网状纤维染色、Masson三色染色在子宫平滑肌肿瘤良恶性鉴别中的应用价值分析

张涛涛（焦作市人民医院病理科，河南 焦作454350）

子宫平滑肌瘤是多发于30～50岁间的女性生殖器官常见肿瘤，20岁以下女性发病率较低［1］。子宫平滑肌瘤主要由子宫平滑肌细胞增生及纤维结缔组织支持而形成，早期症状不显，多由常规体检时发现并确诊。大多数子宫平滑肌瘤肿瘤均为良性结节，然而也存在少部分恶性，如何在早期对子宫肌瘤进行良恶性鉴别诊断，对于患者生存和预后非常关键。现阶段对于子宫肌瘤良恶性诊断方式主要通过病理活检来判断是否出现肿瘤性坏死，而常规的苏木精-伊红（HE）染色得到的切片形态难以观察到肿瘤性坏死特征［2］，因此，急需在常规HE染色的基础上，再通过胶原纤维染色（Masson）、网状纤维染色、肌肉组织染色（磷钨酸苏木素）、脂肪染色（苏丹Ⅲ）、糖原染色（PAS）以及弹力纤维染色等特殊染色方法对肿瘤良恶性质进行进一步鉴别［3］。本研究对42例子宫平滑肌瘤患者肿瘤组织切片进行网状纤维染色以及胶原纤维Masson三色染色，观察并对比两种染色方式是否能够鉴别肿瘤的良恶性。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年10月～2019年10月我院收治的需进行手术切除的子宫平滑肌瘤患者42例，年龄28～55（44.2±5.8）岁。

1.2 方法

1.2.1 标本收集 收集肿瘤组织标本，选择坏死最明显区域制作病理学切片，用4%多聚甲醛固定30min，脱水后用石蜡包埋，制成厚度约为4μM的切片，进行后续染色实验。

1.2.2 HE染色 将4μM石蜡切片置于含Ⅰ二甲苯的染缸中，5min后再与Ⅱ二甲苯反应，以脱蜡，再用Ⅰ、Ⅱ无水乙醇浸泡后冲洗，再倒入蒸馏水中浸泡2min。再用苏木精染色液染色10min，伊红染色液染色2min，蒸馏水洗去浮色，Ⅰ、Ⅱ无水乙醇脱水2min，Ⅰ、Ⅱ二甲苯透明3min，封片干燥。

1.2.3 网状纤维染色 采用Gomori’s嗜银染色对4μM石蜡切片进行处理。先将石蜡切片脱蜡至蒸馏水中，用高温酸钾溶液染色3min后用蒸馏水冲洗，草酸溶液漂白1min后冲洗，硫酸铁铵溶液染色1min后冲洗，氨银溶液浸染5min后冲洗，甲醛溶液还原1min后冲洗，氯化金溶液处理15min后冲洗，再用硫代硫酸钠溶液固定2min后冲洗，最后用Ⅰ、Ⅱ无水乙醇脱水2min，Ⅰ、Ⅱ二甲苯透明3min，封片干燥。

1.2.4 Masson染色 将4μM石蜡切片于Bonin液中脱水包埋后脱蜡至蒸馏水中，用Weigert铁苏木素染色10min后用蒸馏水冲洗，再用1%的盐酸酒精分化后冲洗，丽春红酸性品红溶液染色10min后冲洗，1%的磷钼酸溶液染色10min，再用2%醋酸苯胺蓝溶液染色5min，1%冰醋酸处理2min，再用Ⅰ、Ⅱ无水乙醇脱水3次，每次2min，Ⅰ、Ⅱ二甲苯透明3min，封片干燥。

1.2.5 染色结果判定 网状纤维染色结果呈黑色，胶原纤维Masson染色结果呈绿色。当纤维结构呈蜂窝状或玻璃样时为肿瘤性坏死，而纤维呈线性时为部分坏死，纤维缺失则认为是无肿瘤性坏死。参照刘恩彬等［4］的评估方式，对坏死区域的染色强度进行评分：未见明显纤维及染色记0分，偶见稀疏纤维，同时着色较少且分布零散记1分，较多纤维环绕交互但染色分布稀疏记2分，纤维及染色密集分布记3分。取平均值。

1.3 统计学处理 数据采用SPSS 19.0统计学软件进行处理。计量资料采用±s表示，两组间比较行t检验，多组间比较行SNK-q检验；计数资料采用例（百分率）表示，行χ2检验。P＜0.05示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病理学分型分析 对42例子宫平滑肌瘤患者进行网状纤维染色以及Masson染色，观察到与正常平滑肌细胞相似，显微镜下观察到长杆状细胞核，肿瘤细胞呈梭子形或束状以及旋涡状排列，且肿瘤直径以及细胞分化程度较正常的良性肿瘤18例，细胞结构呈大小不一、分裂旺盛、细胞核及染色质异常，颜色不均匀，细胞排列紧密且呈圆形及多边形的恶性肿瘤14例，以及部分细胞偶有异型，细胞核及染色质大小、颜色正常且均匀的恶性程度未定的肿瘤10例。

