三种党参不同炮制品对脾虚模型大鼠肠道菌群的影响

韦 露，马秀梅，覃树先，钟 文，谭雨坪，秦 丹

（1.广西中医药大学第一附属医院，南宁 530023；2.广西国际壮医医院，南宁 530201；3.广西中医药大学，南宁 530200）

党参是常用的一种补益中药，别名黄参、防风党参、防党参等，是多年生草本植物。党参味甘，性平，归脾、肺经，具有健脾益肺、补中益气和养血生津等功效，临床上常用于脾肺气虚、食少倦怠、气血不足、面色萎黄等治疗［1，2］。研究表明，以小鼠粪便中的双歧杆菌、乳杆菌、大肠杆菌和肠球菌数量为检测指标，观察给药后小鼠肠道菌群的变化，党参对肠道菌群都有较好的调节作用［3］。现对3种党参的不同炮制品调节脾虚模型大鼠肠道菌群进行研究，分析研究党参哪种炮制品最有利于双歧杆菌、乳杆菌的增长和繁殖。同时，肠道菌群与中医脾虚证也有着密切的联系。相关微生态学的研究表明［4］，大鼠肠道内的双歧杆菌和乳杆菌等有益的生理菌数量与大鼠脾虚症状的严重程度成反比，即大鼠脾虚症状愈严重，其肠道内的双歧杆菌、乳杆菌的数目越少，由此导致肠道菌群出现紊乱的现象；并且脾脏是人和脊椎动物的内脏之一，具有调节新陈代谢的作用，中医称“五脏”之一，谓之“后天之本”，脾脏与机体的各种免疫功能、生理状况、病理状况等各个方面都有着密切的关联［5］。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材 党参生品（产地：山西，批号190101761），购于广东康美药业有限公司，经广西中医药大学附属国际壮医医院钟文主任中药师鉴定，党参为桔梗科植物党参［Codonopsis pilosula（Franch.）Nannf.］、素花党参［C. pilosula Nannf.var.modesta（Nannf.）L.T.Shen］或川党参（C. tangshenOliv.）的干燥根；大黄为蓼科植物药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根和根茎。

1.1.2 仪器 D1810C型电子分析天平（上海申生科技有限公司）；HWS-26型电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司）；KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.1.3 实验动物 SPF级SD雄性大鼠，体重（200±20）g。生产许可证号：SCXK桂2014-0002，动物质量合格证号：0001757，实验动物均由广西医科大学实验动物中心提供。实验鼠分笼饲养于室内，湿度（70±5）%，室温（25±2）℃，动物常规饲养，自由进食和饮水，照明时间随同自然昼夜变化。

1.2 方法

1.2.1 样品制备 取党参生品、米党参、蜜党参各300 g粉碎成粗粉，纯水浸泡，配制0.40 g/mL的党参生品、米党参、蜜党参混悬液药品，对造模大鼠进行灌胃治疗。

将生大黄500 g粉碎，用10倍量水浸泡1 h后，在85℃时煎煮15 min后过滤，静置后取上清液，用旋转蒸发仪在60℃下回收纯水，即得所需大黄溶液［6］。

1.2.2 大鼠脾虚模型的建立 采用大黄苦寒泻下法建立大鼠脾虚模型［7］。在第一天称取大鼠体重后，每只大鼠灌胃100%生大黄制剂3 mL，每天灌胃2次，早上8点1次，晚上6点1次，共9 d。造模成功的表现：大鼠呈现出目光迷离，泄泻，抱团聚集在一起，或者怕冷蜷缩，体重呈现下降趋势，大鼠的毛发黄干枯，精神不振奋，活动量明显减少，手足瘫痪，软弱无力，眯眼的状态。

1.2.3 动物分组及处理 对50只大鼠进行随机的分组，分成5组，分别为正常对照组、模型组、党参生品组、米党参组、蜜党参组，每组10只。其中党参生品组、米党参组、蜜党参组大鼠分别给予党参生品混悬液、米党参混悬液和蜜党参混悬液，灌胃给药，大鼠灌胃时，按照1 mL/100 g体质量进行；正常组、模型组大鼠则给予等量的蒸馏水，每天1次，共14 d。

1.2.4 体质量变化情况的观察 测定并记录给药前后每组大鼠的体质量，均于灌胃前称量。

1.2.5 肠道菌群观察方法

1）革兰氏染色观察。收集大鼠用药前、用药后的粪便，取部分涂片，进行革兰氏染色镜检观察并且记录给药前后大鼠肠道菌群发生何种变化。

2）细菌分离培养。经14 d给药治疗后，于第15天对5组大鼠进行麻醉，严格按照无菌操作解剖动物，静脉取血后处死，5组大鼠每组挑6只，用一次性接种环挑取回盲肠部内容物（再取下各个脏器），分别接种于4种培养基。双歧杆菌培养基（BS）37℃培养48 h，乳杆菌培养基（LBS）37℃培养48 h，大肠杆菌培养基37℃培养48 h［8］，葡萄球菌培养基37℃培养48 h［9］，根据菌落的不同特点进行分类，对每种细菌进行纯培养、革兰氏染色，进行分离鉴别。

