桑叶水提物及异槲皮苷成分抗石斑鱼虹彩病毒作用机制研究

李鹏飞 肖贺贺 刘明珠 李梦梦 黄亚明 余庆

摘要：【目的】探究桑葉提取物成分对石斑鱼虹彩病毒（SGIV）的抑制作用，并对其抗病毒机制进行研究，为利用桑叶提取物成分研发抗SGIV药物提供理论依据，也为开发高效安全的新型抗病毒渔用药物提供新思路。【方法】利用石斑鱼脾脏组织细胞系（GS），通过光学显微镜观察及CCK-8检测分析桑叶水提物（Morus alba L. water extracts，MAE）及其活性成分异槲皮苷（Isoquercetin，IQ）的安全工作浓度，然后使用实时荧光定量PCR及核酸适配体荧光分子探针技术（Q2-AFMP）分析MAE和IQ对SGIV的抗病毒效果;通过分析SGIV感染GS细胞中MCP基因和VP19基因的表达水平，分析IQ对SGIV的粒子结构及其与宿主细胞表面结合、侵入宿主细胞和在宿主细胞中复制的影响，探究IQ体外抗SGIV的作用机制。【结果】桑叶源化合物成分（MAE和IQ）对GS细胞的最高安全工作浓度为：MAE≤10.0 mg/mL，IQ≤1000.0 μg/mL。与接入SGIV的GS细胞相比，在以安全工作浓度的MAE（10.0 mg/mL）和IQ（1000.0 μg/mL）分别接入SGIV孵育感染的GS细胞后细胞病变（CPEs）明显减少，MCP基因和VP19基因的相对表达量均呈极显著下降趋势（P<0.01，下同），GS细胞荧光值也极显著降低，表明桑叶源化合物成分能有效抑制SGIV感染。以IQ处理SGIV孵育感染的GS细胞，其细胞内MCP基因和VP19基因的相对表达量均呈极显著下降趋势，提示IQ能破坏SGIV的粒子结构，并干扰SGIV对宿主细胞的吸附、侵入和复制。【结论】MAE和IQ对SGIV具有良好的抗病毒效果，其中IQ能在病毒吸附、侵入和复制阶段发挥抗病毒作用，即桑叶源化合物成分在防治SGIV感染方面具有潜在的应用价值，可作为研发抗SGIV感染的有效药用成分。

关键词： 石斑鱼虹彩病毒（SGIV）;桑叶水提物（MAE）;异槲皮苷（IQ）;抗病毒机制

Abstract：【Objective】This study aimed to explore the antiviral effects and mechanisms of Morus alba L. extracts on grouper iridovirus（SGIV）， and provide data support and theoretical basis for developing anti-SGIV drugs with Morus alba extracts and offer new ideas for developing efficient and safe antiviral fishing drugs. 【Method】The safe working concentrations of M. alba water extracts（MAE） and its active component isoquercetin（IQ） were determined on grouper spleen tissue cell line（GS） by light microscope observation and CCK-8 cell viability assay. Then， real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR） and aptamer Q2-based fluorescent molecular probe assay（Q2-AFMP） were used to analyze the antiviral effects of MAE and IQ against SGIV in vitro. RT-qPCR was further applied to detect the expression level of MCP gene and VP19 gene in SGIV infected cells， and explore the antiviral mechanism of IQ， including the effects of IQ onSGIV particles， SGIV bound to host cell surface， SGIV invasion and replication in host cells. 【Result】The safe working concentrations of M. alba extracts on GS cells were that， MAE≤10.0 mg/mL，IQ≤1000.0 μg/mL. The research results of MAE and IQ against SGIV showed that， compared to GS cells only incubated with SGIV， the cytopathic effects（CPEs） of GS cells incubated with both SGIV and M. alba extracts（10.0 mg/mL MAE and 1000.0 μg/mL IQ） in the experimental groups were greatly reduced. MCP gene and VP19 gene in experimental group cells decreased extremely significantly（P<0.01， the same below）， and the fluorescence intensity of GS cells decreased significantly. The above results indicated that MAE and IQ could effectively combat SGIV infection. GS cells incubated with SGIV treated with IQ showed extremely significant decrease in the relative expression of both the intracellular MCP gene and the VP19 gene， it showed that， IQ could destroy the SGIV particles structure and interfere with the adsorption， invasion and replication of SGIV to host cells. 【Conclusion】MAE and IQ have great antiviral effects on SGIV， and IQ plays an antiviral role in the stages of virus adsorption， invasion and replication.M. alba extracts have potentials in the treatments of SGIV infection， and can be used in the development of fishery drugs for inhibiting SGIV infection.

