联合检测BRD4、CXCR4及TGAb、TPOAb水平评估甲状腺癌切除术后患者预后的价值

王晓明，陈茜，吕金锋，张攀攀

（1.河南省焦作煤业（集团）有限责任公司中央医院普外二科；2.河南省焦作煤业（集团）有限责任公司中央医院手术室，河南焦作 454000）

甲状腺癌是常见内分泌系统恶性肿瘤,近年来发病率逐年升高，病理类型以分化型多见。手术切除是临床治疗甲状腺癌的主要方法,大部分患者手术切除后预后较良好,但也有部分患者会出现肿瘤复发或远处转移[1]。肿瘤分子标志物对甲状腺癌患者预后的评估逐渐成为临床研究的热点。研究指出[2]，甲状腺球蛋白抗体（Thyroglobulin antibody，TGAb）及抗甲状腺过氧化物酶抗体（Thyroid peroxidase antibody，TPOAb）时甲状腺自身抗原产生的抗体，是重要甲状腺免疫性炎症指标，其水平异常与甲状腺癌的发生、发展密切相关。研究证实[3]，溴结构域蛋白4（Bromodomain-containing protein-4，BRD4）及趋化因子受体4（Chemokine receptor-4，CXCR4）参与癌细胞的生长、侵袭、转移等。本研究选取我院行甲状腺切除术患者为研究对象，探讨BRD4、CXCR4、TGAb、TPOAb联合检测对其预后的评估价值。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 经医学伦理委员会批准，选取我院2016年1 月-2017年1 月收治的接受甲状腺癌切除术患者126例为研究对象。诊断标准：参照《甲状腺癌诊疗规范（2018年版）》[4]。纳入标准：⑴经病理学确诊为甲状腺癌并成功完成甲状腺癌切除术者；⑵年龄≥18 岁；⑶术前无远处转移病灶；⑷术前未接受放疗或化疗者。排除标准：⑴合并严重脏器功能障碍；⑵术前即存在明显甲状腺功能障碍；⑶既往存在颈部手术史者；⑷合并感染疾病、免疫、血液系统疾病者。126例患者中男51例，女75例；年龄26～67 岁，平均年龄60.23±4.38 岁；病理类型：乳头状癌73例，滤泡状癌33例，混合型癌20例。患者均签署知情同意书。所有患者持续随访3年。

1.2 方法 血清TGAb、TPOAb水平检测：所有患者术后1年采集空腹清晨静脉血5ml，4000r/min 离心5min，取上层血清保存于-70 摄氏度环境中待检。通过放射免疫法检测血清TGAb水平，通过化学发光法检测血清TPOAb水平，试剂盒分别购买于上海纪宁生物和上海恒雅生物科技，操作均严格遵循说明书进行。

肿瘤组织BRD4、CXCR4水平检测：所有肿瘤组织标本以10%甲醛固定，石蜡包埋，制成4μm 切片，苏木精伊红染色，采用免疫组化法进行染色，试剂盒购买于上海长岛生物科技。BRD4、CXCR4鼠抗人单克隆抗体分别购买于上海艾美捷科技有限公司和上海钰博生物科技有限公司。以磷酸盐缓冲液为阴性对照代替一抗，以已知阳性切片为阳性对照。

1.3 评价指标 以随访过程中核素显像检查结果为金标准，评估血清TGAb、TPOAb水平联合肿瘤组织BRD4、CXCR4水平对甲状腺癌切除术后复发或转移的价值。甲状腺癌复发或转移判定标准[5]：血清TGAb＞100 IU/ml 为阳性，血清TGAb≤100 IU/ml 为阴性；血清TPOAb＞50 IU/ml 为阳性，血清TPOAb≤50 IU/ml 为阴性；肿瘤组织BRD4、CXCR4水平根据染色强度分为4 级，0 分无色，1 分淡黄色，2 分棕黄色，3 分棕褐色，并于400 倍镜下观察着色细胞比例，着色细胞≤5%为0 分，6%≤着色细胞≤25%为1 分，26%≤着色细胞≤50%为2 分，着色细胞≥51%为3 分。根据染色强度评分和阳性细胞比例评分乘积判断性质，0～1 分为阴性，2 分以上为阳性。4 者联合诊断以其中任何一项阳性则为阳性。诊断准确度=（真阳性＋真阴性）/总例数×100%。采用ROC 曲线分析血清TGAb、TPOAb联合肿瘤组织BRD4、CXCR4对甲状腺癌切除术后复发或转移的价值。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0 软件统计分析，计量资料以()形式表示，采用独立样本t 检验，计数资料比较采用卡方检验，采用ROC 曲线分析预测价值。P<0.05 为比较差异有统计学意义。

2 结果

2.1 术后核素显像检查结果 126例行甲状腺癌切除术患者术后经核素显像检查确诊43例复发或转移，未复发或转移83例。

2.2 对甲状腺癌切除术后复发或转移的诊断准确率对甲状腺癌切除术后复发或转移的诊断准确率,血清TGAb 为79.37%，血清TPOAb 为78.57%，癌组织BRD4 为75.40%,癌组织CXCR4 为73.81%,血清TGAb、TPOAb联合癌组织BRD4、CXCR4为91.27%。见表1。