1.2.6 统计分析 采用SPSS 20.0软件进行统计分析，数据以Mean±SD表示，正态性数据则采用单因素方差分析（one-way ANOVA）；组间两两比较时，方差齐性采用LSD-t方法检验，方差不齐采用Games-Howell方法检验，检验水准α=0.05。

2 结果与分析

2.1 体征观察

第二天，造模大鼠出现腹泻、大便溏稀、食欲不振、纳少腹胀、扎堆畏寒等脾虚症状，并且在后续造模进行过程中，脾虚症状呈现逐步加重趋势。造模结束后，对大鼠进行灌胃，正常组的大鼠正常活动；模型组的大鼠仍然呈现脾虚症状，倦怠懒动，进食量少等；米党参组的大鼠在服用米党参混悬液后，脾虚症状有所减轻，进食量增加，体重增加，颇有精神，与党参生品组、蜜党参组的大鼠相比较，米党参组大鼠脾虚症状恢复较好。

2.2 大鼠给药前后体重的变化情况

从表1可以看出，与正常组相比，大鼠脾虚模型试验组大鼠体重均显著下降（P＜0.05），表明大鼠脾虚模型造模成功。给药后，与模型组比较，3种党参不同炮制品组和正常组比较，3种党参不同炮制品实验组大鼠体重均显著增加（P＜0.05），表明党参不同炮制品能改善大鼠脾虚症状。

表1 大鼠给药前后体重变化情况（x±s，n=10）

2.3 党参不同炮制品对大鼠肠道中双歧杆菌、乳杆菌的影响

从表2可以看出，与正常组相比，大鼠脾虚模型试验组大鼠体内双歧杆菌和乳杆菌显著下降（P＜0.05），表明大鼠脾虚模型造模成功。给药后，与模型组比较，3种党参不同炮制品组和正常组比较，3种党参不同炮制品试验组大鼠体内双歧杆菌和乳杆菌显著增加（P＜0.05），表明党参不同炮制品能改善大鼠脾虚症状。

表2 党参不同炮制品对大鼠肠道中双歧杆菌、乳杆菌数量的影响 （单位：lg cfu/g）

2.4 党参不同炮制品对大鼠肠道中葡萄球菌、大肠杆菌的影响

从表3可以看出，与正常组相比，大鼠脾虚模型试验组大鼠体内葡萄球菌和大肠杆菌显著增加（P＜0.05），表明大鼠脾虚模型造模成功。给药后，与模型组比较，3种党参不同炮制品组和正常组比较，党参不同炮制品试验组大鼠体内葡萄球菌和大肠杆菌显著降低（P＜0.05），表明党参不同炮制品能改善大鼠脾虚症状。

表3 党参不同炮制品对大鼠肠道中葡萄球菌、大肠杆菌数量的影响（单位：lg cfu/g）

3 小结与讨论

大黄属泻下药，归脾、胃、大肠、心、肝经等［10，11］。长时间以及过量的服用此类药物，会损伤脾胃，并且耗伤正气，会产生脾虚症状。根据中医理论以及国内很多学者的动物脾虚模型建立方法经验，对大鼠灌以大量的大黄水煎液会导致大鼠脾虚，从而引起大鼠肠道内的菌群紊乱［12］。

相关结果证实党参对肠道菌群都有较好的调节作用，对双歧杆菌、乳酸菌的繁殖具有一定的促进作用［3］。通过3种党参不同炮制品的混悬液对脾虚大鼠进行治疗，发现大鼠肠道内双歧杆菌、乳杆菌这两种菌的数量会增多，并且后者使两种细菌增加的数量要比前者多；大鼠肠道内大肠杆菌、葡萄球菌数量会减少，恢复到大鼠体内肠道菌群的正常数量，甚至这两种细菌数量会稍微有所下降。党参不同炮制品的混悬液确实对脾虚证有治疗作用，并且观察肠道内有益菌的数量变化，可知米党参炮制品对于脾虚证的疗效更好。

党参内酯类是重要健脾药效物质基础，挥发油类是燥性成分，党参多糖呈现一定的调节免疫作用［13］。而党参作为整体在动物机体发挥作用过程中，3类成分之间的相互作用尚未论及，其作用靶点、作用机制等更待探究。党参作为补气要药，为常用的治疗及保健药材，产量大、资源丰富、药用价值高、市场需求大、临床上应用广泛。