Key words： grouper iridovirus（SGIV）; Morus alba L. water extracts（MAE）; isoquercetin（IQ）; antiviral mechanism

0 引言

【研究意义】石斑鱼（Epinephelus spp.）隶属于鲈形目（Perciformes）鮨科（Serranidae），是水产业中的一种重要海水养殖鱼类，其肉质鲜美，营养丰富，具有蛋白含量高、脂肪含量低的食用优点，是海水养殖最名贵的品种之一（王大鹏等，2012）。我国的石斑鱼养殖产量需求一直居高不下，早在2017年就达13万t（李鹏飞等，2018）。我国石斑鱼养殖以南方地区为主，主要分布在南海附近，近年来随着人工苗种繁育技术的迅速发展、养殖环境的不断优化及养殖方式的优良改进，石斑鱼养殖产业逐步进入蓬勃发展阶段（肖贺贺等， 2019）。随着水产养殖规模的迅速扩大，导致鱼类疾病的暴发率不断上升，严重威胁着石斑鱼养殖业的可持续健康发展。石斑鱼虹彩病毒（Singapore grouper iridovirus，SGIV）是石斑鱼养殖生产中最严重的病毒性病原之一，给石斑鱼养殖业带来重大经济损失（Li et al.，2015，2018）。SGIV是一种致病性高、传染速度快的鱼类病原微生物，在扫描电镜下观察其结构呈六边形，直径约200 nm（Qin et al.，2003;Chao et al.，2004;Lü et al.，2005;Huang et al.，2015）。感染SGIV的石斑鱼表现出食欲不振及肝脾脏肿大的典型症状，且在感染后短期内即出现大批量死亡（Qin et al.，2003），因此研发可有效抗SGIV感染的药物对保障石斑鱼养殖业健康发展具有重要意义。【前人研究进展】药物防治仍是目前控制水产病害的主要手段，但长期使用抗生素等化学药物极易产生耐药性和药物残留问题，且许多国家已严令禁止抗生素在水产养殖中滥用。疫苗接种是预防和控制病毒传染最有效的途径。Ouyang等（2012）研发出SGIV灭活疫苗，通过对石斑鱼进行腹腔注射SGIV灭活疫苗，发现在疫苗接种后30 d内可对人工感染SGIV的石斑鱼产生保护作用，石斑鱼存活率在90%以上。疫苗作为控制病毒性病害的预防策略，必须在鱼体感染病毒之前进行预防性接种，而不能用于治疗鱼类病毒性疾病。此外，全病毒灭活疫苗尚存在一定缺陷，如疫苗具有未完全灭活的风险，且水生动物的免疫剂量较陆生动物更大、使用成本更高等（Davis and McCluskie，1999;Sommerset et al.，2005）。因此，研发新型高效的抗病毒功能产品对控制石斑鱼养殖中SGIV感染势在必行。药用植物中通常含有黄酮类、苷类、有机酸、糖类、挥发油、生物碱及氨基酸等多种生物活性成分，这些生物活性成分不仅发挥抑菌和抗病毒等功效，还能促进动物生长及增加体重，同时具有增强机体免疫的能力（Shang et al.，2011;Shi et al.，2012;Kwon et al.，2015;Wang et al.，2015）。已有研究证实，绿茶（Wang et al.，2016）、紫花地丁（Yu et al.，2019b）、番石榴叶（陈小龙，2020）、广西莪术（Liu et al.，2020b）、八角茴香（Liu et al.，2020c）及金银花（Liu et al.，2020d）等多种药用植物提取物对水生病毒具有显著的抑制效果。桑叶（Morus alba L.）是我国传统的中药，安全且无毒副作用，异槲皮苷（Isoquercetin，IQ）是桑叶的主要活性成分之一，具有良好的抑菌、抗病毒及抗肿瘤等功效，药用价值极高（穆春旭等，2012;杨永玉，2012）。近年来，利用桑叶活性化学成分抗病毒的研究已有较多报道，如桑叶提取物能有效抑制单纯疱疹病毒（HSV）（郑民实，1990）、人类免疫缺陷病毒（HIV）（Tierney et al.，1995）及呼吸道合胞病毒（RSV）（戴开金等，2009）等，但尚缺乏系统的作用机制研究。【本研究切入点】SGIV是严重威胁石斑鱼养殖业发展的病毒性病原之一，其感染致死率在90%以上，因此迫切需要研发出能有效抵抗SGIV感染的药物以确保石斑鱼养殖业的可持续健康发展。【拟解决的关键问题】基于已知的桑叶提取物药理作用及其抗病毒活性，探究桑叶水提物成分对SGIV的抑制作用，并对其抗病毒机制进行深入研究，为利用桑叶提取物成分研发抗SGIV药物提供理论依据，也为开发高效安全的新型抗病毒渔用药物提供新思路。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

