VEGF、TGF-1在大肠癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

陈玲云，汪艳丽，郑玉英，赵宝生

（新乡医学院第一附属医院手术室，河南 新乡 453100）

大肠癌病因与遗传、大肠腺瘤以及生活方式有关，发病人群以老年人群为主，男女比例约为1.65:1[1]。患者初期症状不显，随之肿瘤进展，患者将出现腹痛，便血，腹部可触肿块以及消瘦等症状，肿瘤转移后可引发受累器官病理改变[2]。手术是本病的主要治疗方式，其在病灶清除，延长患者生存期，提升患者生活质量等方面具有显著价值。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一种具有极高特异性的促血管内皮细胞生长因子，转化生长因子1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）是多肽细胞因子之一，是细胞增殖、分化以及牵引的重要参与因子[3]。为分析VEGF、TGF-β1在大肠癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系，本文选取我院保存的82例大肠癌组织标本进行研究，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年1 月-2015年12 月我院保存的大肠癌组织标本82例，其中男性51例，女性31例；年龄34～69 岁，中位年龄59.00 岁；结肠癌47例，直肠癌35例。同时选取癌旁组织（距癌边缘＞5cm）作为对照，纳入标准：⑴在我院接受大肠癌根治术；⑵术前未行放化疗等抗肿瘤治疗；⑶临床随访资料保存完整。排除标准：⑴伴有其他恶性肿瘤；⑵有远处转移。

1.2 实验方法对两组样本进行5μm 切片，将切片置于载玻片上，将烤片机设置为60℃，烤片2h，选用乙醇脱蜡水化，PBS 缓冲液浸泡10min，枸橼酸盐缓冲液进行抗原修复，PBS 洗涤2 次，3% H2O2灭活30 min，PBS 洗涤2 次，山羊血清封闭2h，选用VEGF、TGF-β1 抗体一抗（试剂盒由上海生工提供），4 ℃温箱冷藏过夜，PBS 洗涤2 次，选用通用型抗体IgG 抗体进行二抗，置于温箱内于室温环境下孵化30 min，PBS 洗涤2 次，DAB 显色2 次，苏木素复染，乙醇脱水，待样本自然晾干后，封片，上海无陌光学仪器厂WMS-1030 双目生物显微镜镜检。

1.3 结果判断 VEGF、TGF-β1 主要表达于细胞胞浆中，呈棕黄色；采用半定量积分法，随机选取5个高倍镜视野，计数500 个细胞，对阳性细胞比例和染色强度进行评分，其中阳性细胞比例＜5%为0分，5%～10%为1 分，11%～50%为2 分，＞50%为3分，染色强度：无着色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。两者得分之和≥3 分为阳性表达。

1.4 统计学处理 统计分析采用SPSS19.0 软件，计数资料比较采用χ2检验，相关性采用Spearman 秩相关分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 大肠癌和癌旁组织VEGF、TGF-β1表达比较大肠癌组织VEGF、TGF-β1表达阳性率明显高于癌旁组织（P＜0.05），见表1和图1。

图1 免疫组化染色图

表1 大肠癌和癌旁组织VEGF、TGF-β1表达比较n（%）

2.2 VEGF、TGF-β1表达与临床病理特征关系 肿瘤大小＞3cm、TNM 分期Ⅲ期、中低分化、有淋巴结转移患者VEGF、TGF-β1表达阳性率明显高于肿瘤大小≤3cm、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移患者（P＜0.05）。见表2。

表2 VEGF、TGF-β1表达与临床病理特征关系n（%）

2.3 相关性分析 大肠癌组织VEGF与TGF-β1表达呈正相关（rs=0.783，P＜0.05），见表3。

表3 相关性分析

2.4 是否复发转移患者VEGF、TGF-β1表达比较所有患者随访3年，其中复发转移患者29例，未复发转移患者53例，复发转移与未复发转移患者一般临床资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表4。复发转移患者VEGF、TGF-β1表达阳性率明显高于未复发转移患者（P＜0.05），见表5。

