DNA倍体分析联合血清肿瘤标志物筛查宫颈癌价值研究

梁 媛，蔡江义，谢 云，蔡 娜

(1.西北妇女儿童医院医学遗传中心，陕西 西安 710061；2.西安航天总医院病理科，陕西 西安710010； 3.西北妇女儿童医院医学检验中心，陕西 西安 710061)

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一，具有高发病率及病死率[1]。相关数据统计[2]，全球范围内每年宫颈癌新发病例约50万例，年死亡例数约20万，中国约占10.00%。宫颈癌早期治愈率高达90.00%～92.00%，故而宫颈癌早期筛查工作的开展十分重要[3]。目前临床多采用液基薄层细胞学(Thinprep cytologic test，TCT)检查筛查宫颈癌，该项技术具有操作简单特点，故而得到临床广泛运用[4-5]。但在早期宫颈癌筛查过程中，TCT诊断准确性易受到诸多因素影响(如染色技术、取材及制片方法等)[6-7]。脱氧核糖核酸倍体分析检查是一种筛查宫颈癌的新型手段，通过对细胞遗传基因变异过程的观察，来区分异常增生细胞，判断癌前病变[8]。糖类抗原125(Carbohydrate antigen 125，CA125)、糖类抗原19-9(Carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)、癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)是临床常用血清肿瘤标志物，可为宫颈癌筛查提供参考[9-10]。为明确在宫颈癌筛查中血清肿瘤标志物和倍体分析的联用价值，本文对420例行宫颈癌筛查患者展开探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年12月至2020年12月到医院行宫颈癌筛查的患者420例作为研究对象。420例患者年龄24～75岁，平均(38.42±5.39)岁；手术病理检查显：正常或宫颈炎症208例，宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)Ⅰ级72例，CINⅡ级56例，CINⅢ级43例，宫颈癌41例。病例纳入标准：自愿进行宫颈癌筛查者；非经期女性；了解且知情研究内容，自愿加入研究。排除标准：具有盆腔放疗、子宫切除史者；无法配合检查或不适宜检查者；精神疾病者。本研究已经医院医学伦理委员会批准。

1.2 实验方法

1.2.1 DNA倍体分析：检查前，提醒患者样本收集前24 h禁止阴道灌肠、性交及阴道检查，且避开经期。通过窥阴器显露子宫颈，以消毒棉签收集分泌物，利用宫腔刷在子宫颈口沿着顺时针方向转4～6圈，取出宫颈刷并脱去刷头，将刷头尖放于含有细胞保存液的样本管内。制取细胞学薄片，行Feulgen染色。通过全自动细胞DNA倍体分析仪，检测DNA倍体。

1.2.2 血清标志物检测：收集患者清晨状态下空腹静脉血5 ml，在3000 r/min条件下离心约15 min，留取上清液。通过化学发光免疫分析法，检测CA125、CA19-9；借助酶联免疫吸附法，检测CEA水平。

1.3 判定标准 将DNA指数2.5作为临界值用于评估细胞状态。分析结果提示主要为2C细胞，未见异倍体细胞、DNA指数未超过2.5细胞为阴性；细胞增生超过5%，或可见1个及以上DNA指数高于2.5细胞，需实施组织活检为可疑；4倍体细胞增生超过10%，或有3个及以上DNA指数高于2.5的细胞为阳性。CA19-9阳性>40 μg/L，CA19-9阳性>35 kU/L,CEA阳性>5 μg/L。

1.4 观察指标 观察DNA倍体分析与血清肿瘤标志物检测结果，分析以上两种检测方式单独及联合筛查宫颈癌价值。敏感性=真阳例数÷(真阳例数+假阴例数)×100%，特异性=真阴例数÷(真阴例数+假阳例数)×100%，准确性=(真阳例数+真阴例数)÷总例数×100%。

2 结 果

2.1 病理学检测结果分析 病理学检查显示，阳性检出率为9.76%(41/420)。其中检出阴性、宫颈炎208例(49.52%)，宫颈癌41例(9.76%)，CINⅠ72例(17.14%)、CINⅡ56例(13.33%)、CINⅢ43例(10.24%)。

2.2 DNA倍体与病理学检测阳性比较 DNA倍体检查显示：阴性275例，可疑81例，阳性64例，见表1。DNA倍体阳性检出率15.24%(64/420)和病理学检查9.76%(41/420)比较有统计学差异(χ2=5.758，P=0.016)，见表1。

表1 DNA倍体与病理学检测阳性比较(例)

2.3 血清肿瘤标志物检测结果 正常或宫颈炎、CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌组CA125、CA19-9、CEA水平比较，差异有统计学意义(均P<0.05)，见表2。

表2 血清肿瘤标志物检测结果

2.4 DNA倍体分析、血清肿瘤标志物筛查的敏感度及特异度 DNA倍体分析筛查宫颈癌敏感性92.68%(38/41)，特异性93.14%(353/379)，准确性93.10%(391/420)；CA125筛查宫颈癌敏感性73.17%(30/41)，特异性50.13%(190/379)，准确性52.38%(220/420)；CA19-9筛查宫颈癌敏感性78.05%(32/41)，特异性56.99%(216/379)，准确性59.05%(248/420)；CEA筛查宫颈癌敏感性60.98%(25/41)，特异性60.16%(228/379)，准确性60.24%(253/420)。DNA倍体分析+CA125+CA19-9+CEA筛查宫颈癌敏感性、特异性及准确性高于DNA倍体分析、CA125、CA19-9、CEA(χ2=5.145、7.405、5.145、12.030，10.162、13.439、11.263、12.864，8.462、13.854、12.463、10.934；P=0.023、0.007、0.023、0.001，0.006、0.001、0.004、0.005，0.016、0.007、0.006、0.004)。见表3。