桑叶粉碎制成粉末，称量25 g桑叶粉末浸泡于500 mL水中，4 ℃浸泡过夜，次日将桑叶药包及浸泡液置于锅中煎煮获得桑叶水提物（M. alba L. water extrasts，MAE）母液，并定容至初始母液濃度为250.0 mg/mL。MAE经0.22 μm无菌滤膜过滤后，-20 ℃保存备用。桑叶主要活性化合物成分异槲皮苷（IQ）购自成都瑞芬思生物科技有限公司，以二甲硫亚砜（DMSO）溶解，并定容至初始浓度为100.0 mg/mL。石斑鱼脾脏组织细胞系（Grouper spleen，GS）由广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室建立，石斑鱼虹彩病毒广西株（SGIV-GX）分离自广西人工养殖的珍珠龙胆石斑鱼（Xiao et al.，2019）。

1. 2 细胞安全工作浓度确定

将GS细胞接种至96孔细胞培养板，28 ℃培养18 h。试验组GS细胞加入稀释至不同浓度的MAE和IQ进行孵育培养，对照组GS细胞不作任何处理。培养24和48 h时，分别于光学显微镜下进行细胞形态观察。培养48 h后向各处理组GS细胞中加入10 μL CCK-8溶液，室温避光孵育4 h，然后采用全波长扫描酶标仪检测各处理组GS细胞在450 nm处的吸光值，设3个重复。将测得的吸光值带入公式（1）计算各处理组GS细胞的存活率：

1. 3 实时荧光定量PCR检测SGIV感染情况

将GS细胞接种至12孔细胞培养板，28 ℃培养18 h后收集各孔细胞及其上清液，3000×g离心3 min，收集细胞沉淀并提取各处理组GS细胞样品总RNA，再用HiFiScript cDNA Synthesis Kit试剂盒反转录合成cDNA。以cDNA为模板、β-actin基因为内参基因，利用实时荧光定量PCR检测SGIV主要衣壳蛋白MCP基因和囊膜蛋白VP19基因的表达情况，每组样品均设3个重复。实时荧光定量PCR扩增引物序列信息见表1。

1. 4 基于核酸适配体Q2的荧光分子探针检测SGIV感染情况

核酸适配体是通过指数富集配体系统进化技术筛选获得能高特异性识别结合靶标物质的单链核酸（Li et al.，2018;Yu et al.，2019a）。Q2是本课题组筛选获得能高特异性高亲和性识别SGIV感染细胞的核酸适配体（Li et al.，2015，2018），其5'端用6-羧基荧光素（FAM）进行標记。核酸适配体FAM-Q2序列信息为5'-FAM-GACGCTTACTCAGGTGTGACTCGTATGTCCATGGCCGCATATTGGGAAGGTTGG TTTGGACTATGTGGAAGTTCGAAGGACGCAGAT GAAGTCTC-3'。将GS细胞接种至12孔细胞培养板，对各处理组GS细胞进行处理后收集各孔细胞，GS细胞与FAM-Q2探针在4 ℃避光条件下孵育30 min，3000×g离心3 min，弃上清液，以PBS轻轻漂洗后将细胞沉淀重悬于200 μL PBS中，使用流式细胞仪检测分析各处理组GS细胞荧光值（495/535 nm）的变化情况。每组样品均设3个重复。

1. 5 MAE和IQ体外抗SGIV效果分析

将GS细胞接种至12孔细胞培养板，28 ℃培养18 h。具体分组如下：对照组1（CK1）GS细胞正常培养;对照组2（CK2）GS细胞接入4 μL SGIV-GX（107 TCID50/mL），28 ℃继续培养;试验组GS细胞接入安全工作浓度的药物（MAE和IQ）及SGIV-GX，28 ℃继续培养。培养48 h后于光学显微镜下观察各处理组的GS细胞，同时收集各处理组细胞样品分别进行实时荧光定量PCR和Q2-AFMP检测，分析MAE和IQ体外抗SGIV的效果。每组样品均设3个重复。

