PLOD3 与LATS1 在人脑胶质瘤中的表达及与临床病理特征、预后的相关性

金建祥，王波定，陈茂送，王洪财，马磊，冯宽

脑胶质瘤是常见的原发性脑肿瘤，临床预后差[1]。虽外科手术、放射疗法和化学疗法的治疗取得了进展，但是恶性神经胶质瘤的预后仍然非常差。尽管WHO 分类可以作为预测患者临床结局的标准，但最近的研究表明，仅凭该标准可能不足以估计患者的预后。因此确定新的潜在生物标志物，以进行早期诊断、预后预测以及新的治疗靶标至关重要。PLOD3 已被提议作为人类H460 细胞放射抗性的生物标志物[2]；哺乳动物大肿瘤抑制激酶1（LATS1）低表达可导致星形细胞瘤、乳腺癌、结肠直肠癌发生[3]，可能是人类癌症类型中重要的肿瘤抑制因子。目前关于PLOD3 与LATS1 在人脑胶质瘤中的表达的研究报道较少，因此本研究拟探讨PLOD3 与LATS1 在人脑胶质瘤中的表达水平及与临床病理特征、预后的相关性，为脑胶质瘤的诊断治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集宁波市医疗中心李惠利医院2015 年1 月至2016 年3 月行手术治疗的星形细胞神经胶质瘤94例为病例组。纳入标准：（1）符合《中国胶质瘤规范化治疗现状》[4]；（2）术后经病理学证实；（3）患者或家属均已提供书面知情同意书。排除标准：（1）合并其他部位肿瘤；（2）临床及随访资料不完整。另收集除恶性肿瘤以外的其他原因（如脑外伤、需要进行减压治疗的严重的颅脑损伤）49 例的脑组织标本为对照组。病例组男58 例，女36 例；年龄42 ～69 岁，平均（59.3±8.5）岁；卡诺夫斯基性能评分（KPS）≤70 分25 例，＞70 分69 例；WHO 等级Ⅰ级12 例，Ⅱ级46 例，Ⅲ级28 例，Ⅳ级8 例。对照组男31 例，女18例；年龄40 ～68 岁，平均（59.4±8.0）岁；KPS评分≤70 分14 例，＞70 分35 例。本研究获本院伦理委员会批准，所有相关患者或家属均已提供书面知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化及判定标准 将标本固定在Bouin溶液（美国Sigma-Aldrich，批号：WS-52636.3）中1 h，用磷酸盐缓冲液冲洗，后用70%、80%、95%和100%的乙醇梯度脱水，包埋切成片。将切片在柠檬酸抗原回收溶液中在湿度箱（中国河南远通化工有限公司）中处理60 min。加入小鼠抗PLOD3、LATS1 多克隆抗体（1∶1 000、1∶2 000，美国Santa Cruz Biotechnology，目 录 号 sc-17320、69653），并在4℃下孵育过夜。使用抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶技术，并以3，3’-二氨基联苯胺（丹麦Dako Denmark，批号：SW-56963）作为发色剂，苏木精复染。使用Eclipse 80i 显微镜（日本Nikon Corporation；放大倍数，×400）在3 个随机选择的高倍视野中，通过计数除PLOD3、LATS1 阳性染色的细胞核之外的所有细胞核，确定 PLOD3、LATS1 阳性细胞的比例。0 ～10%、10%～30%、30%～70%和＞70%的PLOD3、LATS1 阳性细胞得分分别为－、1+、2+和3+。（－）表示PLOD3、LATS1 阴性表达，得分1+、2+和3+表示阳性表达。

1.2.2 随访 病例组术后每3 个月通过电话访问和问卷调查信更新随访信息，从最初的手术日期到死亡计算总生存时间。

1.3 统计方法 采用SPSS 23.0 统计软件进行分析，计数资料比较采用2检验或Fisher 精确检验比较，使用Kaplan-Meier 生存曲线和Cox 回归模型进行生存分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组PLOD3、LATS1 蛋白表达比较 病例组PLOD3 蛋白表达阳性率高于对照组，LATS1 蛋白表达阳性率低于对照组（均P ＜0.05），见表1。