表3 DNA倍体分析、血清肿瘤标志物筛查的敏感度及特异度(例)

3 讨 论

以往临床多采用宫颈细胞学涂片检查进行宫颈癌早期筛查，该种检查方法具有费用少、成本低、运用范围广泛等优势，但在收集、制作样本过程中，易出现涂片不均匀、上皮细胞重叠，造成病变细胞无法被及时发现，促使宫颈癌筛查假阴性显著增加[11-12]。

近年来相关研究发现[13-14]，正常人体细胞内DNA数量处于稳定状态，在出现肿瘤时，病变宫颈上皮细胞核中DNA含量及染色体发生改变，此种现象改变远早于病理学改变，多是因基因突变而致。基因突变可造成染色体重组，致使染色体片段增多或丢失，DNA含量也随之发生相应改变[15]。故而通过DNA倍体分析，可客观反映细胞遗传基因改变过程，区分异常增生细胞，为癌前病变提供可靠依据。DNA为细胞生长、繁殖及分化基础，属于遗传物质，其功能与结构异常与细胞癌变存在密切关系[16]。非整倍体染色的形成是肿瘤发生的重要标志之一，相关研究表示[17]，在诸多高度鳞状上皮内病变(HSIL)、宫颈癌患者体内均可发现DNA倍体异常细胞。DNA倍体分析技术通过将病变组织细胞放于细胞培养液内，经过离心及分层等操作，获取所需成分，从而减少杂质对检查结果的干扰，促使细胞结构和形态更加清晰。在此条件下，采用全自动细胞DNA倍体分析仪技术，可有效避免人为观察所造成的误差，从而增加临床诊断结果的准确性及客观性。本研究中，DNA倍体分析发现随着患者宫颈病变严重程度的增加，DNA指数高于2.5的细胞检出例数也随之增加，尤其是宫颈癌患者。可见通过DNA倍体分析能为宫颈癌早期筛查提供科学依据。

血清肿瘤标志物是一种反映肿瘤细胞存在及生长的化学类物质，由宿主和肿瘤间相互作用生成，或单由肿瘤细胞生成，广泛存在于肿瘤组织、组织液及血液内。于肿瘤形成早期肿瘤标志物便会出现[18]。CA125属于临床常用肿瘤标志物之一，利用CA125单克隆抗体区分高分子糖蛋白，多见于卵巢癌患者宫颈内膜、子宫内膜及输卵管内。当患者体内出现癌变细胞时，CA125水平会出现显著增高。本研究中，宫颈癌组CA125水平和正常或炎症、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组比较，均显著较高，同样提示了在宫颈癌筛查中CA125可起到良好作用。但值得注意的是，CA125水平异常增高也可见于部分良性病变，如卵巢囊肿、盆腔炎、肝炎等，因此还应将其和其他检验方式进行联合运用，以提升临床诊断准确性。CA19-9为细胞膜上脂质，于血清内呈糖蛋白方式存在，由消化道癌变细胞分泌合成，因此被临床广泛用于消化道部位恶性肿瘤鉴别诊断及疗效评估。本研究中，宫颈癌组CA19-9水平较正常或炎症、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组高，提示CA19-9可指导宫颈癌筛查工作的进行。CEA为一种含多糖蛋白复合物，属于非特异性血清肿瘤标志物，其水平显著增加多见于乳腺癌、肺癌及胰腺癌。CEA多存在于肿瘤细胞表面，结构十分复杂，可在多种恶性病变中表达，和肿瘤组织大小、浸润程度及转移存在密切关系。

本研究中，宫颈癌组CEA水平与正常或炎症、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组比，显著较高，说明在宫颈癌筛查中CEA可起到良好参考作用。无论是DNA倍体分析还是血清肿瘤标志物检查均存在一定局限性，为保证宫颈癌筛查质量，本研究提出将以上两种检测技术进行联合运用。本研究结果显示：DNA倍体分析+CA125+CA19-9+CEA筛查宫颈癌敏感性、特异性及准确性与DNA倍体分析、CA125、CA19-9、CEA比较，均明显较高，提示DNA倍体分析结合血清肿瘤标志物筛查宫颈癌的价值更高。虽然本项研究已经初步得出在宫颈癌早期筛查中DNA倍体分析与血清肿瘤标志物具有良好联合运用价值，但本次研究还存在一定局限性，如未充分验证不同肿瘤标志物和DNA倍体分析的联用价值、肿瘤标志物指标减少等，后期还应明确不同肿瘤标志物与DNA倍体检查的不同价值，寻求一种经济且准确性较高的联合检测方式，以减轻患者经济负担。

综上所述，宫颈癌对女性身体健康危害性较为显著，早期诊断工作的开展十分必要。DNA倍体分析、血清肿瘤标志物检测均能在早期发现细胞癌变，促进临床诊疗工作的开展，尤其是两种检测方式联合运用价值更高。