1. 6 IQ体外抗SGIV作用机制研究

1. 6. 1 IQ对SGIV-GX粒子结构的影响 将SGIV-GX与稀释至安全工作浓度的IQ在4 ℃下孵育2 h，然后在4 ℃下25000×g离心2 h，弃上清液，将离心得到的SGIV-GX粒子重悬于TN缓冲液中;对照组为SGIV-GX与L15培养基共同孵育、离心收集并重悬。然后将SGIV-GX悬液接入12孔细胞培养板的GS细胞中，28 ℃感染48 h，收集各孔的细胞样品进行实时荧光定量PCR检测。每组样品均设3个重复。

1. 6. 2 IQ对SGIV-GX吸附于GS细胞表面的影响

将GS细胞接种至12孔细胞培养板，28 ℃培养18 h。稀释至安全工作浓度的IQ与SGIV-GX混匀后接入12孔细胞培养板的GS细胞中，4 ℃下孵育1 h;对照组仅接入SGIV-GX。孵育结束后弃上清液，以L15培养基清洗GS细胞2次，28 ℃继续培养12 h。收集各孔细胞样品进行实时荧光定量PCR检测。每组样品均设3个重复。

1. 6. 3 IQ对SGIV-GX侵入宿主细胞的影响 将GS细胞接种至12孔细胞培养板，28 ℃培养18 h。SGIV-GX与冰上预冷的L15培养基混匀，然后接入12孔细胞培养板的GS细胞中，4 ℃下孵育1 h，使SGIV-GX吸附于宿主细胞表面。孵育1 h后弃上清液，将稀释至安全工作浓度的IQ加入到各孔细胞中;对照组则接入L15培养基进行处理。28 ℃培养2 h后弃上清液，用L15培养基清洗GS细胞;28 ℃继续培养10 h，收集各孔细胞样品进行实时荧光定量PCR检测。每组样品均设3个重复。

1. 6. 4 IQ对SGIV-GX在宿主细胞中复制的影响

将GS细胞接种至12孔细胞培养板，28 ℃培养18 h。SGIV-GX与冰上预冷的L15培养基混匀，然后接入12孔细胞培养板的GS细胞中，4 ℃下孵育1 h，移除含SGIV-GX的L15培养基，再加入L15培养基，28 ℃继续培养2 h，使SGIV-GX进入宿主细胞。28 ℃培养2 h后弃上清液，加入稀释至安全工作浓度的IQ;对照组则接入L15培养基进行处理。28 ℃继续培养10 h后，收集各孔细胞样品进行实时荧光定量PCR检测。每组样品均设3个重复。

1. 7 统计分析

采用GraphPad Prism 6和Excel 2010对试验数据进行处理并制图，并利用SPSS 17.0分别进行单因素方差分析（One-way ANOVA）和Duncans多重比较。

2 结果与分析

2. 1 MAE和IQ对GS细胞的安全工作浓度

以不同浓度的MAE和IQ分别与GS细胞孵育48 h，通过光学显微镜观察GS细胞形态，并采用全波长扫描酶标仪检测GS细胞存活率。由图1-A可看出，在安全工作浓度范围（MAE≤10.0 mg/mL，IQ≤1000.0 μg/mL）内，桑叶源化合物成分（MAE和IQ）与GS细胞孵育培养48 h后，GS细胞基本能保持正常生长，细胞形态与对照组的正常GS细胞一致，但桑叶源化合物成分浓度高于安全工作浓度后，GS细胞出现明显的形态变化，具体表现为细胞呈不同程度的皱缩、逐渐变圆或脱离细胞培养板等。使用CCK-8溶液进一步检测各处理组GS细胞的存活率，结果（图1-B）显示，MAE≤10.0 mg/mL时GS细胞的存活率与对照组的正常GS细胞无显著差异（P>0.05，下同），但MAE>10.0 mg/mL后GS细胞的存活率极显著低于对照组正常GS细胞（P<0.01，下同）;IQ≤1000.0 μg/mL时，试验组GS细胞的存活率虽然极显著低于对照组的正常GS细胞，但光学显微镜观察结果显示GS细胞保持正常生长。因此，确定桑叶源化合物成分对GS细胞的最高安全工作浓度为：MAE≤10.0 mg/mL，IQ≤1000.0 μg/mL。

