标准物质或对照品包括丹参素钠、丹酚酸B、原儿茶酸、迷迭香酸、原儿茶醛、咖啡酸、阿魏酸、异阿魏酸、丹酚酸A、9'丹酚酸B 单甲酯、9‴ 丹酚酸B 单甲酯、丹酚酸C、紫草酸、丹酚酸B 二甲酯。丹参样品购自山东莱芜市艾山、罗汉峪、九龙、密埠等区域。

1.2 方法

色谱条件为：色谱柱长宽为2.1×50mm，内径为1.7μm，柱体温度控制为30℃；进样量为1μL，在检测时将波长设置为286nm；流动相为：0.5%乙酸溶液（A）-乙腈（B），流速控制为0.6mL/min。

制备对照品溶液的方法：分别对对照品进行称取，称取量为10mg 左右，然后采用80%甲醇溶液进行溶解，然后进行定容，总容量为10mL，配置浓度分别为：丹参素（1.126mg/mL）、丹酚酸B（0.982mg/mL）、原儿茶酸（0.944mg/mL）、迷迭香酸（0.962mg/mL）、原儿茶醛（1.06mg/mL）、咖啡酸（1.011mg/mL）、阿魏酸（1.010mg/mL）、异阿魏酸（1.020mg/mL）、丹酚酸A（0.968mg/mL）、9' 丹酚酸B单甲酯（1.049mg/mL）、9‴丹酚酸B 单甲酯（1.067mg/mL）、丹酚酸C（0.996mg/mL）、紫草酸（0.973mg/mL）、丹酚酸B 二甲酯（0.904mg/mL）。

制备供试品溶液的方法：对样品粉末进行称取，称取量为1g 左右，放置于250mL 锥形瓶内，添加100mL 纯化水，加热回流4h 后，放于室温下待其冷却后，对续滤液减压浓缩，并对其实施定容处理，最终容量为25mL。

1.3 方法学验证

首先，开展专属性实验，采用对照品溶液与供试品溶液，按照1.2 色谱条件进样，对色谱图予以记录。其次，开展线性关系考察，将各对照品溶液分别取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL 至50mL 量瓶内，定容后摇匀，获得5 份梯度浓度的混合对照品溶液，根据1.2 色谱条件实施分析，横坐标为各成分的浓度，纵坐标为峰面积。并开展精密度实验、稳定性实验、重复性实验、重复性实验，在进行样品检测时，采用不同的样品及不同的部位，对供试品溶液进行制备，每份样品制备3 份，开展色谱分析。

2 结果

2.1 水溶性成分回收率分析

超高效液相色谱法同时检测丹参14 种水溶性成分的平均回收率均超过97%，如表1。

表1 水溶性成分回收率分析

2.2 丹参不同部位含量测定结果

超高效液相色谱法同时检测丹参14 种水溶性成分时不同部位的含量存在差异，如表2。

表2 丹参不同部位含量测定结果

2.3 不同直径丹参根含量测量结果

直径为0.1～0.5cm 的丹参药材和丹参周皮中14 种成分含量较高，如表3。

表3 不同直径丹参根含量测量结果（cm）

3 讨论

丹参属于常用中医药物，现代药理研究发现，丹参中具备的物质达到100 余种，其具备的多种水溶性成分，可发挥抗菌、抗氧化以及对心脑血管疾病起到治疗的作用[4]。丹酚酸类成分具备的结构单元主要为咖啡酸以及丹参素，其具备较为相似的结构，分离的难度较大，因此目前研究报道中未见较多的水溶性成分分离的报道[5]。前人研究报道显示，在对丹参水溶性成分进行测量时，流动相的有机相大部分为乙腈或者甲醇，非有机相主要为乙酸溶液或磷酸溶液，柱温控制为20～40℃，波长为200～290nm，为分析最佳色谱条件，当流动相为甲醇-0.5%乙酸溶液时，所测成分间的分离度较低。当波长控制为210nm 时，能够取得最好的溶剂效应[6]。

丹参的部位会对丹参内的水溶性成分水平产生影响，相较于根部，茎叶中具备的水溶性成分较多[7]。除丹参素外，其余不同水溶性成分的总量也明显低于根[8]。直径为0.1～0.5cm 的丹参药材和丹参周皮中14 种成分含量较高，统计数据显示直径是影响14 种水溶性成分含量的重要因素。在丹参的部位和根的直径会影响到丹参中水溶性成分的含量，直径为0.1～0.5cm 丹参根所含各种水溶性成分均较高，总量上也表现出优势，茎叶中水溶性成分总量大大低于根，除丹参素外，其余单个成分含量也低于根。检查开展的8min 内，超高效液相色谱法可完全分离14 种水溶性成分，超高效液相色谱法同时检测丹参14 种水溶性成分的平均回收率均超过97%；超高效液相色谱法同时检测丹参14 种水溶性成分时不同部位的含量存在差异。

综上所述，超高效液相色谱法同时检测丹参中14种水溶性成分的效果好，具备较好的分离度以及灵敏度。同时，超高效液相色谱法检测耗费的时间较短，可使资源得到节约也有利于做好质量控制。