表4 复发转移与未复发转移患者一般临床资料比较n（%）

表5 复发转移与未复发转移患者VEGF、TGF-β1表达比较n（%）

3 讨论

新生血管是肿瘤发生、浸润、转移的重要基础，而肿瘤血管生成是由多因子共同作用的结果，包括降解血管细胞外基质，促进血管内皮细胞迁移、分裂，并增强毛细血管分化能力等,而VEGF 是这些生理过程的重要促进因子[4,5]。既往研究显示，如肿瘤无新生血管,其瘤体将因无法获得足够的血供及营养而停滞于2mm 大小，并进入休眠状态，临床表现为原位癌[6]。随着肿瘤进展，瘤体直径超过2mm，此时瘤体组织将合成VEGF，并增强血管通透性，促进血管新生，为肿瘤细胞生长提供丰富营养，并转运代谢物，同时还可促使瘤体细胞借助体液循环系统转移至其他区域[7]。本组研究中，大肠癌组织VEGF表达阳性率明显高于癌旁组织，表明VEGF 是大肠癌的重要参与因子。大量研究显示，VEGF 可通过刺激血管新生，增强毛细血管通透性，诱使基质降解等方式来增强肿瘤增殖、浸润以及转移[8,9]。本组研究中，肿瘤大小＞3cm、TNM 分期Ⅲ期、中低分化、有淋巴结转移患者VEGF表达阳性率明显高于肿瘤大小≤3cm、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移患者，表明VEGF 高表达可增强肿瘤血管通透性，并增强肿瘤细胞转移能力，增强疾病浸润及转移。

TGF-β1 是TGF-β 家族成员之一，与受体TGF-βP 相互结合才能发挥相关细胞学功能[10]。TGF-β1 是TGF-β 信号通路的重要节点，并因此影响细胞增殖、分化、迁移以及凋亡。Smads蛋白是TGF-β 家族的特异性下游靶向因子，是TGF-β 生物学信号的重要转导因子[11]。TGF-β 信号通路起始于TGF-β与其受体的相互结合并激活，并诱导TGF-β1蛋白激酶活化,与下游的Smad2、Smad3 转录因子作用并生成复合物进入细胞核内DNA 结合区，调节靶基因表达[12]。TGF-β/Smads 信号系统的任何一个环节出现异常均可能导致肿瘤发生[13]。本组研究中，大肠癌组织TGF-β1表达阳性率明显高于癌旁组织，表明异常表达的TGF-β1与大肠癌密切相关。在肿瘤早期，TGF-β1 可通过调控细胞周期来促其凋亡[14]。但随着TGF-β1表达水平的增强，其对肿瘤的发展将起到促进作用，方式主要为：肿瘤细胞合成的TGF-β1 可诱导阻断免疫细胞增殖分化；TGF-β1 还可激活不依赖Smad的Rsa/MAPK通路，JNK通路等，并促进肿瘤发展[15]；TGFβ1 还可通过诱导细胞黏附，促进细胞外基质合成，刺激血管生长因子表达等方式来促进肿瘤浸润、转移[16]。本组研究中，肿瘤大小＞3cm、TNM 分期Ⅲ期、中低分化、有淋巴结转移患者TGF-β1表达阳性率明显高于肿瘤大小≤3cm、TNM 分期Ⅰ～Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移患者，表明TGF-β1 或可用于判断大肠癌患者分期、分化以及淋巴结是否转移。

相关性研究显示，大肠癌组织VEGF与TGFβ1表达呈正相关，表明VEGF与TGF-β1 间可能存在协同效应，共同参与并促进了肿瘤的发生、发展。本研究还发现，复发转移患者VEGF、TGF-β1表达阳性率分别为96.51%和93.10%，明显高于未复发转移患者，这也表明VEGF与TGF-β1 是大肠癌转移复发的重要参与因子，对大肠癌术后临床预后判断具有重要参考价值。

综上所述，VEGF、TGF-β1 是大肠癌的重要参与因子，其在大肠癌组织表达上调，且与肿瘤临床病理特征及术后复发转移情况密切相关，对大肠癌病情发展、预后评价及指导临床基因治疗均具有重要价值。