2. 2 MAE和IQ体外抗SGIV-GX的效果

2. 2. 1 光学显微镜观察结果 光学显微镜观察结果（图2）显示，在仅接入SGIV-GX的CK2组GS细胞中出现大量典型细胞病变（Cytopathic effects，CPEs）。与CK2组的GS细胞相比，将安全工作浓度的MAE（10.0 mg/mL）和IQ（1000.0 μg/mL）分别接入经SGIV-GX孵育感染的GS细胞后，CPEs均明显减少，说明桑叶源化合物成分（MAE和IQ）能有效抑制SGIV感染GS细胞。

2. 2. 2 实时荧光定量PCR检测结果 如图3所示，与仅接入SGIV-GX的CK2组GS细胞相比，试验组GS细胞接入安全工作浓度的桑叶源化合物成分（MAE和IQ）共同孵育后，GS细胞中MCP基因和VP19基因的相对表达量均呈极显著下降趋势，表明桑叶源化合物成分能有效抑制SGIV-GX感染，且具有剂量依赖性。

2. 2. 3 Q2-AFMP检测结果 使用流式细胞仪检测分析各处理组GS细胞荧光值的变化情况，结果（图4）发现，与仅接入SGIV-GX的GS細胞相比，试验组GS细胞加入安全工作浓度的桑叶源化合物成分（MAE和IQ）共同孵育后，GS细胞荧光值极显著降低，且随着MAE和IQ浓度的增加GS细胞荧光强度越弱，表明MAE和IQ具有抑制SGIV-GX感染的作用。

2. 3 IQ抗SGIV-GX的作用机制

2. 3. 1 IQ对SGIV-GX粒子结构的影响 如图5所示，与仅接入SGIV-GX的对照组GS细胞相比，将IQ处理SGIV-GX接入试验组的GS细胞后，细胞中MCP基因和VP19基因的相对表达量均呈极显著下降趋势，提示IQ是通过破坏SGIV-GX粒子结构而发挥抗病毒作用。

2. 3. 2 IQ对SGIV-GX与宿主细胞表面结合的抑制作用 如图6所示，与仅接入SGIV-GX的对照组GS细胞相比，将IQ处理SGIV-GX接入试验组GS细胞后，细胞中MCP基因和VP19基因的相对表达量均呈极显著下降趋势，即吸附于宿主细胞上的病毒数量明显少于对照组GS细胞。故推测在SGIV-GX感染GS细胞的过程中，IQ能有效抑制SGIV-GX与宿主细胞表面结合位点的结合。

2. 3. 3 IQ对SGIV-GX侵入宿主细胞的抑制作用

如图7所示，与仅接入SGIV-GX的对照组GS细胞相比，将IQ接入经SGIV-GX感染的试验组GS细胞后，细胞中MCP基因和VP19基因的相对表达量均呈极显著下降趋势，说明侵入宿主细胞的病毒数量明显少于对照组GS细胞。可见，IQ能在SGIV-GX侵入宿主细胞阶段发挥抑制作用。

2. 3. 4 IQ对SGIV-GX在宿主细胞中复制的抑制作用

试验组GS细胞在SGIV-GX感染2 h后，加入安全工作浓度的IQ（1000.0 μg/mL），28 ℃继续培养10 h。如图8所示，与仅接入SGIV-GX的对照组GS细胞相比，试验组GS细胞中VP19基因的相对表达量呈极显著下降趋势，而MCP基因的相对表达量无显著变化，表明IQ能抑制SGIV-GX在宿主细胞中的复制。

3 讨论

药用植物作为抗生素等化学药物的潜在替代品，具有天然来源、生态友好、活性化合物成分丰富及成本低廉等优点（Bulfon et al.，2015;李鹏飞等，2018）。近年来，具有天然免疫功能及抗病毒特性的天然产品在水产养殖中的应用研究也备受关注（Reverter et al.，2014;Beltrán et al.，2018）。根据药用植物提取物对鱼类的积极作用，将其添加至鱼类饲料中可有效促进鱼体生长早熟及增强防御机制和免疫应答能力（Galina et al.，2009;Newaj-Fyzul and Austin，2015;Vallejos-Vidal et al.，2016;Awad and Awaad，2017）。桑叶作为一味传统中药，富含IQ和槲皮素（Quercetin）等多种生物活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种药理作用。已有研究证实，桑叶提取物成分可有效改善鱼类糖脂代谢，提高免疫力及抗氧化能力，提高其生长性能，因此在水产养殖中具有极高的开发利用价值（Sheikhlar et al.，2014;杨继华等，2017;夏鑫等，2019）。桑叶提取物在抗病毒方面的应用也有研究报道。王辉等（2016）利用细胞病变减少法（CPE）检测发现，多个桑叶样品的有机萃取组分或水相组分对单纯疱疹病毒1型（HSV-1）、甲型流感病毒（FluA）及登革病毒2型（DV2）等多种病毒具有抑制作用，且抗病毒活性具有选择性，不同桑品种间的提取物成分抗病毒活性也存在一定差异。Kim等（2020）研究证实IQ能有效抑制人类疱疹病毒（HHV）的复制。本研究首次探究桑叶源化合物成分对SGIV的抑制作用，分析以桑叶提取物成分研发抗SGIV渔用药物的潜力，并系统研究IQ抑制SGIV感染的抗病毒机理，为研发绿色安全的抗病毒药物提供理论依据。

