高浓度免疫球蛋白G对无机磷检测干扰及消除

刘肖瑛，林佩娜，欧阳伟庆，隋洪，黄慧瑾，朱雪云

（东莞康华医院检验科，广东 东莞 523000）

磷在人体中具有重要生理功能，其大部分以磷酸钙的形式沉积于骨骼中，是构成骨骼和牙齿的重要组成部分，只有少部分的磷存在于体液中。通常在血清中测定的是无机磷（P）。P的检测可用于肾脏疾病、甲状旁腺功能紊乱和维生素D 失衡的辅助诊断和治疗监测。因此其结果的准确与否具有重要的临床价值。众所周知，溶血、脂血、黄疸是影响生化反应的重要因素，但高球蛋白血症导致无机磷检测异常升高的关注度不高。特别是在多发性骨髓瘤患者中，血清中常出现异常高浓度的免疫球蛋白干扰生化免疫分析，而导致不正确的结果。工作中遇到1例无机磷结果异常升高的案例，初步推测是高浓度IgG 干扰了生化反应，通过稀释法来消除干扰，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本院住院患者1例（异常样本），男性，52 岁，诊断为多发性骨髓瘤(IgG-k型，DS III期A型，R-ISS II 期)，IgG：77.5g/L。

1.2 仪器与试剂 西门子ADVIA 2400 全自动生化分析仪及原厂配套试剂,R1 成分(硫酸)，R2(硫酸，钼酸铵)。强生VITROS5600 生化免疫分析仪及原厂配套测试剂，干片成分（对甲氨基苯芬硫酸盐，钼酸铵）。

1.3 方法 西门子ADVIA2400 生化分析仪上P 检测使用磷钼酸盐法，P在硫磺酸存在的情况下与钼酸铵发生反应形成非还原性的钼磷酸盐复合物，在340/658nm 下采用终点反应对其进行检测。ADVIA2400 机上检测原倍，生理盐水稀释2 倍、4倍、6 倍、10 倍、14 倍样本，强生VITROS5600 使用干化学法检测原倍样本[1,2]。

2 结果

2.1 P 反应曲线 采用西门子ADVIA2400及磷钼酸盐法试剂检测患者血清，获得样本反应曲线，样本在加入试剂1和样本后出现吸光度逐渐升高，正常对照无升高情况。见图1、图2。

图1 骨髓瘤患者样本反应曲线（原倍）

图2 正常患者反应曲线（原倍）

2.2 不同稀释梯度检测结果比较 样本原液和2倍稀释在ADVIA2400 上结果均受到干扰，反应曲线异常，结果偏高,与强生VITROS5600 结果比较稀释回收率分别为255.0%，和150.4%，ADVIA2400 稀释4 倍后结果良好，反应曲线正常，稀释回收率96.1%,结果可接受。

表1 不同稀释倍数样本检测结果

3 讨论

多发性骨髓瘤的异常浆细胞恶性增殖引起广泛浸润，浆细胞分泌的大量异常单克隆免疫球蛋白的沉积，可引起肾功能损害、骨质破坏、感染、贫血、出血、高钙血症、高黏滞综合征等各种不同的临床表现[3]。2017年王宁等报道，多发性骨髓瘤患者血清IgG 升高占34.88%，平均水平38.43g/L[4]，可见IgG水平升高不少见。血清中高浓度的IgG 可对多种指标干扰，包括无机磷、钙、总胆红素、淀粉酶、激素类等[5]。

磷钼酸紫外终点比色法使用简单、快速和稳定，为国内大多数实验室所采用。据报道[6]，高浓度的IgG对无机磷检测的影响原因是高浓度的IgG加入到R1 试剂后，试剂中的主要成分酸使反应体系达到了IgG的等电点，球蛋白出现沉淀，吸光度升高。与本室现象一致，从原倍反应曲线可见，在加入R1和样本后，反应曲线异常升高。高单克隆免疫球蛋白对测定结果的干扰，通常可以用稀释、沉淀、超滤对样本进行处理，或干化学检测等方法[7-9]。但沉淀和超滤需要购买特殊的试剂及设备，操作要求较高并且繁琐，且只能去除部分干扰，对于一般实验室操作比较困难。干化学试剂采用了多层膜技术，最上层包含有BaSO4,这一层除了产生白色的背景反射率，还可以保留高分子物质（超滤）、染料和造影剂等，很好的过滤掉高浓度IgG，去除干扰。干化学抗干扰较好，但对于没有干化学检测设备的实验室，使用连续稀释来对可疑的分析物进行分析，可能是较好的解决办法。在本案例中，通过不同梯度稀释，在4 倍稀释反应曲线正常，与干化学法对比稀释回收率达96.1%，结果可接受，证明该方法有效。但稀释法同样有缺点，比如稀释的基质效应，较大稀释倍数操作的准确性难以保证等。

综上所述，在工作中应多关注仪器报警信息，及时查看反应曲线，出现异常及时与临床沟通，结合患者的相关结果及临床信息进行综合分析，减低报告的错误率。但临床工作繁忙，从大量的报告中去识别仪器报警信息，对审核人员的要求极高，所以智能化识别尤其重要。本实验应用自动审核规则对仪器报警信息进行拦截，筛选出异常报告，有针对性查看反应曲线，提高工作效力，提升报告质量，同时减轻工作压力。