表1 两组PLOD3、LATS1 蛋白表达阳性率比较 例（%）

2.2 PLOD3、LATS1蛋白表达与脑胶质瘤临床病理特征的关系 PLOD3、LATS1 蛋白表达与肿瘤最大径、TNM分期、浸润深度、病理级别、淋巴结转移及复发相关，且肿瘤最大径≥5 cm、TNM分期越高、浸润深度越深、病理级别越高、淋巴结转移及复发患者PLOD3 阳性表达率越高，LATS1 蛋白阳性表达率越低（2≥9.548，均P ＜0.05），见表2。

表2 PLOD3L、LATS1 蛋白表达与脑胶质瘤临床病理特征的关系 例（%）

2.3 脑胶质瘤患者预后情况 94 例自出院后至随访结束存活4 ～72 个月，5年生存率为27.6%（26/94）。PLOD3 阳性和阴性患者5 年总生存率分别为2.94%（2/68）和92.39%（24/26），而LATS1 阳性和阴性患者5 年总生存率分别为55.56%（20/36）和10.34%（6/58）。PLOD3、LATS1 阳性和阴性患者5 年总生存率差异均有统计学意义（2=75.075、22.691，均P ＜0.05）。

2.4 影响脑胶质瘤患者预后单因素分析 肿瘤最大径≥5 cm、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ、浸润深度浸润≥6 cm、有淋巴血管浸润、病理级别高、有复发、PLOD3 阳性及LATS1 阴性患者5 年生存率均显著降低（均P ＜0.05），见表3。

表3 影响脑胶质瘤患者预后单因素分析 例（%）

2.5 脑胶质瘤患者预后影响因素多因素Cox 回归分析 Cox 回归分析显示，TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、病理级别高、PLOD3 表达阳性、LATS1 表达阴性是脑胶质瘤患者预后独立危险因素（均P ＜0.05），见表4。

表4 脑胶质瘤患者预后影响因素多因素Cox 回归分析

3 讨论

PLOD是细胞内膜结合同型二聚体蛋白的一个家族，其中PLOD3 具有胶原半乳糖基转移酶和葡糖基转移酶的活性[5]。已经在肝癌、乳腺癌和子宫内膜间质肉瘤等人类癌症中发现PLOD3 表达升高[6]。本研究发现PLOD3 在神经胶质瘤组织中过表达，且肿瘤最大径≥5 cm、TNM 分期越高、浸润深度越深、病理级别越高、淋巴结转移及复发患者PLOD3阳性表达率越高。因此，PLOD3 过表达可能会导致神经胶质瘤生长，增强局部细胞侵袭和转移，并调节细胞分化。同时，本文针对患者预后进行分析，结果显示PLOD3 表达阳性是脑胶质瘤患者预后独立危险因素（P ＜0.05），这说明PLOD3 过度表达是神经胶质瘤患者的预后不良因素。

LATS1可能在早期有丝分裂中与细胞周期蛋白依赖性激酶1 形成复合物，从而降低H1 组蛋白激酶活性，具有细胞周期抑制剂作用。敲除LATS1 可抑制小鼠肉瘤、卵巢肿瘤进展，这表明LATS1可能起抑癌作用[7]。临床研究表明LATS1在45%的宫颈癌组织标本中表达下调，LATS1 下调与晚期宫颈癌TNM 分期和肿瘤状态呈正相关，表明LATS1 丧失与宫颈癌的进展有关[8]。本研究中，LATS1在神经胶质瘤组织中表达降低，且PLOD3阳性表达与肿瘤最大径、TNM分期、浸润深度、病理级别、淋巴结转移及复发呈负相关，提示LATS1 是神经胶质瘤的抑癌基因。在宫颈癌中，促进LATS1表达可调节细胞活力、增殖、迁移、集落形成，细胞周期分布和肿瘤生长[9]。本研究结果显示LATS1 阴性患者5 年生存率均显著缩短，LATS1 表达阴性是影响脑胶质瘤患者预后的独立危险因素，这与上述讨论一致，再次说明LATS1 低表达是胶质瘤患者的预后不良因素。

综上所述，人脑胶质瘤中PLOD3 表达升高，LATS1 表达降低；PLOD3、LATS1表达与脑胶质瘤患者临床病理特征相关；PLOD3 高表达、LATS1 低表达是神经胶质瘤患者的预后不良因素。