细胞系代替实验动物，已广泛用于免疫学、生物技术应用及各类病原菌发病机制研究等方面（Qin et al.，2006;Li et al.，2016，2017;Zhou et al.，2017;余庆等，2018）。GS细胞系来源于褐点石斑鱼的脾脏组织，是一种极易感染虹彩病毒的宿主细胞（彭超，2015）。本研究通过探究桑叶源化合物成分（MAE和IQ）对SGIV的潜在抗病毒作用，首先分析MAE和IQ对GS细胞的安全工作浓度，最终确定桑叶源化合物成分对GS细胞的最高安全工作浓度为：MAE≤10.0 mg/mL，IQ≤1000.0 μg/mL，即在安全工作浓度范围内桑叶源化合物成分对GS细胞并无明显的毒性作用。然后采用光学显微镜观察、实时荧光定量PCR及Q2-AFMP检测桑叶提取物抑制SGIV-GX感染的效果，Q2-AFMP是一种监测病毒感染情况的有效方法，其检测结果与实时荧光定量PCR检测结果基本一致。与实时荧光定量PCR相比，Q2-AFMP检测具有检测快速、易于操作、灵敏度高及特异性强等优点，对快速诊断病毒感染和筛选抗病毒药物具有较大的应用潜力（Yu et al.，2019a;Liu et al.，2020a）。桑叶源化合物成分（MAE和IQ）对SGIV-GX感染均具有极显著的抑制作用，且抗病毒效应具有剂量依赖性。黄筱钧（2014）研究发现桑叶对RSV有明显的抑制作用，既能抑制RSV的吸附和生物合成，又能直接杀死病毒。此外，有研究发现槲皮素和IQ在体外体内均能显著抑制流感病毒的复制，且IQ的抗病毒作用大于槲皮素（Kim et al.，2010;Thapa et al.，2012）。

在确定桑叶源化合物成分具有良好抗病毒效果的基礎上，进一步对其抗SGIV-GX感染的作用机制进行系统研究。本研究结果表明，与未经药物处理的SGIV-GX相比，经IQ处理后SGIV-GX对宿主细胞的感染能力极显著降低，提示IQ可能是通过破坏SGIV-GX的粒子结构而发挥抗病毒作用。病毒感染的主要步骤是先吸附于宿主细胞膜上，然后穿透宿主细胞膜在宿主细胞中复制，再从宿主细胞释放出来（Seisenberger et al.，2001;Fukuyama and Kawaoka，2011）。了解病毒与宿主细胞的相互作用机制，对研发新型高效的抗病毒及促抗病毒药物至关重要。因此，系统研究IQ在SGIV-GX感染GS细胞时的抑制作用机制，结果证实IQ通过干扰SGIV-GX对GS细胞的吸附、侵入和复制而发挥抗病毒作用，且以在病毒吸附和侵入阶段的抗病毒效果最显著。Gaudry等（2018）通过研究IQ对寨卡病毒的作用机制，证实IQ是通过阻止病毒颗粒进入宿主细胞而发挥抗病毒作用。因此，推测IQ与宿主细胞表面受体发生竞争性结合，阻止病毒吸附于宿主细胞表面，从而发挥抗病毒作用。

4 结论

MAE和IQ对SGIV具有良好的抗病毒效果，其中IQ能在病毒吸附、侵入和复制阶段发挥抗病毒作用，即桑叶源化合物成分在防治SGIV感染方面具有潜在的应用价值，可作为研发抗SGIV感染的有效药用成分。

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（責任编辑 兰宗宝）