2.2 不同恶性程度患者网状纤维、Masson染色评分分析比较 子宫平滑肌肿瘤坏死区域内恶性肿瘤的网状纤维染色评分为2.85±0.49分,显著高于恶性程度未定肿瘤的1.18±0.56分及良性肿瘤的0.35±0.31分，差异有统计学意义（P＜0.05）；Masson染色评分结果显示，恶性肿瘤与恶性程度未定、良性肿瘤染色评分比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见附表。

附表 不同恶性程度患者网状纤维、Masson染色评分分析比较（±s，分）

附表 不同恶性程度患者网状纤维、Masson染色评分分析比较（±s，分）

?

3 讨论

子宫平滑肌肿瘤是由结缔组织及平滑肌组织增生形成的妇科肿瘤，多为良性，然而也有报道称，约0.4%～0.8%左右的良性肿瘤会进一步演变成恶性肿瘤［5］，鉴于子宫平滑肌肿瘤早期症状不显，晚期出现恶性转移以后才被发现，而晚期肿瘤治疗效果十分有限，严重影响患者的生存率、预后及生命安全［6］。因此，如何在早期对子宫平滑肌瘤的肿瘤良恶性进行诊断鉴别，将病情控制在早期，对患者而言意义重大。

现阶段临床常用HE染色辅助网状纤维染色及Masson染色的方式对子宫平滑肌瘤的进行鉴别和筛查。本次研究也采用这种方式，对42例患者肿瘤切片进行病理活检，结果显示，肿瘤性质为良性者18例，恶性程度未定者10例、恶性者14例。分别用网状纤维染色以及Masson三色染色对肿瘤切片染色程度进行评分发现，Masson染色结果中恶性肿瘤、恶性程度未定肿瘤以及良性肿瘤的评分，无显著差异（P＞0.05），而网状纤维染色结果中，恶性肿瘤的评分明显高于恶性程度未定肿瘤以及良性肿瘤（P＜0.05），表明网状纤维染色在子宫平滑肌肿瘤的良恶性鉴别中作用效果更突出。现阶段临床对于子宫平滑肌肿瘤良恶性的鉴别和诊断多通过电镜下观察是否出现肿瘤性坏死来判断的，然而在临床实际运用中，常因平滑肌肿瘤的凝固性坏死和缺血性坏死交替出现，常规的HE染色及免疫组化法难以达到良好的鉴别效果［7］，因此还需通过特殊染色法来观察细胞形态结构辅助判断。

网状纤维染色是临床和实验室用于区别癌症以及肉瘤的重要手段，不仅在血管、神经系统以及淋巴系统等癌症鉴别中表现优异，也同样用于鉴别子宫平滑肌瘤肿瘤良恶性［8］。通过银氨溶液浸染后甲醛溶液还原，将分部与子宫平滑肌肿瘤切片中的网状纤维染成黑色，再在电镜下观察样片中黑色区域是否出现纤维组织断裂、塌陷等形态结构的改变，用以区分良性肿瘤及恶性肿瘤。Masson三色染色法最早由结缔组织染色法改良而成，通过对肿瘤组织进行染色，来判断其是否较为胶原纤维或肌源或神经纤维［9］。而在临床及科研实验室中，Masson染色将分布在肿瘤切片中的胶原纤维组织染色绿色，观察绿色区域分布的细胞形态结构，来区分纤维组织及平滑肌组织。

对于良性子宫平滑肌肿瘤而言，肿瘤坏死程度较低，细胞结构保存较为完好，多呈蜂窝状以及毛玻璃样，而纤维状破坏成线性或缺失时肿瘤结构改变，增生异常，坏死程度高。网状纤维染色在子宫平滑肌肿瘤的鉴别能力更强，显色相比Masson染色更好。原因可能在于，Masson染色的颜色为绿色，而肿瘤坏死过程中胶原纤维的增色颜色与之相近，难以很好区别。而网状纤维则不存在此问题，不仅可简单观察到黑色区域的面积大小，还可以通过网状纤维的破坏程度进行直观的对比。这也与王雪晴等［10］的研究结论相符。

综上所述，本次实验通过对子宫平滑肌肿瘤进行网状纤维染色以及Masson染色，对比染色后肿瘤坏死程度来鉴别肿瘤的良恶性，发现网状纤维染色表现出优异的显色和鉴定能力，临床应用价值更高。