表1 对甲状腺癌切除术后复发或转移的诊断准确率

2.3 TGAb、TPOAb、BRD4、CXCR4联合对 甲状腺癌切除术后复发或转移的ROC 分析 经ROC 曲线分析四项指标对甲状腺癌切除术后复发或转移评估价值,血清TGAb 预测复发或转移的AUC 为0.754，特异度为62.79%，敏感度为87.95%；血清TPOAb 预测复发或转移的AUC 为0.753，特异度为65.12%，敏感度为85.54%；BRD4 预测复发或转移的AUC 为0.701,特异度为53.49%,敏感度为86.75%；CXCR4 预测复发或转移的AUC 为0.695，特异度为55.81%,敏感度为83.13%。TGAb、TPOAb、BRD4、CXCR4联合预 测复发 或转移的AUC 为0.895,特异度为83.72%,敏感度为95.18%。

表2 TGAb、TPOAb、BRD4、CXCR4联合对甲状腺癌切除术后复发或转移的ROC 分析

3 讨论

甲状腺癌是头颈部多发恶性肿瘤疾病,近年来在实体恶性肿瘤中发病率增长速度最快。甲状腺癌切除手术是目前临床治疗甲状腺癌的主要方法，但患者术后颈部淋巴结转移、肺部转移的风险较高，降低存活率。因此早期准确的评估甲状腺癌患者行切除术后复发或转移情况风险对临床制定适宜的治疗方案、提高患者生存率、提生生存质量意义重大。临床研究证实[6]，肿瘤标志物水平可为甲状腺的治疗、疗效评价以及预后评估提供重要参考。TGAb 是甲状腺滤泡柱状细胞的糖蛋白之一，主要存在于自身甲状腺免疫性疾病患者体内，是机体免疫功能紊乱的血清标志物[7]。TPOAb 则主要在甲状腺细胞的内质网与顶部存在,属于一类膜结合糖蛋白分子，以血红素为辅基，促进甲状腺激素的合成[8]。TGAb、TPOAb 均是自身免疫性甲状腺疾病发生和发展时产生的重要抗体,可作为其发生和发展的标志物。有研究证实[9]，自身免疫性甲状腺病是甲状腺癌发生的危险因素,也与甲状腺癌术后复发或转移关系密切。本文以核素显像检查结果为金标准，随访126例行甲状腺癌根治术患者术后复发或转移情况,并与患者血清TGAb、TPOAb检查结果比较，研究结果显示，血清TGAb对甲状腺癌根治术患者术后复发或转移的诊断准确率为79.37%,特异度为62.79%,敏感度为87.95%，血清TPOAb对甲状腺癌根治术患者术后复发或转移的诊断准确率为78.57%，特异度为65.12%，敏感度为85.54%。并经ROC 曲线分析显示血清TGAb、TPOAb对甲状腺癌根治术患者术后复发或转移的诊断曲线面积分别为0.754、0.753，可知血清TGAb、TPOAb 单个指标的诊断效能较低，还需参考其他指标。

趋化因子受体主要分为CC受体、XC受体、CX3C受体以及CXC受体4 个亚家族。CXCR4 属于CXC受体家族，与其特异性配体趋化因子基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)构成生物轴[10]。相关报道指出[11]，CXCR4/SDF-1生物周能激活多条信号通路,将肿瘤细胞肌动蛋白丝聚合，形成伪足进而促进血管局部形成，提高肿瘤细胞迁移、侵袭等生物学活性，促进肿瘤生长、转移和浸润。有学者研究发现[12],CXCR4水平越高，甲状腺肿瘤分化程度越低,其表达水平高是影响甲状腺肿瘤预后独立危险因素。但本文研究结果显示，肿瘤组织中CXCR4对甲状腺癌切除术后复发或转移诊断准确率为73.81%，ROC 曲线分析显示AUC 为0.695,特异度为55.81%,敏感度为83.13%，可知CXCR4 单独评估的效能不佳。BRD4 属于溴结构域蛋白家族,溴结构域蛋白家族已被证实在多种肿瘤中表达上调，与肿瘤细胞的生长、增殖、凋亡等生物学行为密切相关[13]。BRD4 是一类进化层面高度保守的蛋白，能识别、结合乙酰化赖氨酸残基，招募染色质调节蛋白、染色质重塑因子、转录因子等进而影响下游基因的转录过程，促进肿瘤细胞生长[14]。报道显示[15]，抑制甲状腺癌组织中BRD4表达可使癌细胞周期停滞，抑制肿瘤生长。本文结果中BRD4对甲状腺癌切除术后复发或转移诊断准确率为75.40%。本文分析4 项指标联合诊断甲状腺癌术后复发或转移的显示，诊断准确率为91.27%，经ROC 曲线分析，AUC 为0.895，特异度为83.72%，敏感度为95.18%。可知4 项指标联合评估甲状腺癌术后复发或转移的效能较好，用于预测甲状腺癌术后复发或转移价值较高。

综上所述，血清TGAb、TPOAb水平联合癌组织BRD4、CXCR4对甲状腺癌切除术患者术后复发或转移具有较高预测价值。